全 文 ：　　　　 天然产物研究与开发　 　　　　　
　　　　　　　　　　 NAT URAL PRODUCT RESEARCH AND DEVELOPMENT　 2004　Vol.16　No.4
　
　
　
　
　　收稿日期:2003-12-06　　　接受日期:2004-03-01
　＊通讯作者 Tel:86-311-6266406;E-mail:meidong@hebmu.edu.cn
野鸦椿酯类化合物抗炎症活性与结构的研究
董　玫1＊　张秋霞1 　广田满2
(1.河北医科大学病理生理教研室　石家庄　050017;
2.信州大学农学部生理活性化学教室　日本长野县伊那市)
摘　要　从野鸦椿(Euscaphis japoneca Kantiz)枝叶的甲醇提取物中分离得到 3个结构相似的酯类化合物 ,通
过波谱分析鉴定为 7-hydroxy-2-octen-5-olide(Euscapho lide , 1), 3 , 7-dihydroxy-5-octanolide(2), 和 methy l 5 , 7-
dihydroxy-2(Z)-octenoate(3)。化合物1和 3具有较强的抗炎症活性 ,而结构相似的化合物2却不显示抗炎症
活性;通过对这些化合物及诱导体的抗炎症活性的测定 , 初次确定野鸦椿酯类化合物的抗炎症活性与其结构
中的α、β 不饱和羰基密切相关 ,而且有可能是通过抑制体内的环氧酶的活性来实现抗炎症作用的。
关键词　野鸦椿酯;炎症;诱导体;化学结构;环氧酶
STUDYON THE ANTI-INFLAMMATORY
AND CHEMICAL STRUCTURE OF EUSCAPHOLIDE
DONG Mei1＊ ,ZHANG Qiu-xia1 ,HIROTA Mitsuru2
(1.Department of Pharmacolgy , the School of Basic Medical Sciences , Hebei Medical University , Shijiazhuang　050017 , China;
2.Department of Bioscience and Biotechnology , Faculty of Agriculture , Shinshu University , Nagano　399-4598 , Japan)
Abstract　The methanolic ex tract of Euscaphis japoneca Kant iz yielded three anti-inflammatory
compounds:7-hydroxy-2-octen-5-olide (Euscapholide , 1), methyl 5 , 7-dihydroxy-2(Z)-octenoate
(2)and methy l 5 ,7-dihydroxy-2(Z)-octenoate(3), and their st ructures were elucidated from the
spect roscopic data.The compound(1)and (3)could suppress inf lammation , respectively.But the
Anti-inflammato ry activity of compound 2 was 0%.Through the Anti-inflammatory activity of
theinduced-compound(1) s measured , this fi rst paper reported that betw een anti-inflammatory ac-
tivity of Euscapholide αand β unsaturated keton of Euscapholide had a inseparable relation.The
compounds can inhibit body of cy clooxygenase to realize i ts anti-inf lammatory effect.
Key words　Euscapholide;inflammato ry;induced compound;chemical st ructure;carrageenin
　　野鸦椿(Euscaphis japoneca Kant iz)属省沽油科
野鸦椿属植物 ,落叶小乔木 ,分布于我国的暖温带地
区及日本的关东地区 。作者对该植物枝叶部分的甲
醇提取物进行了抗炎症活性筛选 ,结果表明有明显
的抗炎症活性。因此 ,作者对该植物进行了系统的
化学成分研究及抗炎症的活性筛选 。本文报道从其
枝叶甲醇提取物的乙酸乙酯部分分离得到的 7-hy-
droxy-2-octen-5-olide (1)[ 1] , 3 , 7-dihydro xy-5-octan-
olide(2)[ 2] ,和 methyl 5 ,7-dihydroxy-2(Z)-octenoate
图 1　化合物 1 ～ 5的结构
Fig.1　The structures of compounds 1 ～ 5
(3)[ 2](图 1)3个结构相似的酯类化合物及化合物 1
的合成的诱导产物 7-oxo-2-octen-5-olide (4)和 7-
acetoxy-2-octen-5-olide (5)(图 1)的抗炎症活性 ,并
290
且初次确定野鸦椿酯类化合物抗炎症活性的必需结
构是α、β不饱和羰基 ,而且推测可能是通过抑制体
内的环氧酶的活性来实现抗炎症作用的 。
1　材料 、试剂与仪器
1.1　材料
野鸦椿:新鲜枝叶于 1997年 9月采自日本和歌
山县京都大学亚热带植物研究所 ,留存样品由京都
大学亚热带植物研究所的梅本信也先生鉴定 。
实验动物:SD-大鼠 ,体质量 200 ～ 250 g , 由日
本 chaaruzi riba会社提供。
1.2　试剂
所用化学试剂为日本市场销售分析纯化学试
剂;κ-carrageenan Zushikagaku Labo ratory PICNIN-
B;Lipoxigenasea为 Sigma公司试剂 Type1-B产品。
1.3　仪器
质谱用 JM S 700 型质谱仪测定;核磁共振用
DR500FT 型核磁共振仪测定 ,以 TMS 为内标;熔点
用MP-S3型熔点仪测定;比旋光度用 DIP-100T 型
旋光仪在 25 ℃测定;UV 用M INI-1240型 UV光度
计测定;红外光谱用 IR-810S红外波谱仪测定 ,溴化
钾压片;色谱用硅胶用日本和光纯药工业生产的
Wakogel C-300产品 。大鼠足垫肿胀用 7140型足容
积测定装置(UGO BASILE)测定 。
2　实验方法
2.1　诱导化合物的合成
7-oxo-2-octen-5-olide (4)的制备:称取 13 mg 的
化合物 1 ,用 1 mL 的丙酮溶解 ,冷却至0 ℃后 ,再加
入琼斯试剂 ,搅拌30 min;加入1滴异丙醇将剩余的
铬酸进行分解 ,再用 5 mL 的乙酸乙酯萃取 3次;将
乙酸乙酯层用水洗涤 3次 ,用无水硫酸镁脱水后 ,过
滤;蒸馏除去滤液中的乙酸乙酯 ,得到油状的化合物
7-oxo-2-octen-5-olide (5 mg ,收率为 40%)。
7-acetoxy-2-octen-5-olide(5)的制备:称取 9 mg
的化合物 1 ,用 1 mL 的无水吡啶和 1 mL 的冰醋酸
溶解 ,室温放置 20 h 。用 TLC 方法确认反应进行
后 ,加入碎冰块 ,停止反应;用乙酸乙酯萃取 3次;乙
酸乙酯层中顺次加入少量的饱和碳酸氢钠水溶液 、
5%的氯化氨水溶液和水进行洗涤 ,用无水硫酸镁脱
水后 ,过滤 ,浓缩后 ,得到油状的化合物 7-aceto xy-2-
octen-5-olide (10 mg ,收率为 96%)。
2.2　脂氧酶活性抑制实验
将 2.75 mL 0.2 M (pH 6.1)的磷酸钠缓冲液 、
100μL 10 mM 的亚油酸钠水溶液 、100 μL 的被试
物的 4%DMOS 水溶液(10 μg/mL)和 50 μL 的脂
氧酶(6.9×103 units/mL)加到石英杯中 ,迅速搅拌
均匀后 ,用 UV 光度计测定 234 nm 的光吸收值 ,并
比较 10 s至 40 s的光吸收变化量 ,计算被试物对脂
氧酶的抑制活性。用以下公式计算抑制活性[ 3] 。
抑制活性(IE)=1-Vs/Vo
Vs:加入被试物时的吸光度的变化率
Vo:未加被试物时的吸光度的变化率
2.3　大鼠足垫肿胀抑制实验
将 6 周龄雄性大鼠 30 只 ,随机分为空白对照
组 、阳性对照(吲哚美辛 ,30 mg/kg)组 、给被试物组
(30 mg/kg ,4组)共 6组 ,每组 5只。各给药组均一
天一次灌胃给药 ,给药容积 1 mL/100 g 体重 ,连续
4 d。第4 d给药后 1 h ,将大鼠的右后足垫皮下注射
0.1 mL 1%的角叉菜胶 ,诱导急性炎症 。在注射角
叉菜胶后的 30 min 、1 h 、2 h 、3 h 、4 h 和 5 h 分别测
定大鼠足体积 ,并以容积法测量致炎前致炎后足垫
容积(mL),以其差值表示足垫肿胀度[ 4] 。
3　实验结果
3.1　化合物 1的诱导体的结构鉴定
7-Oxo-2-octen-5-ol ide(4)　HR-EIMS m/ z
(M +):Calcd for C8H10O3 154.0629 , Found:154.
0630;EIMS (rel.int., %):154(M+ ,18),126(28),
112(41), 97(100), 94(77), 68(42);IRνmax(KBr)
cm
-1:1710 ,1380 ,1240 ,1080;1H NMR δH(CDCl3):
2.23(3H , s),2.34(1H , dt , J =2.4 , 11.7 Hz), 2.53
(1H , ddd , J =5.2 ,5.8 , 18.3 Hz), 2.74(1H , br.d , J
=6.8 , 12.7 Hz), 3.05(1H , br.d , J =5.8 , 17.2
Hz),4.89(1H ,m), 6.02(1H , d , J =9.6 Hz), 6.98
(1H , dt , J =5.8 , 9.6 Hz);13C NMR δC(CDCl3):
204.8(C), 163.7(C),144.8(CH), 121.4(CH),73.6
(CH),50.7(CH2),30.9(CH2),29.2(CH3)。
7-Acetoxy-2-octen-5-olide(5)　HR-EIMS m/ z
(M+):Calcd for C10H14O4198.0892 , Found:198.
0892;EIMS (rel.int., %):198(M+ , 0.2), 128
(21), 112(100), 68(81);IRνmax(KBr)cm-1:1710 ,
1360 ,1240 , 1080;1H NMR δH(CDCl3):1.31(3H ,d ,
J =6.1 Hz),1.84(1H , m),2.05(3H , s), 2.20(1H ,
m), 2.32(1H ,m),2.45(1H ,m),4.52(1H ,m), 5.13
2912004　Vol.16　No.4 董　玫等:野鸦椿酯类化合物抗炎症活性与结构的研究 　　　　　　　　　
(1H ,m),6.02(1H ,d , J =9.7 Hz), 6.91(1H , ddd , J
=2.6 , 3.7 , 9.7 Hz);13C NMR δC(CDCl3):170.6
(C), 163.9(C), 144.7(CH), 121.5(CH), 75.0
(CH), 67.2(CH), 40.9(CH2), 29.3(CH2), 21.3
(CH3), 20.3(CH3)。
3.2　野鸦椿酯类化合物及诱导化合物的脂氧酶抑
制活性
野鸦椿新鲜枝叶甲醇提取物的乙酸乙酯部分分
离得到的 3个结构相似的酯类化合物1 ～ 3及化合物
1的诱导体4和 5的脂氧酶活性抑制活性研究结果如
表 1所示 。
表 1　野鸦椿酯类化合物及诱导体对脂氧酶的抑制活性
Table 1 　 Inhibitory Effects of Compounds and Its Related
Compounds from E .japoneca tow ard Lipoxygenase
化合物
Test compound
脂氧酶的抑制活性
IE %(±SE)
IC50
(μg/mL)
7-Hydroxy-2-octen-5-olide(1) 19(±0.020) >50
3 , 7-Dihydroxy-5-octanolide(2) 5(±0.015) >50
Methyl 5 , 7-dihydroxy-2 (Z)-
octenoate(3) 14(±0.036) >50
7-Oxo-2-octen-5-olide(4) 11(±0.056) >50
7-Acetoxy-2-octen-5-olide(5) 17(±0.025) >50
Quercetin 58(±0.009) 9.7
Inhibitory activity at a concent ration of 10μg/mL of a test sample.Each
value is the mean of three experiment.
实验结果表明:野鸦椿酯类化合物1～ 3及化合
物1 的诱导化合物 4 和 5对脂氧酶的抑制活性很
低 ,分别为 19%、5%、14%、11%和 17%, IC50均大
于50 μg/mL ,而阳性对照的 quercetin却显示较强
的抑制活性 ,抑制率为 58%,且 IC50为 9.7μg/mL。
3.3　野鸦椿酯类化合物及诱导化合物对大鼠足垫
肿胀抑制
野鸦椿酯类化合物1 、2及化合物 1的诱导体5对
大鼠足垫肿胀抑制实验结果如图 2所示 。
实验结果表明:空白对照组的大鼠 ,足垫注射角
叉菜胶后 2 h ,因足垫肿胀 ,足体积增加约 1.4倍;而
预先给与阳性对照药 indomethacin后 ,大鼠足垫肿
胀 ,足体积增加未超过0.3倍。阳性对照药 indom-
ethacin主要是通过抑制花生四烯酸代谢途径中的
环氧酶而显示较强的抗炎症活性的 。而预先给与野
鸦椿提取分离得到的化合物 1 以及其诱导产物 5 ,
大鼠足垫肿胀 ,足体积增加未超过 0.6倍 ,但是预先
给与化合物 2后 ,大鼠足垫肿胀与空白对照的大鼠
足垫肿胀几乎相同。
图 2　野鸦椿酯类化合物对角叉菜胶诱导的大鼠足垫肿
胀的抑制活性
Fig.2　Anti-inflammatory activity on car rag eenin induced
rat paw edema with iso lated compounds from E.
japanica(x±s , n=5)
＊＊:p<0.01υs control
4　讨论
省沽油科野鸦椿属植物的野鸦椿是野生的落叶
小乔木 , Takeda 先生于 1998年首次报道了从野鸦
椿植物的叶中提取 、分离得到 Euscapholide ,但是未
见有关于其药理活性的报道 。作者对该植物枝叶的
甲醇提取物进行了系统的分析 ,得到了 Euscapholide
(1)及结构相似的化合物 3 ,7-dihydroxy-5-octanolide
(2)和 methy l 5 , 7-dihydroxy-2(Z)-octenoate(3),并
进行了抗炎症活性的研究 ,研究结果表明 ,化合物 1
和 3显著地抑制由κ-carrageenan诱导的炎症 ,而仅
在 3位碳上连接羟基的化合物(2)却不显示抗炎症
活性。化合物1的铬酸氧化得到的氧化产物 7-Oxo-
2-octen-5-olide(4)和酯化产物 7-Acetoxy-2-octen-5-
olide(5)也显著地抑制由 κ-carrageenan 诱导的炎
症 。由此可确定 ,由此可确定野鸦椿酯类化合物的
抗炎症活性与 7 位的羟基无关 ,抗炎症活性的必须
结构是α、β不饱和羰基 。
本实验还对野鸦椿酯类化合物的抗炎症机制进
行了初步的探讨。炎症是机体对外界不良刺激的一
种防御反应。当受外界刺激时 ,在花生四烯酸代谢
过程中 ,在环氧酶和脂氧酶作用下 ,花生四烯酸除生
成具有扩张血管 、增加白细胞趋化性的前列腺素外 ,
还与其他致炎物质如缓激肽 、组胺 、LTs等有协同作
用 ,使炎症进一步加重 。研究结果表明 ,这些化合物
292　　　　　　　　　 天然产物研究与开发 2004　Vol.16　No.4
对于脂氧酶的抑制活性很低 ,但是对于角叉菜胶诱
导的急性炎症除化合物 2 外 ,均显示较强的抑制活
性 ,由此推测野鸦椿酯类化合物可能是通过抑制体
内的环氧酶的活性来实现抗炎症作用的 。野鸦椿酯
类化合物的抗炎症机理有待更深入地探讨。
参考文献
1　 Takeda Y , Okada Y ,Masuda T , et al.Euscapholide and its
glucoside from leaves of Euscaphis japonica.Phy tochem-
istry , 1998 , 49(8):2565-2568
2　 董玫 ,Hiro ta M itsuru.野鸦椿的植物化学成分研究.天然
产物研究与开发 , 2002 , 14(4):34-37
3　 Axcelrod B , Cheesbrough TM , Laakso S.Lipoxygenase
from Soybeans.Methods in Enzymology , 1981 , 71:441-451
4　 徐叔云 ,卞如濂 , 陈修.药理实验方法学 第二版.北京:
人民卫生出版社 , 1991.714-719
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