全 文 ： ·234· Chin JMAP, 2013 March, Vol.30 No.3 中国现代应用药学 2013 年 3 月第 30 卷第 3 期
链的 N 原子上引入一个乙基时，得到的化合物 9d
对 K562 细胞的抑制活性大大提高，IC50 值为 1.25
μmol·L1，与阳性对照紫杉醇相当。这与前期合成
的 γ-咔啉类衍生物结果相一致[6]。比较化合物 8b、
9b 和 17c，化合物 9b 对两种受试细胞株的活性较
强；比较化合物 8d、9c 和 17b，三者对 K562 细
胞的活性相当，而化合物 9c 对 KB 细胞的活性最
强；由此可见，当侧链为磺酰胺基时，6-取代 β-
咔啉类衍生物的活性最强。
4 结论
从体外抗肿瘤活性结果可以看出，所合成的
15 个目标化合物对 2 种受试细胞株均具有一定的
抑制能力，部分化合物显示出与阳性对照紫杉醇
相当或更佳的肿瘤细胞抑制活性，有望对其通过
进一步结构修饰得到理想的抗肿瘤先导化合物。
相关的研究工作正在进行中。
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收稿日期：2012-07-19




香青兰总黄酮对哮喘大鼠气道炎症及高反应性的改善作用

康小龙 1，何承辉 2*，邢建国 2，闫丽丽 2(1.新疆医科大学附属中医医院，乌鲁木齐 830000；2.新疆维吾尔自治区药物研究所，乌
鲁木齐 830004)

摘要：目的 研究香青兰总黄酮对哮喘大鼠气道炎症及高反应性的影响。方法 采用氨水引咳实验和磷酸组胺-氯化乙酰
胆碱引喘实验观察香青兰总黄酮的镇咳、平喘作用；同时观察香青兰总黄酮对哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细
胞分类计数和离体气管螺旋条张力的影响。结果 香青兰总黄酮中、高剂量能延长小鼠咳嗽潜伏期，减少小鼠 2 min 内
咳嗽次数(P<0.05或 P<0.01)，延长豚鼠引喘潜伏期(P<0.01)；降低哮喘大鼠血清卵白蛋白特异性 IgE水平(P<0.01)，减少
BALF中嗜酸性粒细胞数量(P<0.01)及减小离体气管螺旋条张力(P<0.05或 P<0.01)。结论 香青兰总黄酮具有一定镇咳、
平喘作用；可改善哮喘气道炎症及高反应性。
关键词：香青兰总黄酮；哮喘；气道炎症；高反应性
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2013)03-0234-05

基金项目：新疆维吾尔自治区自然科学基金(2011211A098)
作者简介：康小龙，男，博士，主管药师 Tel: (0991)5853365 E-mail: kangxiaolong_163@163.com *通信作者：何承辉，女，硕士，
助理研究员 Tel: (0991)2318172 E-mail: 408705201@qq.com
DOI:10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2013.03.014
中国现代应用药学 2013 年 3 月第 30 卷第 3 期 Chin JMAP, 2013 March, Vol.30 No.3 ·235·
Inhibitory Effects of Moldavica Total Flavone on Airway Inflammation and Hyperresponsiveness in
Ovalbumin-induced Asthmatic Rats

KANG Xiaolong1, HE Chenghui2*, XING Jianguo2, YAN Lili2(1.Xinjiang Traditional Medical Hospital, Urumqi
830000, China ; 2.Xinjiang Medicine Research Institute, Urumqi 830004, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To investigate the effects of moldavica total flavone on airway inflammation and hyperrespon-
siveness in ovalbumin-induced asthmatic rats. METHODS The cough model in rats and asthma model in cavies were made by
using ammonia water and histamine-acetylcholine chloride to observe the antitussive and antiasthmatic actions. The inhibitory
effect on airway inflammation and hyperresponsiveness in ovalbumin-induced asthmatic rats were observed. RESLUTS The
moldavica total flavone in middle and high dose group could extend the cough latent period in rats(P<0.05 or 0.01) and gasp
latent period in cavies (P<0.01), decreased the levels of serum ovalbumin specific IgE (P<0.01) and eosinophil counts in
bronchoalveolar lavage fluid (P<0.01), attenuate the contraction of tracheal smooth muscle in ovalbumin-induced asthmatic rats
(P<0.05 or 0.01). CONCLUSION Moldavica total flavone has antitussive and antiasthmatic actions and may inhibit ariway
inflammation and hyperresponsiveness in asthma.
KEY WORDS: moldavica total flavone; asthma; inflammation; hyperresponsiveness

哮喘是一种由肥大细胞、嗜酸性粒细胞(EOS)
和 T 淋巴细胞等多种炎症细胞参与的，以气道慢
性炎症和气道高反应性为主要特征的疾病[1]。据
《维吾尔药志(上)》记载 [2]，唇形科植物香青兰
(Dracocephalum moldavica L.)具有镇咳、袪痰、平
喘作用，在维吾尔医和民间用于治疗气管炎已有
几百年的历史。本课题组从香青兰中提取的有效
部位香青兰总黄酮，拟用于治疗支气管哮喘。本
实验观察了香青兰总黄酮镇咳、平喘作用及对哮
喘大鼠气道炎症及高反应性的影响，旨在为新药
开发提供药效学依据。
1 材料与方法
1.1 动物
清洁级昆明种小白鼠，体质量 18~22 g，清洁
级豚鼠，体质量 200~300 g，清洁级 SD 大鼠，体
质量 180~220 g，以上动物均由新疆实验动物研究
中心提供，实验动物合格证号：SCXK(新)2003-
0002。
1.2 药材与试剂
香青兰药材购自安徽省亳州市德昌药业有限
公司，经新疆维吾尔自治区药物研究所何江研究
员鉴定为正品。卵白蛋白(OVA，Sigma 公司，批
号：1001115808)；氢氧化铝(西安化学试剂厂，批
号：080912)；磷酸组胺(上海三杰生物技术有限公
司，批号：080901)；氯化乙酰胆碱(上海三爱思试
剂有限公司，批号：20071022)；大鼠 OVA 特异性
IgE(上海将来试剂公司，批号：201204)。
1.3 仪器
超声雾化器(江苏鱼跃医疗设备公司)；FT-100
生物张力传感器(成都泰盟科技有限公司)。
1.4 方法
1.4.1 香青兰总黄酮制备方法 香青兰药材经
40%乙醇回流提取 1 次，3 h，提取液用 HPD100
型大孔吸附树脂纯化，70%乙醇洗脱，浓缩干燥，
得香青兰总黄酮，经 UV 测定，总黄酮含量为 60%
以上。
1.4.2 氨水引咳实验 取昆明种小白鼠 40 只，♀
♂各半，随机分为空白对照组(给予生理盐水)，香
青兰总黄酮低(130 mg·kg1·d1)、中(260 mg·kg1·d1)、
高(520 mg·kg1·d1)剂量组，各组小鼠连续灌胃给药
6 d，末次给药 1 h 后，将每只小鼠置于玻璃钟罩
内(容量为 500 mL)，罩内放置含 25%~28%的氨水
0.2 mL，随即观察和记录小鼠咳嗽潜伏期和 2 min
内发生咳嗽反应的次数。
1.4.3 磷酸组胺和氯化乙酰胆碱引喘实验 取健
康豚鼠 70 只，♀♂各半，将豚鼠放 1 000 mL 烧
杯中，并使豚鼠接受恒流 0.4%磷酸组胺-2%氯化
乙酰胆碱(1 2)∶ 刺激 15 s，观察引喘潜伏期(从喷雾
开始到哮喘发作、呼吸困难、直至抽搐跌倒的时
间)，挑出潜伏时间在 120 s 内的豚鼠备用。把筛
选出的豚鼠随机分为溶剂对照组、氨茶碱组(50
mg·kg1·d1)、香青兰总黄酮低(80 mg·kg1·d1)、中
(160 mg·kg1·d1)、高剂量组(320 mg·kg1·d1)，共
5 组、每组 8 只，实验豚鼠禁食不禁水 10 h，然
后各组豚鼠灌胃给药，连续给药 6 d，最后一次给
药 1 h 后，使豚鼠接受恒流 0.4%磷酸组胺-2%氯
化乙酰胆碱(1 2)∶ 刺激 15 s，观察豚鼠引喘潜伏期。
1.4.4 对哮喘大鼠血清 OVA 特异性 IgE、肺泡灌
·236· Chin JMAP, 2013 March, Vol.30 No.3 中国现代应用药学 2013 年 3 月第 30 卷第 3 期
洗液(BALF)中白细胞分类及气管张力的影响
1.4.4.1 动物分组及哮喘模型的建立 清洁级 SD
大鼠 60 只，♀♂各半，随机分为 6 组，空白对照
组，哮喘模型组，地塞米松组，香青兰总黄酮低、
中、高剂量组，每组 10 只。采用 OVA 致敏法制
备动物模型。除空白组外，其它 5 组动物第 1，2，
3 天用含 OVA 10 mg、Al(OH)3 干粉 100 mg 的生理
盐水混悬液 l mL 腹腔注射致敏，第 8 天重复致敏
1 次，第 15 天开始除空白对照组外各组动物超声
雾化 1% OVA 进行激发，约 30 min·次1，于每天
早上 8~9 时进行。直至大鼠出现哮喘样发作，共 4
周。雾化时见大鼠出现烦躁不安、打喷嚏、大小
便失禁、抓耳朵、紫绀等症状，说明哮喘模型建
立成功。第 5 周起各给药组分别灌胃给予香青兰
总黄酮 90，180，360 mg·kg1·d1，地塞米松 1
mg·kg1·d1，空白对照组及哮喘模型组灌胃给予生
理盐水，每日一次，共 30 d。
1.4.4.2 血清 OVA 特异性 IgE 检测 末次给药后
1 h，用 2%戊巴比妥钠(40 mg·kg1)腹腔注射麻醉，
各组大鼠采集股静脉血 4 mL 室温静置 2 h，以
4 000 r·min1 的速度离心 10 min，取血清，放置
20 ℃低温冰箱中保存待检。采用双抗体夹心法
(ELISA)测定血清中 OVA 特异性 IgE 含量。按
IgE-ELISA 检测试剂盒说明进行操作。
1.4.4.3 支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞分类
计数 末次给药后 1 h，用 2%戊巴比妥钠(40
mg·kg1)腹腔注射麻醉，然后消毒无菌分离气管，
夹闭右主支气管，剪开气管用相应导管插入左主
气管内，从导管注入 4 mL 生理盐水灌洗左肺，反
复 3 次，回收率为 60%~70%，回收灌洗液即为
BALF，1 000 r·min1 离心 10 min，取沉淀涂片固
定，瑞姬氏染液染色，在光镜下计数 100 个白细
胞进行分类。比较各组 BALF 中 EOS、单核细胞、
淋巴细胞和中性粒细胞数量。
1.4.4.4 离体气管螺旋条张力实验 末次给药后
1 h，快速取下气管，置于 Krebs 液中，剥离外周
组织后，每 2~3 个软骨环剪一个螺旋，制备成 3 mm
×20 mm 的气管螺旋条。将其一端连于挂钩，另
一端与张力换能器相连后置于通有 95%的 O2 和
5%的 CO2 的 Krebs 液的浴槽中，描记时加大负荷
至 0.009 8 N，平衡 l h，每 20 min 换 1 次液体，待
稳定后先记录一段正常收缩曲线，然后加入 1
mmol·L1 乙酰胆碱 0.l mL，每次用药间隔 15 min。
观察并记录曲线变化。以各组给药前后气管螺旋
条张力变化值进行比较。
1.5 统计方法
数据均以 sx  表示，各组间显著性差异比较
用方差分析，采用 SPSS 11.0 for Windows 统计软
件进行统计。
2 结果
2.1 香青兰总黄酮的镇咳作用
与对照组相比，香青兰总黄酮能剂量依赖性
地延长小鼠咳嗽潜伏期，减少小鼠 2 min 内咳嗽次
数(P<0.05 或 0.01)，提示香青兰总黄酮具有明显镇
咳作用。结果见表 1。
表 1 香青兰总黄酮对氨水所致小鼠咳嗽的影响( sx  ,
n=10)
Tab 1 The antitussive action of moldavica total flavone on
the cough model induced by ammonia water in mice( sx  ,
n=10)
组 别 剂量/
mg·kg-1·d-1
咳嗽
潜伏期/s
2 min 内
咳嗽次数/次
对照组  17.4±3.1 40.2±4.9
130 21.3±3.71) 35.3±3.61)
260 24.2±4.22) 31.2±4.12)
香青兰总黄酮
520 28.5±5.12) 29.4±4.32)
注：与对照组比较：1)P<0.05，2)P<0.01。
Note: Compared with control group, 1)P<0.05, 2)P<0.01
2.2 香青兰总黄酮的平喘作用
香青兰总黄酮中、高剂量组和阳性药氨茶碱
组豚鼠的引喘潜伏期明显比空白对照组有所延长
(P<0.05 或 P<0.01)，香青兰总黄酮高剂量组与氨
茶碱组比较差异没有显著性意义(P>0.05)，说明香
青兰总黄酮对组胺引起的豚鼠支气管痉挛具有一
定的对抗作用。结果见表 2。
表 2 香青兰总黄酮对组胺引起的豚鼠支气管痉挛的对抗
作用( sx  , n=8)
Tab 2 The antiasthmatic action of moldavica total flavone
on the asthma model induced by histamine-acetylcholine
chloride in cavies( sx  , n=8)
组 别 剂量/mg·kg1·d1 引喘潜伏期/s
对照组  51.3±19.8
香青兰总黄酮 80 68.8±24.3
160 79.4±29.41)
320 98.3±28.62)
氨茶碱组 50 112.7±31.52)
注：与对照组比较，1)P<0.05，2)P<0.01
Note: Compared with control group, 1)P<0.05, 2)P<0.01
中国现代应用药学 2013 年 3 月第 30 卷第 3 期 Chin JMAP, 2013 March, Vol.30 No.3 ·237·
2.3 香青兰总黄酮对大鼠血清 OVA特异性 IgE的
影响
与正常对照组比较，模型组血清 OVA 特异性
IgE 含量明显升高(P<0.01)；与模型组比较，香青
兰总黄酮可剂量依赖性地降低大鼠血清 OVA 特异
性 IgE 水平(P<0.01)；香青兰总黄酮高剂量组血清
OVA 特异性 IgE 含量与地塞米松组比较差异没有
显著性意义(P>0.05)。结果见表 3。
2.4 香青兰总黄酮对哮喘大鼠 BALF 中白细胞分
类计数的影响
哮喘模型组 BALF 中 EOS、中性粒细胞和淋
巴细胞数均明显高于正常对照组(P<0.01)，说明哮
喘模型建立成功。香青兰总黄酮中、高剂量组及
地塞米松组与模型组比较，EOS 数明显减少
(P<0.01)，提示香青兰总黄酮中、高剂量可明显抑
制哮喘炎症 EOS 浸润。结果见表 4。
表 3 香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠血清 OVA 特异性
IgE 的影响
Tab 3 The effects of moldavica total flavone on the levels
of serum OVA specific IgE in ovalbumin-induced asthmatic
rats
组 别 剂量/mg·kg1·d1 IgE/μg·mL1
正常对照组 9.90±0.54
模型组 13.92±1.371)
香青兰总黄酮 90 12.31±1.292)
180 11.03±0.752)
360 10.82±1.052)
地塞米松组 1 10.37±0.572)
注：与正常对照组比较，1)P<0.01；与模型组比较，2)P<0.01
Note: Compared with control group, 1)P<0.01; compared with model
group, 2)P<0.01
表 4 香青兰总黄酮对哮喘大鼠 BALF 中白细胞分类计数的影响( sx  , n=10)
Tab 4 The effects of moldavica total flavone on white blood cell counts in bronchoalveolar lavage fluid of ovalbumin-induced
asthmatic rats( sx  , n=10)
组 别 剂量/mg·kg1·d1 淋巴细胞 嗜酸性粒细胞 中性粒细胞 单核细胞
正常对照组 29.2±4.8 4.2±1.5 15.7±4.8 50.6±6.8
模型组 56.2±5.21) 9.2±2.11) 23.2±4.211) 11.9±3.91)
香青兰总黄酮 90 51.3±6.3 8.0±2.4 19.8±3.8 21.7±4.92)
180 48.5±5.62) 6.2±1.92) 17.4±3.52) 27.9±5.22)
360 42.6±4.42) 5.2±1.82) 16.5±3.92) 36.3±4.72)
地塞米松组 1 35.6±3.22) 4.7±1.82) 16.1±3.72) 43.4±5.22)
注：与正常对照组比较，1)P<0.01；与模型组比较，2)P<0.01
Note: Compared with control group, 1)P<0.01; compared with model group, 2)P<0.01
2.5 香青兰总黄酮对哮喘大鼠离体气管张力的影响
与正常对照组比较，模型组气管螺旋条张力
变化值明显升高(P<0.01)；与模型组比较，香青兰
总黄酮中、高剂量组及地塞米松组气管螺旋条张
力变化值明显减小(P<0.05 或 0.01)；香青兰总黄酮
高剂量组与地塞米松组比较，差异没有显著性意
义(P>0.05)。结果见表 5。
表 5 香青兰总黄酮对哮喘大鼠离体气管螺旋条张力的影
响( sx  , n=10)
Tab 5 The effects of moldavica total flavone on the
contraction of tracheal smooth muscle in ovalbumin-induced
asthmatic rats( sx  , n=10)
组 别 剂量/mg·kg1·d1 气管螺旋条张力变化值/m·g1
正常对照组 0.201±0.048
模型组 0.675±0.1831)
香青兰总黄酮 90 0.562±0.112
180 0.485±0.1082)
360 0.351±0.0913)
地塞米松组 1 0.291±0.0633)
注：与正常对照组比较，1)P<0.01；与模型组比较，2)P<0.05，3)P<0.01
Note: Compared with control group, 1)P<0.01; compared with model
group, 2)P<0.05, 3)P<0.01
3 讨论
香青兰作为一种传统的维吾尔族药用植物，
具有镇咳、袪痰、平喘作用[2]。香青兰总黄酮是本
课题组从香青兰中提取的有效部位，本次实验表
明：香青兰总黄酮中、高剂量能明显延长氨水引
起的小鼠咳嗽潜伏期和减少 2 min 内发生咳嗽反
应的次数，同时明显延长组胺和氯化乙酰胆碱引
起的豚鼠引喘潜伏期，说明香青兰总黄酮具有明
显的镇咳、平喘作用。
支气管哮喘为 IgE 介导的Ⅰ型变态反应，血清
IgE 是检测快速且敏感的指标[3]。本试验表明：香
青兰总黄酮可降低哮喘大鼠血清 OVA 特异性 IgE
水平，提示香青兰总黄酮可抑制由 IgE 介导的Ⅰ型
变态反应，从而起到改善哮喘症状的目的。
支气管哮喘是多种原因引起的以 EOS 为主的
炎症细胞浸润[4]，表现为支气管高反应性和反复可
逆性气流阻塞为特征的气道炎症性疾病。研究表
明，哮喘鼠在吸入变应原后的迟发反应相时，
BALF 中 EOS 数量明显增多，活化的 EOS 可释
·238· Chin JMAP, 2013 March, Vol.30 No.3 中国现代应用药学 2013 年 3 月第 30 卷第 3 期
放多种碱性蛋白和脂质体造成气道上皮损伤、气
道反应性增高、黏液分泌增多，以及间歇性气道
阻塞；EOS 尚能释放多种细胞因子，影响其它细
胞功能[5]。本实验表明：香青总黄酮中、高剂量组
可明显减少哮喘大鼠 BALF 中 EOS 数量，减小气
管螺旋条张力变化值，提示香青兰总黄酮可抑制
哮喘发病过程中 EOS 浸润、改善哮喘气道炎症及
高反应性。动物实验的结果为香青兰总黄酮的新
药开发奠定了基础。
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收稿日期：2012-06-18



地西他滨联合丙戊酸钠促胃癌 MGC-803 细胞 nm23-H1 基因表达及机
制研究

张国强，彭敏霞，王晔恺，周吉航，曾芳(舟山医院，浙江 舟山 316004)

摘要：目的 探讨地西他滨(DCA)和丙戊酸钠(VPA)联用对胃癌细胞株 MGC-803 的作用及对 non-metastasis 23-H1 基因
(nm23-H1)的表达调控的影响。方法 DCA 1.5 及 3.0 μmol·L1，VPA 1.5 mmol·L1，DCA 1.5 μmol·L1+VPA 1.5 mmol·L1，
DCA 3.0 μmol·L1+VPA 1.5 mmo·L1作用 MGC-803细胞 72 h。Annexin V/PI法检测细胞凋亡，实时荧光定量 PCR检测
nm23-H1 mRNA 表达，焦磷酸测序法检测 nm23-H1 启动子上随机选取的两个 CpG 岛位点甲基化状态。结果 VPA 1.5
+DCA 1.5联合用药组[早期：(33.58±3.88)%，晚期：(31.52±4.20)%]和 VPA 1.5 +DCA 3.0联合用药组[早期：(42.61±4.23)%，
晚期：(38.01±3.86)%]凋亡率均高于其相应单药组，差异具有统计学意义(P<0.01)。nm23-H1 mRNA在 VPA 1.5 +DCA 1.5
联合用药组(1.84±0.46)和 VPA 1.5 +DCA 3.0联合用药组(2.88±0.42)的表达水平均高于其相应单药组，差异具有统计学意
义(P<0.01)。VPA 1.5 +DCA 1.5联合用药组[位点 1：(53.50±3.39)%，位点 2：(51.17±2.71)%]和 VPA 1.5 +DCA 3.0联合用
药组[位点 1：(41.17±2.14)%，位点 2：(39.83±2.56)%]nm23-H1启动子两位点甲基化阳性率均低于其相应单药组，差异具
有统计学意义(P<0.01)。VPA 1.5 mmol·L1、VPA 1.5+DCA 1.5、VPA 1.5+DCA 3.0这 3组的 HDAC酶活性均低于正常对
照、DCA 1.5 μmol·L1、DCA 3.0 μmol·L1任一组，差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 DCA联合VPA能显著上调 nm23-H1
基因的表达，其机制与启动子上的甲基化水平降低和去乙酰化酶活性降低有关。
关键词：nm23-H1基因；MGC-803细胞；丙戊酸钠；地西他滨
中图分类号：R965.1 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2013)03-0238-05

Synergistic Effect of Decitabine and Valproic Acid on Non-metastasis 23-H1 Expression in Gastric
MGC-803 Cells

ZHANG Guoqiang, PENG Mingxia, WANG Yekai, ZHOU Jihang, ZENG Fang(Zhoushan Hospital, Zhoushan
316004, China)

基金项目：舟山市科技局科技计划项目(No.06577)
作者简介：张国强，男，主任医师 Tel: 13506805168 E-mail: zgq5168.p@163.com