全 文 ：书　［收稿日期］　２０１５－０１－０６；２０１５－０４－１０修回
　［基金项目］　贵阳中医学院博士启动基金项目“纳米银多糖微胶囊的绿色制备及抗菌功能研究”（贵中医博２０１２－０５）；贵州省科技厅贵阳中
医学院联合基金项目“蕨类植物石韦的物质基础及活性研究”［黔科合中药字（２０１０）ＬＫＺ７０３０］
　［作者简介］　龙　毅（１９８０－），男，副教授，从事高分子化学、化学生物学、核酸化学、纳米医学四者交叉领域的研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｎｋｌｏｎｇｙｉ＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ
　＊通讯作者：杨武德（１９６８－），男，教授，从事中药质量标准及化学成分研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｗｄ＿６８０７０８＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１５）０５－０２６７－０１７９－０４
黔产石韦提取物对小鼠外周血白细胞数的影响
龙 毅，袁吉虎，许杨珊，杨武德＊
（贵阳中医学院，贵州 贵阳５５０００２）
　　［摘　要］为了解黔产石韦不同极性部位萃取物对小鼠外周血白细胞数的影响，采用溶剂法对有柄石韦
的不同极性部位进行萃取，用常规白细胞计数法评价不同极性部位萃取物对小鼠外周血白细胞数的影响，并
用ＨＰＬＣ法分析其氨基酸成分。结果表明：黔产石韦的极性较大部位萃取物对小鼠外周血白细胞数有明显
升高作用，极性较小部位无明显作用。水提组分可显著提高小鼠外周血白细胞数。黔产石韦中至少含有谷
氨酸、甘氨酸、丙氨酸和亮氨酸４种氨基酸。其中，谷氨酸含量为１．１８９ｍｇ／ｇ，甘氨酸为０．７０ｍｇ／ｇ，丙氨酸
和亮氨酸含量，分别为０．３６ｍｇ／ｇ和０．３４３ｍｇ／ｇ。结论：谷氨酸可能是黔产石韦水提组分中增加小鼠外周
血白细胞数的关键成分，甘氨酸具有协同作用。
［关键词］黔产石韦；提取物；外周血白细胞数；氨基酸
［中图分类号］Ｓ５６７ ［文献标识码］Ａ
Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　Ｐｙｒｒｏｓｉａ　ｐｅｔｉｏｌｏｓａ　Ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｉｎ　Ｇｕｉｚｈｏｕ　ｏｎ
Ｗｈｉｔｅ　Ｃｅｌ　Ｃｏｕｎｔ　ｉｎ　Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　Ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　Ｍｉｃｅ
ＬＯＮＧ　Ｙｉ，ＹＵＡＮ　Ｊｉｈｕ，ＸＵ　Ｙａｎｇｓｈａｎ，ＹＡＮＧ　Ｗｕｄｅ＊
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ，
Ｇｕｉｚｈｏｕ５５０００２，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｗｈｉｔｅ　ｃｅｌ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｏｌａｒｉｔｙ　ｆｒｏｍ　Ｐ．ｐｅｔｉｏｌｏｓａ
ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｉｎ　Ｇｕｉｚｈｏｕ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｎｏｒｍａｌ　ｗｈｉｔｅ　ｃｅｌ　ｃｏｕｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ　ａｍｉｎｏ
ａｃｉｄ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈｅｒ　ｐｏｌａｒｉｔｙ
ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｗｈｉｔｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｓ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ｌｏｗｅｒ　ｐｏｌａｒｉｔｙ　ｃａｎ
ｎｏｔ．Ｅｓｐｅｃｉａｌｙ，Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ｄｅｃｏｃｔｅｄ　ｌｉｑｕｉｄ　ｏｆ　Ｐ．ｐｅｔｉｏｌｏｓａ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｉｎ　Ｇｕｉｚｈｏｕ　ｗａｓ　ｔｈｅ
ｇｒｅａｔｅｓｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｉｃｅ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｗｈｉｔｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｓ．Ｉｔ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｔｈａｔ　ｔｈａｔ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　Ｐ．ｐｅｔｉｏｌｏｓａ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ
ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ａｔ　ｌｅａｓｔ．Ｇｌｕ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ（１．１８９ ｍｇ／ｇ），ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　Ｇｌｙ
（０．７０ｍｇ／ｇ），Ａｌａ　ａｎｄ　Ｌｅｕ　ｗｅｒｅ　ｔｈｅ　ｌｏｗｅｓｔ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　０．３６ｍｇ／ｇ　ａｎｄ　０．３４３ｍｇ／ｇ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｇｌｕ
ｗａｓ　ｐｒｅｓｕｍｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｋｅｙ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｆｏｒ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｉｃｅ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｗｈｉｔｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ
ｄｅｃｏｃｔｅｄ　ｌｉｑｕｉｄ　ｏｆ　Ｐ．ｐｅｔｉｏｌｏｓａｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｉｎ　Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｇｌｙ　ｗａｓ　ｏｆ　ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｙｒｒｏｓｉａ　ｐｅｔｉｏｌｏｓａ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｉｎ　Ｇｕｉｚｈｏｕ；ｅｘｔｒａｃｔｓ；ｗｈｉｔｅ　ｃｅｌ　ｃｏｕｎｔ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ；
ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ
　　石韦为蕨类植物水龙骨科植物石韦〔Ｐｙｒｒｏｓｉａ
ｌｉｎｇｕａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｆａｒｗｅｌ〕的全草，别名有柄石韦、
刀尖药、石茶叶，其性甘味苦，微寒，归肺、膀胱经，具
有清肺泄热、利水通淋、清热止血之功效。主要用于
淋病、小便不通、出血及肺热喘咳，属利水渗湿药［１］。
研究发现，石韦对因化疗及放疗引起的白血球减少
症状有明显的升白作用［２］。梅志洁等［３］将小鼠随机
分成ＣＴＸ（环磷酰胺）组、ＣＴＸ加石韦大枣小剂量
组、ＣＴＸ加石韦大枣中剂量组、ＣＴＸ加石韦大枣大
剂量组，分别用生理盐水和石韦大枣合剂不同剂量
连续灌喂，连续观察对试验小鼠白细胞、非特异性免
疫功能和粒－单系集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）的影响，
结果显示，环磷酰胺加石韦大枣合剂大剂量、中剂量
组白细胞下降程度明显低于单纯环磷酰胺组（Ｐ＜
０．０５），石韦大枣合剂能显著对抗ＣＴＸ导致的非特
异性免疫功能和粒－单系集落形成单位减少。表明，
石韦大枣合剂能明显增强单核－巨噬细胞系统功能，
提高机体免疫能力，对人体无毒副作用，能明显对抗
环磷酰胺所致的白细胞减少。石韦在贵州应用广
泛，是贵州各民族常用药，黔产石韦有明显的地区特
色和药用价值，研究黔产石韦的升白作用有显著的
经济意义及科学价值。因此，笔者所在研究组进行
了有柄石韦的不同极性部位萃取物对小鼠白细胞影
响的研究。中药的水溶液中通常含有氨基酸［４－５］，氨
基酸对于人体营养有极其重要的作用，具有调节人
体生理机能、增强免疫力的功效。谷氨酸在医学上
主要用于治疗肝性昏迷，甘氨酸可用作医学微生物
和生物化学氨基酸代谢研究的用药以及金霉素缓冲
剂、抗帕金森氏病药物Ｌ－多巴、维生素Ｂ６以及苏氨
酸等氨基酸的合成原料。丙氨酸可预防肾结石、协
　贵州农业科学　２０１５，４３（５）：１７９～１８２
　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
助葡萄糖代谢，有助缓和低血糖，改善身体能量。亮
氨酸可配制氨基酸输液及综合氨基酸制剂，可作降
血糖剂及植物生长促进剂。公认的具有显著升白效
果的中成药———阿胶中就含高达１８种氨基酸成
分［６］。植物氨基酸提高白细胞数的作用也早有研究
证实［７］。笔者等采用ＰＩＴＣ作为衍生试剂［８］，采用
ＲＰ－ＨＰＬＣ梯度洗脱法同时对石韦中氨基酸进行分
析，以期为黔产石韦提高白细胞数的进一步研究提
供理论依据。
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 仪器 高效液相色谱仪（日本岛津／ｌＣ－
２０ＡＴ），色 谱 柱 为 Ｗｅｌｃｈｒｏｍ　Ｃ１８ （２５０ ｍｍ×
４．６ｍｍ，５μｍ），粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公
司），光学显微镜（ＣＫＸ－４１，ＯＬＹＭＰＵＳ）。
１．１．２ 药材 小鼠外周血白细胞数对比试验所用
药材采自贵州凯里市雷山县，鉴定为石韦属水龙骨
科蕨类植物石韦全草。氨基酸成分分析试验所用石
韦药材粉末购自贵州百灵制药厂。氨基酸对照品
（中国药品生物制品检定所提供，批号：１０００８０－
２００７０７，包括Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ａｌａ），ＰＩＴＣ（纯度标示
量为９９％），购自贵州银华科技有限公司，其他试剂
均为分析纯。
１．１．３ 小白鼠 昆明种，体重１８～２２ｇ，雌雄各
半，清洁级。由贵阳医学院提供，合格证号：ＳＣＸＫ
（黔）２００２－００１。
１．２ 黔产石韦不同极性部位萃取物的制备
将所有采集的石韦全株阴干后除去杂质并粉碎
成粗粉备用。
１）醇提物。将有柄石韦的粗粉用７５％乙醇提
取３次，合并提取液，水浴６０℃挥发，得流浸膏，提
物备用。
２）水提物。将药材醇提后的药渣阴干，于温度
约７０℃热水中煎煮３次，合并滤液至蒸发皿中蒸
干，放入干燥箱内干燥，备用。
３）石油醚部位。将醇提物流浸膏用温水（温度
约为４０℃）溶解，用石油醚重复萃取至无色即可，合
并液，浓缩，置水浴锅上蒸干，备用。
４）乙酸乙酯部位。将石油醚萃取后的水溶液
于水浴锅上挥发掉残余的石油醚后，用乙酸乙酯萃
取剩余溶液，合并液，浓缩，干燥备用。
５）正丁醇部位。将乙酸乙酯萃取后的水溶液
于水浴锅上挥发掉残余的乙酸乙酯后，用正丁醇萃
取，合并液，浓缩，干燥备用。
６）剩余部位。将正丁醇萃取完成后的剩余部
位转至蒸发皿中，置于水浴锅上浓缩，待全部水分蒸
干后放进干燥箱内干燥后备用。
１．３ 黔产石韦提取物对小鼠外周血白细胞数的影响
取小白鼠１４０只，雌雄各半，随机分为１４组，分
别为空白对照组!阳性对照组（灌胃阿胶，３ｇ／ｋｇ）
和给药组（分别为醇提物大剂量组、小剂量组，水提
物大剂量组、小剂量组，石油醚萃取物大剂量组、小
剂量组，乙酸乙酯萃取物大剂量组、小剂量组，正丁
醇萃取物大剂量组、小剂量组，剩余部位大剂量组、
小剂量组；以上各组剂量分别为７ｇ／ｋｇ、２．０ｇ／ｋｇ，
７ｇ／ｋｇ、２．０ｇ／ｋｇ，１．０ｇ／ｋｇ、０．３ｇ／ｋｇ，０．９ｇ／ｋ、
０．３ｇ／ｋｇ，１．８ｇ／ｋｇ、０．６ｇ／ｋｇ 和 ３．３ ｇ／ｋｇ、
１．１ｇ／ｋｇ）。分别对各组小白鼠进行断尾取血
４０μＬ，加入盛有２８０μＬ白细胞稀释液的具塞离心
管中，摇均，静置。取１０μＬ，滴于白细胞计数板，光
学显微镜低倍镜下观察，记录计数板上第二象限和
第四象限上的白细胞数，以两次计数的平均值表示
小鼠外周血白细胞数基础值。取血后第２天开始给
药，空白对照组以０．１ｍＬ／１０ｇ灌胃生理盐水，阳性
组以０．３ｇ／ｍＬ的阿胶混悬液按０．１ｍＬ／１０ｇ灌胃
给药，给药组按相应剂量以０．１ｍＬ／１０ｇ灌胃给药，
连续１０ｄ，每天１次。第１１天分别对各组小白鼠进
行白细胞测定，方法同上。记录白细胞数。
１．４ 黔产石韦氨基酸成分分析
１） 色 谱 条 件。色 谱 柱 为 Ｗｅｌｃｈｒｏｍ　Ｃ１８
（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ），流动相Ａ为０．１ｍｏｌ／Ｌ
的醋酸钠缓冲液（以醋酸钠ｐＨ６．５）－乙腈（９３∶７），
流动相Ｂ为乙腈－水（４∶１），检测波长为２５４ｎｍ，柱
温为３０℃，流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ，进样量为５μＬ，进
行梯度洗脱。
２）对照品溶液的制备及标准曲线的绘制。取４
种氨基酸适量，精密称定，加入０．１ｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液
制成每１ｍＬ分别含谷氨酸（Ｇｌｕ）０．１２３ｍｇ、甘氨酸
（Ｇｌｙ）０．０７９　２ｍｇ、丙氨酸（Ａｌａ）０．０６５ｍｇ、亮氨酸
（Ｌｅｕ）０．０７２ｍｇ溶液，即得对照品储备液。分别吸
取氨基酸对照品储备液１ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ、５ｍＬ和
１０ｍＬ，分别置２５ｍＬ 量瓶中，加入０．１ｍｏｌ／Ｌ
ＰＩＴＣ－乙腈溶液及１ｍｏｌ／Ｌ三乙胺－乙腈溶液至刻
度，混匀。取溶液１０ｍＬ，加入正己烷１５ｍＬ，放置
２０ｍｉｎ，取下层溶液，微孔滤膜（０．４５μｍ）过滤，得
系列浓度溶液，按上述色谱条件进样色谱检测，测定
峰面积。分别以氨基酸对照品峰面积ｙ为纵坐标，
４种氨基酸对照品浓度ｘ（μｇ／ｍＬ）为横坐标，绘制
工作曲线，计算回归方程。
３）供试品溶液的制备。称取研匀后样品粉末
０．６ｇ，精密称定，置安瓿瓶中，加入水解液（含０．５％
苯酚的５０％盐酸溶液）１０ｍＬ，熔封安瓿，用纱布包
裹，于１５０℃水解１ｈ，放冷，过滤，并用水清洗滤渣，
合并 滤 液 和 洗 液 于 蒸 发 皿 中，蒸 干，残 渣 用
０．１ｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液１５ｍＬ分３次溶解洗涤并转移
至２５ｍＬ容量瓶中，加入０．１ｍｏｌ／Ｌ　ＰＩＴＣ－乙腈溶
液［９］及 ｍｏｌ／Ｌ三乙胺－乙腈溶液各２．５ｍＬ，混匀，室
温放置 １ｈ，加 ５０％ 乙腈溶液至刻度。取溶液
１０ｍＬ，加入正己烷１５ｍＬ，放置２０ｍｉｎ，取下层溶
·０８１·
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
液，微孔滤膜（０．４５μｍ）过滤即得。
４）样品含量测定。取供试品溶液５ｍＬ，置于
２５ｍＬ量瓶中，加入０．１ｍｏｌ／Ｌ　ＰＩＴＣ－乙腈溶液及
１ｍｏｌ／Ｌ三乙胺－乙腈溶液至刻度，混匀。取溶液
１０ｍＬ，加入正己烷１５ｍＬ，放置２０ｍｉｎ，取下层溶
液，微孔滤膜（０．４５μｍ）过滤所得溶液，按上述色谱
条件进样色谱条件，测定峰面积，对应标准曲线读取
相应浓度。
１．５ 数据分析
采用Ｅｘｃｅｌ　２００３进行数据整理与分析。
２ 结果与分析
２．１ 不同极性部位的萃取率
由表１可知，不同极性部位的萃取率差异不大。
其中，萃取后剩余部位的萃取率最高，达４．７３％；正
丁醇部位其次，为２．５１％；石油醚部位和乙酸乙酯
部位的萃取率较低，分别为１．５３％和１．３６。
２．２ 不同极性部位萃取物对小鼠外周血白细胞数
的影响
由表２可知，与空白对照组比较，阳性对照组能
明显提高小鼠外周血白细胞数；水提物大剂量组、小
剂量组，醇提物大剂量组、小剂量组，正丁醇大剂量
组!小剂量组和剩余部位大剂量组!小剂量组均能
明显提高小鼠外周血白细胞数。其中，阳性对照组、
水提物大剂量组、水提物小剂量组、醇提物大剂量
组、正丁醇大剂量组、正丁醇小剂量组和剩余部位大
剂量组达０．００１显著水平；醇提物小剂量组和剩余
部位小剂量组达０．０１显著水平。石油醚大剂量组、
小剂量组、乙酸乙酯大剂量组和小剂量组对小鼠外
周血白细胞数无明显影响。其中，水提取物的效果
最明显。
表１ 黔产石韦不同提取部位的萃取率
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐａｒｔｓ　ｏｆ　Ｐ．ｐｅｔｉｏｌｏｓａ
部位
Ｐａｒｔ
生药材重量／ｇ
Ｃｒｕｄｅ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｗｅｉｇｈｔ
浸膏重量／ｇ
Ｅｘｔｒａｃｔ　ｗｅｉｇｈｔ
萃取率／％
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
石油醚Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ　ｅｔｈｅｒ　 ５００　 １５．３３　 １．５３
乙酸乙酯 Ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　 ５００　 １３．６０　 １．３６
正丁醇 Ｎ－ｂｕｔｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　 ５００　 ２５．１６　 ２．５１
萃取后剩余 Ｒｅｓｉｄｕｅｓ　 ５００　 ４７．３０　 ４．７３
表２ 黔产石韦各极性萃取物给药后小鼠外周血白细胞数
Ｔａｂｌｅ　２　Ｗｈｉｔｅ　ｃｅｌ　ｃｏｕｎｔ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｏｌａｒｉｔｙ
组别
Ｇｒｏｕｐ
动物／只
Ａｎｉｍａｌｓ
剂量／（ｇ／ｋｇ）
Ｄｏｓｅ
给药前白细胞数
（基础值）
Ｂａｓｅ　ｖａｌｕｅ
给药后白细胞数
Ｗｈｉｔｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌ
ｃｏｕｎｔ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ
升高值
Ｅｎｈａｎｃｅｄ
ｖａｌｕｅ
空白对照组 １０ － １０６．３５±１６．８５　 １０９．２８±１９．１１　 ５．５０±３．０１
阳性对照组 １０　 ３　 ９８．４５±１３．７２　 ２４３．７７±１４．４２　 １４５．３２±２２．１２＊＊＊
水提物大剂量组 ８　 ６．８　 １００．７１±１１．７７　 １６４．３８±１６．８３　 ６２．５０±１１．０３＊＊＊
水提物小剂量组 ８　 ２．３　 １０１．６２±９．４７　 １１３．７５±１０．９９　 １２．１２±３．８３＊＊＊
醇提物大剂量组 ８　 ６．８　 １１３．３７５±６．９２　 １３７．８８±１１．１６　 ２４．５０±６．４１＊＊＊
醇提物小剂量组 ８　 ２．３　 １０５．７５±７．５０　 １１９．６３±７．４４　 １３．８７±４．９４＊＊
石油醚大剂量 ９　 ０．１　 １０４．３３±４．９２　 １１４．４４±２．０６　 １０．１１±５．８４
石油醚小剂量 ８　 ０．３　 ９１．２５±７．５６　 ９６．８７±７．８４　 ５．６２±０．７９
乙酸乙酯大剂量组 ８　 ０．０９　 １０５．６８±６．６０　 １１４．８８±４．９４　 ９．１８±５．７７
乙酸乙酯小剂量组 ８　 ０．０３　 ８７．４４±７．２２　 ９５．７５±９．３４　 ８．３１±７．１８
正丁醇大剂量组 １０　 ０．１７　 １０２．７８±７．４２　 １７３．７８±２３．７５　 ７１．００±８．７４＊＊＊
正丁醇小剂量组 １０　 ０．０５　 ８７．１０±８．４０　 １２７．４０±２２．３１　 ４０．３０±２５．５９＊＊＊
剩余部位大剂量组 １０　 ０．３２　 ９８．９０±８．５８　 １２２．２０±９．４４　 ２３．３０±４．８４＊＊＊
剩余部位小剂量组 ９　 ０．１１　 １０７．９４±５．２９　 １２２．００±８．６５　 １５．０±５．９２＊＊
　注：与空白对照组比较：＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１，＊＊＊Ｐ＜０．００１。
　Ｎｏｔｅ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｂｌａｎｋ　ｃｏｎｔｒｏｌ，＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１，＊＊＊Ｐ＜０．００１．
表３ 黔产石韦中４种氨基酸的含量
　　Ｔａｂｌｅ　３　Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｉｎ
Ｐ．ｐｅｔｉｏｌｏｓａ
氨基酸
Ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ
含量／（ｍｇ／ｇ）
Ｃｏｎｔｅｎｔ
ＲＳＤ／％
谷氨酸 Ｇｌｕ　 １．１８９　 ０．２０
甘氨酸 Ｇｌｙ　 ０．７００　 ０．０３
丙氨酸 Ａｌａ　 ０．３６０　 １．４０
亮氨酸Ｌｅｕ　 ０．３４３　 ０．３３
２．３ 黔产石韦氨基酸成分
目前，较少有涉及石韦中氨基酸的成分及含量
的研究，本研究表明，黔产石韦中至少含有４种氨基
酸，其对应的含量见表３，各种氨基酸含量顺序为谷
氨酸＞甘氨酸＞丙氨酸＞亮氨酸，这与刘恒霞等在
５种蕨类植物中发现的氨基酸含量顺序［１０］基本吻
合。这４种氨基酸中，谷氨酸的含量最高，因此可以
推测，谷氨酸是黔产石韦水提取物提高小鼠外周血
白细胞数的关键成分。但与刘恒霞等在其他蕨类植
物中的发现不同，黔产石韦中的甘氨酸含量几乎是
丙氨酸或亮氨酸含量的两倍。这一特殊现象说明，
甘氨酸很可能对提高小鼠外周血白细胞数起协同作
用。
·１８１·
　龙　毅 等　黔产石韦提取物对小鼠外周血白细胞数的影响
　ＬＯＮＧ　Ｙｉ　ｅｔ　ａｌ　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　Ｐｙｒｒｏｓｉａ　ｐｅｔｉｏｌｏｓａ　Ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｉｎ　Ｇｕｉｚｈｏｕ　ｏｎ　Ｗｈｉｔｅ　Ｃｅｌ　Ｃｏｕｎｔ　ｉｎ　Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　Ｂｌｏｏｄ　ｏｆ
Ｍｉｃｅ
３ 结论与讨论
本研究采用溶剂法提取了黔产石韦的不同极性
化学部位，并通过常规白细胞计数法评价了不同极
性化学部位对小鼠外周血白细胞数的影响。结果发
现，黔产石韦水提部位、醇提部位、正丁醇部位、剩余
部位这些极性较大部位均对小鼠外周血白细胞数有
明显升高作用，而石油醚、乙酸乙酯部位这两个极性
较小部位没有明显升白效果，其中，水提组分升白效
果最为显著。参考过去的研究工作，氨基酸组分被
猜测为水提部位中主要起升白效果的成分，因此本
研究组尝试应用标准品对照的 ＨＰＬＣ方法定量分
析黔产石韦中氨基酸成分组成及含量，结果发现，黔
产石韦中至少含有谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸和亮氨酸
４种氨基酸。４种氨基酸的相对标准偏差均小于
３．０％。其中以谷氨酸含量最高。
居霞筠研究组的工作显示［１１］，谷氨酸的锂盐具
有明显的升高小鼠外周血中白细胞数量的作用，除
了锂离子的升白作用外，很可能谷氨酸根离子也参
与了作用。因此，结合本研究结果，推测谷氨酸是黔
产石韦水提取物中起到升白效果的关键成分。此
外，本研究还发现，甘氨酸含量几乎是丙氨酸或亮氨
酸含量的两倍，这与过去在其他的蕨类植物中发现
的３种氨基酸含量接近的结果有明显区别。过去的
研究发现甘氨酸具有细胞保护的作用［１２］。在黔产
石韦的升白过程中，很可能谷氨酸和甘氨酸均有参
与。谷氨酸刺激新的白细胞生成，而甘氨酸则保护
已有的白细胞不被机体或外来物质破坏而发生凋
亡，即黔产石韦的升白效果是谷氨酸和甘氨酸２种
氨基酸的协同作用。
与过去的研究相比，本研究明确了黔产有柄石
韦的各极性组分升白效果的区别，推测药物分子极
性很可能会影响药材的升白效果，并且详细研究了
黔产石韦的氨基酸成分，推断了谷氨酸对于黔产石
韦升白效果的关键作用。对黔产石韦升白效果的进
一步研究提供了理论依据。
［参 考 文 献］
［１］ 阴 健，顾海鸥，何希荣，等．中药现代临床与应用Ⅱ
［Ｍ］．北京：中国古籍出版社，１９９５：１０４－１０６．
［２］ 程显隆，肖新月，邹秦文，等．柱前衍生化 ＨＰＬＣ法同
时测定阿胶中４种主要氨基酸的含量［Ｊ］．药物分析
杂志，２００８，２８（１２）：１９９７．
［３］ 梅志洁，李文海，邓常青．石韦大枣合剂治疗环磷酰胺
所致小鼠白细胞减少症的实验研究［Ｊ］．湖南中医学
院学报，２００２，２２（２）：３３－３４．
［４］ 袁铸人．论中药成分中的氨基酸分析［Ｊ］．中成药，
１９８９，１１（６）：４６－４７．
［５］ 于永辉，籍国霞，臧恒昌．中药中氨基酸分析测定技术
研究进展［Ｊ］．食品与药品，２０１４，１６（５）：３７１－３７３．
［６］ 金在久．阿胶化学成分及现代药理研究进展［Ｊ］．时珍
国医国药，２００５，１６（１２）：１３０１－１３０２．
［７］ 刘涤尘，胥家红，薛 雁．田参氨基酸治疗８８例白细
胞减少症的疗效观察［Ｊ］．临床医学杂志，１９８８，４（８）：
１５０．
［８］ 曾文珊，廖海明，杨昭鹏，等．重组人甲状旁腺激素
１－３４的氨基酸组成分析［Ｊ］．药物生物技术，２００３，１０
（２）：１０８．
［９］ 李 沽，鼋玉懿．石韦有效成分的高效液相色谱测定
［Ｊ］．药学学报，１９９２，２７（２）：１５３．
［１０］ 刘恒霞，余 鹏，王慧忠．高效液相色谱测定蕨类植物
中氨基酸含量［Ｊ］．氨基酸和生物资源，２０１１，３３（３）：
３０－３３．
［１１］ 居霞筠，孙以方．谷氨酸锂对动物白细胞影响的研究
［Ｊ］．兰州医学院学报，１９９２，１８（３）：１６９－１７１．
［１２］ 袁小娟，吴希茜．甘氨酸的生理作用与应用［Ｊ］．饮料
工业，２０１１，１４（７）：５－７．
（责任编辑：刘　海）
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