全 文 ：HPLC法同时测定补肺益肾颗粒中淫羊藿苷、橙皮苷、芍药苷
李 娟， 赵 迪， 周悌强， 冯素香* ， 李建生
(河南中医学院，河南 郑州 450008)
收稿日期:2012-04-27
基金项目:国家自然科学基金重点项目 (81130062)
作者简介:李 娟 (1987—) ，女，硕士研究生。Tel: (0371)65680562，E-mail:543207227@ 163. com
* 通信作者:冯素香 (1971—) ，女，副教授，从事中药质量分析与新药研究。Tel: (0371)65680562，E-mail:fengsx221@ 163. com
摘要:目的 采用 HPLC法同时测定补肺益肾颗粒 (淫羊藿、陈皮、赤芍、黄芪、五味子、山茱萸等)中淫羊藿苷、
橙皮苷、芍药苷。方法 采用二极管阵列检测器，色谱柱为 Venusil XBP C18 (L) (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动
相为乙腈-0. 1%磷酸水梯度洗脱，体积流量为 1. 0 mL /min，检测波长为 270 nm。结果 补肺益肾颗粒中的淫羊藿苷、
橙皮苷、芍药苷的平均回收率分别为 98. 6%，99. 6%、98. 6%，RSD 分别为 2. 65%、2. 12%、2. 36%;淫羊藿苷在
0. 022 4 ～ 0. 280 μg，橙皮苷在0. 071 8 ～ 0. 898 μg，芍药苷在0. 051 6 ～ 0. 645 μg 范围内呈良好的线性关系。结论 该
方法简便、可靠，可作为该制剂质量控制方法。
关键词:补肺益肾颗粒;淫羊藿苷;橙皮苷;芍药苷;HPLC
中图分类号:R927. 2 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2012)12-2335-05
Determination of icariin，hesperidin and paeoniflorin in Bufei Yishen Granules
by HPLC
LI Juan， ZHAO Di， ZHOU Ti-qiang， FENG Su-xiang* ， LI Jian-sheng
(Henan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450008，China)
ABSTRACT:AIM To establish the method for determining icariin，hesperidin and paeoniflorin in Bufei Yishen
Granules (Epimedii Folium，Citri reticulatae Pericarpium，Paeoniae Radix rubra，Astragali Radix，Schisandrae
chinensis Fructus，Corni Fructus，etc．)． METHODS HPLC-DAD was used to determine icariin，hesperidin and
paeoniflorin． The samples were separated on Venusil XBP C18 (L) (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)with mobile phase
consisted of acetonitrile-0. 1% phosphoric acid in gradient elution mode． The flow rate was 1. 0 mL /min and the
detection wavelength was set at 270 nm． RESULTS The average recoveries of icariin，hesperidin，paeoniflorin
were 98. 6%，99. 6%，98. 6%，and RSDs were 2. 65%，2. 12%，2. 36%，respectively． The icariin，hesperidin
and paeoniflorin samples showed a good linear relationship in the ranges of 0. 022 4 － 0. 280 μg，0. 071 8 － 0. 898
μg，0. 051 6 － 0. 645 μg，respectively，in the chosen HPLC conditions． CONCLUSION The method is simple，
accurate and reproducible and can be used for the quality control of Bufei Yishen Granules．
KEY WORDS:Bufei Yishen Granules;icariin;hesperidin;paeoniflorin;HPLC
补肺益肾颗粒处方是在原补肺益肾处方基础上
精简而成［1-2］，由淫羊藿、陈皮、赤芍、黄芪、五
味子、山茱萸等十二味中药组成，现为河南中医学
院第一附属医院制剂。该方具有补肺益肾、化痰、
活血的功效，是中医治疗慢性阻塞性肺疾病
(COPD)稳定期肺肾气虚证的有效药物，可减轻
炎症反应和黏液分泌，减少对气道壁的损伤，减轻
气道阻塞，从而降低对肺组织的损伤，延缓肺功能
的下降［3-6］。其中淫羊藿为方中君药，陈皮、赤芍
为方中臣药，原质控标准仅对该颗粒剂中淫羊藿苷
进行测定，不能全面反映产品质量信息。为有效控
制产品质量，本实验采用 HPLC法同时对该颗粒剂
中有效成分淫羊藿苷、橙皮苷和芍药苷进行定量分
析，为建立简便易行的质量控制方法提供依据。
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1 仪器、试药
1. 1 仪器 Waters 高效液相色谱仪 (2695 高效液
相泵，2996二极管阵列检测器，Empower 2 工作站;
美国 waters 公司) ;SHZ—D (Ⅲ)型循环水式真空
泵 (巩义市予华仪器有限责任公司) ;KH—2200DB
型数控超声波清洗器 (昆山禾创超声仪器有限公
司) ;Sarterius BS 224S 电子分析天平 (北京赛多利
斯仪器系统有限公司) ;EYELA N—1100 旋转蒸发
仪 (上海爱朗仪器有限公司) ;HH—6 型数控恒温
水浴锅 (上海比朗仪器有限公司)。
1. 2 试药 芍药苷 (批号 0736-200414)、淫羊藿
苷 (批号 0737-9709)、橙皮苷 (批号 0773-9809)
均购自中国食品药品检定研究院。
乙腈 (HPLC 级，Grace Company INC) ，甲醇
(分析纯，天津四友精细化学品有限公司) ，磷酸
(分析纯，天津鸥博凯化工有限公司) ，娃哈哈纯
净水;补肺益肾颗粒 (河南中医学院第一附属医
院药剂科提供)。
赤芍、淫羊藿、陈皮等药材均购自河南郑州张
仲景大药房，经河南中医学院陈随清教授鉴定分别
为毛茛科植物川赤芍 Paeonia veitchii Lynch 的干燥
根、小檗科植物淫羊藿 Epimedium brevicornum Max-
im． 的干燥地上部分、芸香科植物橘 Citrus reticu-
late Blanco的干燥成熟果皮等。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Venusil XBP C18 (L)色谱柱
(4. 6 mm ×250 mm，5μm) (博纳艾杰尔科技有限
公司) ，柱温:25 ℃;流动相:乙腈 (A)-0. 1%
磷酸水 (B)梯度洗脱 (A%为 19→19→28→28，
相应时间周期为 0→6→7→20min) ;体积流量:
1. 0 mL /min;检测波长:270 nm。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷、橙
皮苷、芍药苷对照品适量，加甲醇分别制成每
1 mL含淫羊藿苷 0. 112mg、橙皮苷 0. 359 mg、芍药
苷 0. 258 mg的混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取本品约 2 g，研细，精
密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇 50 mL，密
塞，称定质量，超声处理 20 min，放冷，再称定质
量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤
液，作为供试品溶液。
2. 4 阴性对照溶液的制备 按处方量并以相同的
工艺分别制备不含淫羊藿、陈皮、赤芍的阴性对照
样品，照上述供试品溶液制备方法处理，得阴性对
照溶液。
2. 5 专属性实验 精密吸取对照品、供试品及阴
性对照溶液各 10 μL，注入液相色谱仪进行测定。
结果阴性对照色谱中，在与对照品及供试品色谱图
对应保留时间处无相应色谱峰，表明其它组份对测
定淫羊藿苷、橙皮苷、芍药苷 3 个成分无干扰，见
图 1。
1． 芍药苷 2． 橙皮苷 3． 淫羊藿苷
1． paeoniflorin 2． hesperidin 3． icariin
图 1 对照品 (A)、供试品 (B)、缺赤芍阴性样品 (C)、缺陈皮阴性样品 (D)和缺淫羊藿阴性样品 (E)高效液相色
谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of mixed reference substancea (A)，sample (B)，negative sample without Paeoniae Radix rubra
(C)，negative sample without Citri reticulatae Pericarpium (D)，negative sample without Epimedii Folium (E)
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2. 6 线性关系考察 分别精密量取 2. 2 项下的对
照品溶液各 1 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释
至刻度，摇匀，即为对照品溶液。精密吸取 2、5、
10、15、20、25 μL，注入液相色谱仪，记录峰面
积，峰面积和进样量分别取对数得 Y 和 X，并以 Y
对 X进行回归分析，得到淫羊藿苷、橙皮苷、芍
药苷的回归方程，见表 1。
表 1 线性关系考察结果
Tab. 1 Results of linear correlation
名称 回归方程 相关系数 线性范围 /μg
淫羊藿苷 Y = 1. 062 7X + 6. 936 7 0. 999 3 0. 022 4 ～ 0. 280
橙皮苷 Y = 1. 08X + 6. 622 2 0. 999 5 0. 071 8 ～ 0. 898
芍药苷 Y = 0. 901 2X + 6. 801 6 0. 999 5 0. 051 6 ～ 0. 645
结果表明:淫羊藿苷在0. 022 4 ～ 0. 280 μg，
橙皮苷在0. 071 8 ～ 0. 898 μg，芍药苷在 0. 051 6 ～
0. 645 μg范围内有良好的线性关系。
2. 7 精密度实验 照上述 HPLC 色谱条件，对同
一对照品溶液连续进样 6 次，以峰面积为指标考察
仪器的精密度，结果表明，淫羊藿苷、橙皮苷、芍药
苷对照品峰面积的 RSD分别为 1. 2%、1. 4%、1. 1%。
2. 8 稳定性实验 取同一供试品溶液于 0、2、4、
6、8、12 h分别进样 20 μL进行 HPLC测定，淫羊
藿苷、橙皮苷、芍药苷峰面积的 RSD 分别为
0. 9%、1. 2%、0. 8%，表明样品供试液在 12 h 内
稳定性良好。
2. 9 重复性实验 取同一批样品 6 份，制备供试
品溶液，按上述 HPLC色谱条件进行测定，记录峰
面积并计算，结果淫羊藿苷、橙皮苷、芍药苷的平
均质量分数分别为 0. 087 6 mg /g、0. 367 mg /g、
0. 243 mg /g，RSD分别为 2. 17%、2. 43%、2. 29%，
表明重复性良好。
2. 10 耐用性实验
2. 10. 1 不同色谱柱 精密吸取对照品溶液和供试
品溶液各 20 μL，注入液相色谱仪，选取不同的色
谱 柱 (艾 杰 尔， V9510525CL0028;依 利 特，
E1517560;Waters，WAT045905)进行分离，其它
色谱条件不变，进行测定，结果淫羊藿苷、橙皮
苷、芍药苷的平均质量分数分别为0. 088 0 mg /g、
0. 363 mg /g、0. 247 mg /g，RSD 分别为 2. 56%、
2. 31%、2. 19%。
2. 10. 2 不同柱温 精密吸取对照品溶液和供试品
溶液各 20μL，注入液相色谱仪，柱温分别设定为
20 ℃、25 ℃、30 ℃，其它色谱条件不变，进行测
定，结果淫羊藿苷、橙皮苷、芍药苷的平均质量分
数分别为0. 087 2 mg /g、0. 371 mg /g、0. 239 mg /g，
RSD分别为 2. 15%、2. 48%、2. 34%。
2. 10. 3 不同波长 精密吸取对照品溶液和供试品
溶液各 20 μL，注入液相色谱仪，波长分别设定为
265 nm、270 nm、275 nm，其它色谱条件不变，进
行测定，结果淫羊藿苷、橙皮苷、芍药苷的平均质
量分数分别为0. 087 4 mg /g、0. 366 mg /g、0. 242
mg /g，RSD分别为 1. 98%、2. 23%、2. 68%。
以上结果表明不同色谱柱、不同柱温、波长的
微小变化对样品色谱峰的分离度和含量测定结果均
未有明显影响。
2. 11 加样回收率实验 取已知含有量 (淫羊藿
苷0. 087 8 mg /g，橙皮苷 0. 369 mg /g，芍药苷
0. 245 mg /g)的补肺益肾颗粒约 1 g，共 9 份，精
密称定，分为 3 组，每组分别加入质量浓度为
0. 112 mg /mL 的淫羊藿苷、0. 359 mg /mL 的橙皮
苷、0. 258 mg /mL 的芍药苷对照品 0. 8、1. 0、1. 2
mL，照上述供试品溶液的制备方法及色谱条件进
行测定，结果显示淫羊藿苷、橙皮苷、芍药苷的加
样回收率的 RSD分别为 2. 65%、2. 12%、2. 36%，
见表 2 ～ 4。
表 2 淫羊藿苷加样回收率实验结果
Tab. 2 Results of recovery tests of icariin
称样
量 /mg
样品原
有量 /mg
加入对照
品量 /mg
测定
量 /mg
回收
率 /%
平均回
收率 /%
RSD /
%
1. 002 3 0. 088 0 0. 070 2 0. 156 4 97. 38
1. 016 8 0. 089 3 0. 070 2 0. 157 2 96. 70
0. 999 6 0. 087 8 0. 070 2 0. 155 8 96. 86
1. 024 5 0. 090 0 0. 087 8 0. 177 4 99. 60
1. 006 8 0. 088 4 0. 087 8 0. 179 3 103. 53 98. 6 2. 65
0. 997 6 0. 087 6 0. 087 8 0. 173 4 97. 73
0. 998 3 0. 087 7 0. 105 4 0. 192 0 99. 04
1. 002 9 0. 088 1 0. 105 4 0. 196 7 103. 12
1. 012 4 0. 088 9 0. 105 4 0. 195 4 101. 09
表 3 橙皮苷加样回收率实验结果
Tab. 3 Results of recovery tests of hesperidin
称样
量 /mg
样品原
有量 /mg
加入对照
品量 /mg
测定
量 /mg
回收
率 /%
平均回
收率 /%
RSD /
%
1. 002 3 0. 369 8 0. 287 2 0. 654 0 98. 94
1. 016 8 0. 375 2 0. 287 2 0. 668 7 102. 19
0. 999 6 0. 368 9 0. 287 2 0. 655 8 99. 91
1. 024 5 0. 378 0 0. 359 0 0. 747 5 102. 91
1. 006 8 0. 371 5 0. 359 0 0. 722 8 97. 85 99. 6 2. 12
0. 997 6 0. 368 1 0. 359 0 0. 715 4 96. 74
0. 998 3 0. 368 4 0. 430 8 0. 786 9 97. 15
1. 002 9 0. 370 1 0. 442 8 0. 806 7 98. 61
1. 012 4 0. 373 6 0. 442 8 0. 815 4 99. 78
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表 4 芍药苷加样回收率实验结果
Tab. 4 Results of recovery tests of paeoniflorin
称样
量 /mg
样品原
有量 /mg
加入对照
品量 /mg
测定
量 /mg
回收
率 /%
平均回
收率 /%
RSD /
%
1. 002 3 0. 245 6 0. 206 4 0. 455 2 101. 57
1. 016 8 0. 249 1 0. 206 4 0. 451 6 98. 10
0. 999 6 0. 244 9 0. 206 4 0. 455 7 102. 13
1. 024 5 0. 251 0 0. 258 0 0. 499 8 96. 43
1. 006 8 0. 246 7 0. 258 0 0. 512 5 103. 04 98. 6 2. 36
0. 997 6 0. 244 4 0. 258 0 0. 494 3 96. 86
0. 998 3 0. 244 6 0. 309 6 0. 552 6 99. 49
1. 002 9 0. 245 7 0. 309 6 0. 550 4 98. 41
1. 012 4 0. 248 0 0. 309 6 0. 554 8 99. 08
2. 12 样品的测定 取 3 批补肺益肾颗粒
(20110218、20110425、20110603) ，照 2. 3 项下供
试品溶液制备方法制备，2. 1 项下 HPLC 色谱条件
测定，记录色谱峰面积并计算，测定结果见表 5。
表 5 3 批次样品测定结果 (n =3)
Tab. 5 Determination results of three batches of samples
(n =3)
批次
淫羊藿苷 橙皮苷 芍药苷
平均质量
分数 /
(mg·g － 1)
RSD /
%
平均质量
分数 /
(mg·g － 1)
RSD /
%
平均质量
分数 /
(mg·g － 1)
RSD /
%
20110218 0. 087 6 2. 17 0. 365 2. 43 0. 246 2. 29
20110425 0. 088 1 1. 48 0. 368 2. 17 0. 244 1. 07
20110603 0. 087 5 1. 62 0. 372 1. 46 0. 247 1. 35
3 讨论
3. 1 提取方法的选择 补肺益肾颗粒为中药复方
制剂，所含成分复杂多样。颗粒剂含有量测定时供
试品溶液制备方法主要有超声、回流［7-9］。该实验
对这两种提取方法进行了比较，超声提取淫羊藿
苷、橙皮苷、芍药苷的平均质量分数分别为
0. 056 9 mg /g、0. 668 mg /g、0. 364 mg /g，RSD 分
别为 2. 18%、1. 27%、1. 58%;回流提取淫羊藿
苷、橙皮苷、芍药苷的平均质量分数分别为
0. 057 0 mg /g、0. 669 mg /g、0. 368 mg /g，RSD 分
别为 1. 93%、2. 16%、2. 41%。结果表明，采用
超声和回流方法提取含有量相近，无显著性差异。
超声提取操作简便，因此本实验选择超声处理作为
供试品溶液的制备方法。
3. 2 检测波长的选择 该实验同时测定 3 个成分，
但芍药苷、淫羊藿苷、橙皮苷的最大吸收波长分别
为 230 nm、270 nm、320 nm［10-13］，因此本实验对
检测波长进行了筛选，分别在 200 ～ 400 nm范围内
不同波长下测定混合对照品，实验结果表明在 270
nm可以同时兼顾这 3 个成分，且呈良好线性关系，
故检测波长选择在 270 nm。
3. 3 洗脱梯度的选择 补肺益肾颗粒中含有多种
化学成分，很难找到较为理想的等度洗脱条件。本
实验分别考察了以乙腈-纯水、乙腈-0. 1%磷酸水、
甲醇-0. 1%磷酸水［14-16］作为流动相时不同浓度和比
例的等度以及梯度洗脱的出峰情况，确定了以乙
腈-0. 1%磷酸水为流动相时分离度较好。通过反复
改变乙腈所占比例和变化的时间，最终确定了该实
验的梯度洗脱程序，在此条件下，供试品溶液中淫
羊藿苷、橙皮苷和芍药苷与相邻成分分离良好，且
阴性溶液无干扰。
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盐酸巴马汀、盐酸小檗碱含量［J］． 中成药，2010，
32(6) :958-960．
HPLC法同时测定麦味地黄胶囊中马钱苷、芍药苷和丹皮酚
冯发青1， 王恩源2， 伍 庆1， 龙风荣2， 柳立伟1， 洪 江3*
(1. 贵州师范大学，贵州 贵阳 550001;2. 贵州弘康药业有限公司，贵州 贵阳 550001;3. 贵州科学院，
贵州 贵阳 550001)
收稿日期:2012-03-14
基金项目:国家科技支撑计划项目 (2009BAI74B01-03) ;国家科技支撑计划项目 (2009BAI74B02-01) ;国家“863”计划项目
(2009AA043201)
作者简介:冯发青 (1989—) ，女，硕士生，研究方向:分析化学。Tel:15285055214，E-mail:fengfaqing@ 163. com
* 通信作者:洪 江 (1969—) ，女，助理研究员，研究方向:植物资源利用。Tel:13985022255，E-mail:hj-2786@ 163． com
摘要:目的 建立同时测定麦味地黄胶囊 (山茱萸、牡丹皮等)中马钱苷、芍药苷和丹皮酚的 RP-HPLC 方法。方法
采用 Diamonsil C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱;流动相为乙腈-0. 1%磷酸水溶液，梯度洗脱;体积流量 1. 0
mL /min;检测波长 235 nm;柱温 30 ℃。结果 马钱苷、芍药苷和丹皮酚分别在 0. 209 ～ 1. 253 μg (r = 0. 999 8)、
0. 182 ～ 1. 089 μg (r = 0. 999 7)和 0. 412 ～ 2. 470 μg (r = 0. 999 9)范围内呈良好的线性关系，平均回收率分别为
98. 22% (RSD为 1. 14%)、97. 88% (RSD为 0. 90%)和 99. 10% (RSD为 1. 37%)。结论 该法操作简便，测定结
果准确，可用于控制麦味地黄胶囊成品质量。
关键词:麦味地黄胶囊;马钱苷;芍药苷;丹皮酚;HPLC
中图分类号:R927. 2 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2012)12-2339-04
Simultaneous determination of loganin，paeoniflorin and paeonol in Maiwei Di-
huang Capsules by HPLC
FENG Fa-qing1， WANG En-yuan2， WU Qing1， LONG Feng-rong2， LIU Li-wei1， HONG Jiang 3*
(1. Guizhou Normal University，Guiyang 550001，China;2. Guizhou Hongkang Pharmaceutical Co．，Ltd．，Guiyang 550001，China;3. Guizhou Acade-
my of Sciences，Guiyang 550001，China)
ABSTRACT:AIM To propose RP-HPLC method for simultaneously determining loganin，paeoniflorin and pae-
onol in Maiwei Dihuang Capsules (Corni Fructus，Moutan Cortex，etc．)． MEIHODS RP-HPLC analyses were
carried out by using a Diamonsil C18 (250 mm × 4. 6 mm，5 μm)． The mobile phase was composed of acetoni-
trile-0. 1% phosphric acid solution with the gradient elution． The flow rate was 1. 0 mL /min and the detection
wavelength was set at 235 nm． The column temperature was 30 ℃ ． RESULTS The calibration curves of loganin，
paeoniflorin and paeonol were in good linearity over the ranges of 0. 209 －1. 253 μg (r =0. 999 8) ，0. 182 －1. 089 μg
(r = 0. 999 7) ，0. 412 ～ 2. 470 μg (r = 0. 999 9) ，respectively and the average recoveries were 98. 22% (RSD of
1. 14%) ，97. 88% (RSD of 0. 90%)and 99. 10% (RSD of 1. 37%) ，respectively． CONCLUSION The method
is simple，feasible and reproducible，and can be used for the quality control of Maiwei Dihuang Capsules．
KEY WORDS:Maiwei Dihuang Capsules;loganin;paeoniflorin;paeonol;HPLC
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2012 年 12 月
第 34 卷 第 12 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
December 2012
Vol． 34 No． 12