全 文 ：第 3 0 卷
2X() 2 年 2 月
分析化学 (几N X I H U AX U E ) 研究简报
C ih n e se J
o u nr al o f nA al yt i
e al Ch
e而 s ytr
第 2 期
19 5 一 19 7
淫羊霍根与叶活性成分的分析和 比较
赵小娟 党高潮 杨广德 贺浪冲 ’
(西北大学化学系 . 西安 71 X( 巧9) (西安 交通大学药学院 . 西安 71 (X巧 1 )
摘 要 采用细胞膜 色谱法 ( CM )C 筛选 , 并结合离体药理实验 确定主要活性成 分 , 利用高效 液相色谱法分析
比较 了淫羊蕾根与叶中的活性成分及其差异性 。 色谱条件为 Klt ,~ il O D S 柱 ( 150 ~ x 4
.
6 m m l
.
D
.
) ;流动 相
甲醇 一水 ( 7 0 : 30 , :V t’) ;检测波长 270 nm 。 筛选发现淫羊霍根中的两个有效成分 、 、 护H 一 21 4 和 y、 …H 一21 6 对血管有
较强的舒张作用 , 表明活性成分在 C M C 模型体系中的保 留特性与药理作用之 间存在 良好 的相关 性 。 在此色
谱条件下淫羊蕾叶未检测 到这两种活性成分 。
关健词 淫羊蕾 , 活性成分筛选 , 细胞膜色谱法
1 引 言
淫羊擎 ( H e br a e lP m ed i) 属小粟科植物 ,作为中药材均取其叶子入药 ,具有补肾阳 、 强筋骨 、 祛风湿等
功效 〔` 二。 近年来 , 对淫羊霍叶化学成分的研究报道较多 : , 一 ’ 〕 , 一般认为黄酮类化合物是其有效部位 , 淫
羊蕾贰是其定性和定量的有效成分 ;而对淫羊霍根的有效成分研究报道甚少飞 , 〕 。 本文应用血管细胞膜
色谱 ( c M )C :吕〕模型作为筛选技术 ,结合离体药理实验对淫羊霍根的化学成分进行 了活性筛选研究 ,并与
淫羊蕾叶作了比较 。
2 实验部分
2
.
1 仪器与试剂
lo A T 。 型高效液相色谱仪 ( 日本岛津公司 ) ,祝置 Sp ` l o A 。 型可调波长检测器 , 比一 10 A , 型溶剂输送
泵 , nA as t e r 色谱工作站 (中国奥泰科技有限公司 ) ; A S 5 1 50 超声振荡仪 ( A ut o s ic 即 c e 公司 ) ; RE 一 52 型旋转
蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂 ) 。 淫羊蕾根和淫羊霍叶均采 自陕西省商洛地 区 , 由西安交通大学药学院
生药学教研室鉴定 ; 石油醚 、 乙醚 、 醋酸乙酷 、 甲醇 、氯仿等均为分析纯 (西安化学试剂厂 ) ;液相色谱用甲
醇 (美国 iF s he : 公司 ) ; 三重蒸馏水 ( 自制 ) ;重酒石酸去甲肾上腺素注射液 ( N E ,武汉制药厂 ) ;化学药物维
拉帕米 ( v e ar p~ l , V P ,美国 iS g n l a 公司 ) ; 柱色谱用硅胶 H (青岛海洋化工集团有限公司 ) 。
2
.
2 实验动物
健康家犬 ( 15 一 25 kg )和健康大耳白家兔 ( 2 . 0 一 2 . 5 k g ) , 雌雄不限 , 由西安交通大学实验动物 中心
提供 。
2
.
3 色谱条件
2
.
3
.
1 筛选条件 自制犬血管 c M c 柱 ( 50 ~ x Z ~ 1
.
D
.
) ; 流动相 : 5 0 m nor l几 磷酸盐缓 冲溶液 ( p H
7
.
4 ) ;柱温 : 37 ℃ ;检测波长 : 236 nl ; 流速 : 0 . 5 11 11了ha ;n 用流动相平衡 3 h 后 ,进样 5 拼L 分析 c
2
.
3
.
2 分析条件 色谱柱 二K n 〕m as il O D S柱 ( 15 0 m x 4
.
6 nu I
.
D
.
) ; 流动相 : 甲醇 一水 ( 7 0 : 3 0 , v / 不尸 ) ; 检
测波长 : 2 70 nm ; 流速 : 1 . o m 曰而 ;n 室温下分析 。
2
.
4 供试品溶液制备
取适量的淫羊霍根粉末 , 用 95 % 乙醇回流提取 3 次 ,每次 Z h 。 合并提取液 , 回收溶剂 , 稠膏加适量
水稀释后 ,分别用石油醚 、 乙醚 、 醋酸乙酷萃取至有机层无色 , 合并萃取液 , 回收溶剂 , 残渣用适量毗陡溶
解 。 分别得到淫羊蕾根石油醚 、 乙醚和醋酸乙醋的供试品溶液 ,用 Y H 一 l 、 Y Y H 一 2 和 Y Y H 一3 表示 。 剩余
的水层水浴蒸干 ,残渣用适量毗咙溶解 ,得到其水的供试品溶液 y Y H一 。 同法制备淫羊霍叶的供试液 4
20 1
一
03
一
08 收稿 ; 2 0 1一 7一 25 接受
本文系卫生部科学研究基金资助项 目 ( N o . 98 一卜 243 )
分 析 化 学 第 30 卷
份 (用 YY H 一 1 ` 、 Y Y H 一 2 ` 、 Y Y玉I一 3 ’ 和 Y Y H 一 4 ` 表示 )
3 结果与讨论
3
.
1 有效部位的确定
在上述 “筛选条件 ” 下 , 分别吸取 5 拼L 钙拮抗剂 V P 对照液 (l m g几 )及各供试 品溶液注人血管 CM C
柱进行分析 。 结果 Y Y H 一2 和 v P 类似在血管 C M C 上有 明显的色谱峰 (图 1 ) ,其余供试液均无任何 色谱
保 留特性 。 表明 Y YH 一 2 中含有与血管细胞膜及膜受体作用的成分 。
3
.
2 有效成分的确定
采用柱色谱方法 ( 4 0 ~ x 40 ~ I
.
D
. 柱 )对 Y Y H 一 2 进行分离 (氯仿 一甲醇梯度洗脱 ) ,收集到分离样
品溶液 17 份 (用 YY H 一 2 01 一 Y Y H 一2 17 表示 ) 。 分别取各样品溶液注人血管 CM C 柱进行分析 。 结果 Y Y H -
21 4 和 Y H
一
2 16 与 v P 类似在血管 c M c 上有明显的色谱峰 (图 2 ) ,其余样品均无任何色谱保留特性 。
t/’ m in
钾 ( a) 和 Y YH 一 2 ( b) 在血管 CM C 模型上的色谱图
C肠ma t o 邵妞m s of v e ar 四词 (VP ) ( a ) 即d YY H一 2
o n v
asc ul ar
C e l me lbn aern
e
hor
比以 to脚p场e ( CM C
m od
e l
l
.
VP
; 2
,
3
.
YY H
一 2 中的有效成分 ( e瓜c ivt e c 。田户扣 e n ts of YY H-
2 )
。
图 2 有效成分 、飞卫一2 16 ( a )和 y飞H 一2 1 4 (b )在血管 CM C
模型 上的色谱图
iF g
.
Z C肠ma t o盯朗15 of e任吮 it v e e o m即 ne n ts Y H 一2 16 ( a )
即d 、飞H 护2 14 ( b ) o n v二 u l肛 C M C 训记 e l
1
.
Y Y H
一 2 16 : 2
.
YY H
一
2 14 0
,1
.、 ,,产图
.
glbF(
_
_ 爪_ _一一
3
.
3 有效成分的离体药理实验
以模型药物 V P 为对照 ,对分离组分 Y Y H -
21 4 和 Y H
一
21 6 进行离体动脉条实验 。 分别配
制 y Y H一 2 14 和 Y Y H 一 2 16 的 供试 品水 溶 液 ( 1
留)L 。 照文献方法阂操作 ,平衡 1 . 5 一 Z h 后 ,给
予 砚 3 拜L ( Z x l o 一 ’ mol l L )使其强直收缩 , 平衡
后 (进人平台期 ) , 按累加浓度法依次加人供试
品水 溶 液 0 . 0 5 、 0 . 1 、 0 . 2 、 0 . 4 、 0 . 8 、 1 . 6 和 3 . 2
m L
。 结果 Y Y H 一2 14 和 Y YH 一21 6 类似于 V P ,均对
NE 引起的主动脉收缩有抑制作用 , 且 YY H 一2 16
作用较明显 。 筛选结果与离体药理作用 间存在
良好的相关性 。
3
.
4 有效成分的分析比较
准确 吸 取 Y H 一 2 、 y Y H 一 2 ` 、 Y Y H 一 2 14 和
Y Y H一 16 四种供试液各 10 拌L ,用 甲醇稀释并
t/ m i n
图 3
F ig
.
淫羊蕾两种有效成分液相色谱图
3 Chor am ot g
旧 m s of ht e 饰 o e fe e it v e e o mpo n e n st in ht e or st
a n d le va es of eH汤 a eP Z侧id
a
.
Y Y H
一 2 : b
.
y 丫 H一 2 ’ : e . y 、书一 2 16 ( l ) ; d , YY H 一 2 14 ( 2 ) 。
定容至 10 mL 。 各吸取 10 拼L ,注人高效液相色谱仪 , 照 “ 分析条件 ” 项下操作 , 得到各供试液的色谱图
(图 3 ) 。 发现在 、丫H 一 2 ’ 的色谱 图中 , 与 Y Y H 一 21 4 和 Y Y H 一21 6 相应的色谱峰位置上未见有峰 。 表 明在
第 2 期 赵小娟等 : 淫羊蕾根 与叶活性成分的分析和 比较 19 7
YY H
一
2
’ 中活性成分 Y Y H 一 2 14 和 Y Y H 一2 61 含量甚微 。
细胞膜色谱法反映的是溶质与特定靶细胞膜及膜受体相互作用特性 。 本文应用血管 C M C 模型较
为系统地研究了淫羊蕾根中的活性成分及其药理作用 , 并就活性成分的分布与淫羊蕾叶作了比较 。 实
验结果为淫羊霍根的特定药用开发利用和定性定量分析提供 了科学实验依据 。
R e fe er
n C e S
I E山 t e d e o
~
t t e e o f p h
amr 二
o衅 i a of th e H e aj ht M i币 s卿 o f p . R . C h i n a ( 中华 人 民 共 和 国 卫 生 部 药典 委 员 会 ) .
尸从2
~
p;汉祀必 of 尸 . 及 . C h ian ( p a rt l ) (中华人民 共和 国药典 (二部 ) ) . B e izi n g (北京 ) : e h e m i e aj x耐 u s t尽 几 e s (化学工业
出版社 ) , 2以沁 : 26 8 一 26 9
2 u u x ins hun (刘信顺 ) , Y an g B in (杨 滨 ) . c 入i、 。 介口d众如耐 a记 价 r占以 n呷 ( 中草药 ) , 1望知 , 2 1 ( 9 ) : 3 6 一 3 9
3 oD
n g 为 ao p i叱 (董晓萍 ) , 为 a。 e ho n g h ou ( 肖崇 厚 ) , 劝 a n g R o n g (张 蓉 ) , u w e i (李 伟 ) . e人。 oJ “门司 of 以~ 。 几细 e二
材记交a (中国中药杂志 ) , 19 4 , 19 . 0 ) : 6 14 一 6 15
4 U agn H` 川 i (梁海锐 ) , u w e lun ie (李文玫 ) , u u an g (李 良 )
.
ch 二 oJ ur 肠创 of hC i、 。 几夕匡比二 Me d ic 。 ( 中国 中药杂志 ) ,
19 3
,
18 ( 1 1 )
: 6 7 7 一 6 7 9
5 H u B ih ua
n g (胡碧煌 ) , 乃 o u u d o n g (周立东 ) , u u y o n gl o n g (刘永隆 ) . 通 e at p ha 用习￡亡以州 & 刀衣a (药学学报 ) , i ” 2 , 27 ( 5 ) :
3 9 7
6 J i
a 儿。 h e gn (贾宪生 ) , w u j i a q i (吴家其 ) , M a 。 Qin g (茅 青 ) . c入。 OJ 姗公 of e人i~ 几夕创祀二 婉己幼。 ( 中国 中药杂志 ) ,
19 8
,
2 3 ( 12 )
: 7 3 7
7 iaJ 儿 ans he ng (贾宪生 ) , w u iJ a中(昊家其 ) , M a 。 iQ ng (茅 青 ) . hc ~ oJ ur n d l of hc i二。 3 f创 e朋 婉 d记。 (中国中药杂志 ) ,
1 99 8
,
2 3 ( 3 )
: 16 2
8 H e 肠 n g c h叫 (贺浪冲 ) , Y a呀 G u魂de (杨广德 ) , ce 嗯 兀 n d u (耿信笃 ) . 。 茗码已 & 交。 刀成 , i。 (科 学通报 ) , 1 9 , , , 科 ( 6 ) :
6 3 2
9 xu hS
u
yu n( 徐叔云 ) , iB an R iul an (卞如滚 ) , ch 即 沁 u( 陈 修 )一U以灿扣防如幻 · of p ` 对初aC 山邵以 ￡平 ir 。 心 ( 药理 实验 方法
学 ) . 2 n d e d . (第二版 ) , eB ij ing (北京 ) : eoP p le’ 、 H以ht rP es (人 民卫生出版社 ) , 19 月 : 98 3 一 9 84
A n a l y s is
in
a n d C o m P a r a t i o n o f t h e E fe
c t iv e C o m P o n e n t
t h e R o o ts a n d L e a v es o f H 七rb a EP lm e id i
乃 a o x i a oj u a n , . n an g e a oc h a 。 , , Y an g e u an g d e 之 , H e 助 n g e h o n g ` ’
,
( D印。 八 m。瓜 of c旋 m is : , , 筋以六功。 , 如 , sr 众 , , ix ’ a n 7 1以场 9 )
,
( co ue g
。
of 尸肋 mr 峭 · , x i `。 了如刀勿 n g nU i , sr 。 , , iY ’ 助 7 1〔K场 1)
A b s tra
e t oT s t u d y ht e d ife re n
e e
an d ph a~
e o l o g i e a l a e t i o n o f t h e e fe
e t iv e e o m p o n e n t s i n t h e ro
t s an d l e a
v e s o f
eH rb
a 印l、 d ii , th e e e ll m e nbr ar n e e h or m a t o脚 ph y ( CM C ) w as u s e d fo r s e r e e n i n g e fe e t iv e e o m卯 n e n t s , t h e n t h e
p h
amr
e o l o g i e a l a e t i v i t y i n v it or w as fu hrt
e r t e s t iif e d
.
hT
e h i g h p e for mr an
e e l i q说 d e h or m a t o脚 p h i e m e t h o d w a s u s e d
fo r ht e e
o
m p
a ar t i v e a n a ly s i s o f t h e e fe
e t i
、 e e o m卯 n e n st i n t h e 伽 t s an d l e a 、 e s o f eH r占a 叩lm o d ii . hT e K or m a s i l
O D S e o l
u
mn ( 15 0 mnz
x 4
.
6
m
I
.
D
.
) w as u
s e
d as
a n a ly t i e al e o lu nr
.
Th e m o b il e p h as e w a s m e t h a n o l
一
w a t e r ( 7 0
: 3 0
,
l /’ / 不) iw ht 1 . o m工了而 n if o w ar t e an d a t 2 70 n m d e t e e t io n . Y Y H 一 2 14 an d Y Y H 一 2 16 in ht e o t s o f eH br a
印l砒 d i i w e r e fo u n d to h a v e a 卯 t e n t v as o d i la t a t i o n . hT e s e er e n i n g er s u i r s o b t a i n e d b y th e C凡IC w e er fo u n d t o h a 、 · e
a
g o d
e o r e l a t io n iw t h th e i
r
p h a mr
a e o lo乡e a l e fe e st i n v it or . H o w e v e r , t he s a m e e o m p o n e n t s 、 e er n o t d e t e e t e d i n
ht e l e a 、 e s o f eH
r占a 印lme d i i u n de r t h e e h or nr a t o盯 a ph i e e o n di t io n s
.
K e y wo
r
ds eH br
a 印 l爪e d i i , s e r e e n i n g e fe e t i、 , e e o m p o n e n t s , e e l l m e m b r a n e e h r o rn a t o g ar v h ) ·
; R即e : 、 e d s 、气a 汗 h Z田 z ; a e e e p , e d 2 5 )山 ) 2 X() l )