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2014,43(3): 197 ~ 201.
Subtropical Plant Science
猫须草 HPLC 指纹图谱研究
李金雨，陈 淳，林建忠，胡维冀，许文江
（福建省亚热带植物研究所，福建省亚热带植物生理生化重点实验室，福建 厦门 361006）

摘 要：为建立猫须草药材HPLC指纹图谱分析方法，采用高效液相色谱法，以Phenomenex Synergi 4u hydro-RP
250×4.60 mm为色谱柱，以甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱，检测波长 254 nm，流速 1.0 mL·min-1，柱
温 40 ℃。结果表明，建立的猫须草药材HPLC指纹图谱，确定了 15 个共有峰，各猫须草样品指纹图谱与对照
指纹图谱的相似度均在 0.9 以上。该方法简单、准确、重复性好，为更好地控制猫须草药材质量提供有效可靠
的方法。
关键词：猫须草；HPLC；指纹图谱
Doi: 10.3969/j.issn.1009-7791.2014.03.003
中图分类号：S567; R282.5 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2014)03-0197-05

Study on HPLC Fingerprint Analysis of Clerodendranthus spicatus
LI Jin-yu, CHEN Chun, LIN Jian-zhong, HU Wei-ji, XU Wen-jiang
（Fujian Key Laboratory of Subtropical Plant Physiology and Biochemistry, Fujian Institute of Subtropical Botany, Xiamen
361006, Fujian China)

Abstract: To establish a method of fingerprint analysis on Clerodendranthus spicatus by HPLC, the
chromatographic fingerprint was obtained by Phenomenex Synergi 4u hydro-RP 250×4.60 mm with
the gradient elution solvent system composed of methanol-0.1% formic acid. The detective
wavelength was 254 nm; the flow rate was 1.0 mL·min-1 and the column temperature was maintained
at 40 ℃. The results showed that 15 co-possessing peaks were selected as the fingerprint peaks of C.
spicatus and good similarities with correlation coefficients higher than 0.9 were found in fingerprints
between the different samples of C. spicatus and the standard fingerprint. The method with good
reproducibility was simple and accurate, it could be used as a effective quality control method for C.
spicatus.
Key words: Clerodendranthus spicatus; HPLC; fingerprint

猫须草Clerodendranthus spicatus为唇形科肾茶属植物，由于其雄蕊酷似猫的胡须，故有此名，别
名肾茶、猫须公。原产于印度尼西亚、印度、缅甸、菲律宾、澳大利亚等国，我国分布于福建、台湾、
海南、广西、云南西双版纳等地。猫须草的主要药效成分有迷迭香酸、熊果酸、黄酮类及肌醇等，具
有利尿排石、抗炎、抗菌、调节免疫力、抗氧化、抗血小板聚集、抗血栓作用以及抗系膜细胞增殖等
药理作用[1—3]。据临床试验显示，猫须草可治疗急慢性肾炎、膀胱炎、肾结石、尿路结石、胆结石、胆
囊炎、肝炎、肝硬化、高血压、风湿性关节炎、前列腺炎等疾病[1—12]，尤其对肾结石、尿路结石、胆
结石、胆囊炎有特殊疗效，被誉为“国际利尿化石药”。猫须草还具有抗氧化作用，有助于阻止癌细胞
的成长和扩散，可作为辅助药物，应用在各种癌症治疗上。
中药指纹图谱是近年来迅速发展起来的一种中药质量控制模式，相对于以单个或少数主要成分作
收稿日期：2014-06-26
基金项目：福建省省属公益类科研院所基本科研专项(2010R1012-4)
作者简介：李金雨，硕士，副研究员，从事植物资源研究。E-mail: fjxmljy01@163.com
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为指标来控制中药材质量的方法，中药指纹图谱能较为全面地反映中药饮片或制剂的内在质量，具有
系统性、整体性和稳定性等特点[13]。HPLC指纹图谱在猫须草药材质量控制上的应用未见报道，猫须草
的HPLC指纹图谱研究对其药用保健开发具有重要意义。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
迷迭香酸（中国食品药品检定研究院）标准样品购自北京
德威钠生物技术有限公司，0.1%甲酸和甲醇（美国TEDIA）购
自厦门市海晟泰化工有限公司。猫须草试验样品来源见表1。
1.2 方法
1.2.1 色谱条件 主机Waters2695；Waters2998PAD检测器；柱
子Phenomenex Synergi 4u hydro-RP 250×4.60 mm；进样 10 μL；
柱温 40 ℃；检测波长 254 nm；流动相为 (A) 0.1%甲酸和(B)
甲醇；流速 1.0 mL·min-1。梯度洗脱条件见表 2。
表1 猫须草测试样品来源
Table 1 The source of Clerodendranthus
spicatus samples
样品编号 样品来源
S1 福建省亚热带植物研究所资源圃
S2 厦门市华侨亚热带植物引种园
S3 厦门市园林植物园
S4 厦门万河生物研发有限公司
S5 福建省热带作物研究所
S6 福建农林大学
S7 福建省莆田市仙游县度尾镇
S8 福建省莆田市仙游县园庄镇
S9 福建省莆田市城厢区黄石镇
1.2.2 对照品溶液制备 精密称取迷迭香酸对照品10 mg，用
甲醇溶解，定容至100 mL，然后分别配成5个不同质量浓度
（50、40、30、20、10 μg·mL-1）的单标对照品溶液。
1.2.3 供试品溶液制备 猫须草药材晒干，剪成长度约5 cm，
用中药粉碎机粉碎，在50 ℃烘箱中干燥10 h，过40目筛，称
取100 g装入1 L料筒。将料筒放入1 L超临界萃取釜中，进行
超临界CO2萃取，达到所选定的萃取温度（40 ℃）、萃取压
力（15 MPa）、萃取时间（60 min）与夹带剂乙醇200 mL后，
从分离釜I和分离釜II的出料口出料，得到猫须草乙醇萃取液。经0.45 μm微孔滤膜过滤，供HPLC测定。
表2 梯度洗脱程序
Table 2 The gradient elution solvent system
时间/min 流速/mL·min-1 甲酸/% 甲醇/%
1 1.00 60.0 40.0
2 15.00 1.00 40.0 60.0
3 40.00 1.00 20.0 80.0
4 60.00 1.00 0.0 100.0
5 75.00 1.00 0.0 100.0
6 85.00 1.00 60.0 40.0
7 89.00 1.00 60.0 40.0
1.2.4 方法学考察
1.2.4.1 精密度试验 精密称取猫须草10 g，按“1.2.3”操作制备试验样品，在上述色谱条件下重复进样6
次，检测精密度。
1.2.4.2 重复性试验 精密称取猫须草10 g，按“1.2.3”操作制备试验样品，平行制备6份供试样品溶液，
在上述色谱条件下重复检测6次，检验测定结果的重复性。
1.2.4.3 稳定性试验 精密称取猫须草10 g，按“1.2.3”操作制备试验样品，在上述色谱条件下，分别在0、
2、4、6、8 h进样分析，检测样品的稳定性。
2 结果与分析
2.1 方法学考察结果
2.1.1 精密度试验 计算峰面积值的相对标准偏差（RSD），各标准品测定的RSD均小于5%，测定的指
纹图谱相似度均大于0.90，表明方法的精密度良好。
2.1.2 重复性试验 各标准品含量的RSD均小于5%，各指纹图谱的相似度均大于0.90，表明方法的重复
性良好。
2.1.3 稳定性试验 各峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD均小于5% ，即供试样品溶液在
室温放置8 h仍然稳定。
2.2 指纹图谱的建立
2.2.1 对照品迷迭香酸和样品的指纹图谱 分别精密吸取迷迭香酸标准溶液和供试品溶液各10 μL，注
入高效液相色谱仪，记录50 min的色谱图，经比较分析确定15个谱峰为猫须草的共有峰，结果见图1、
图2、图3。计算共有峰的相对保留时间和共有峰相对峰面积，结果见表3、表4。
第 3 期 李金雨,等：猫须草 HPLC 指纹图谱研究 ﹒199﹒
时间/min
图1 对照品迷迭香酸的HPLC图谱
Fig. 1 The HPLC fingerprint of rosmarinic acid used as reference



时间/min
图2 9批猫须草样品的色谱指纹图谱
Fig. 2 The HPLC fingerprint of 9 samples of Clerodendranthus spicatus

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时间/min
图3 猫须草HPLC图谱的15个共有峰（1～15为9批样品共有峰）
Fig. 3 The co-possessing peaks of HPLC fingerprint of Clerodendranthus spicatus
表 3 9批猫须草共有峰的相对保留时间(min)
Table 3 The relative retention time of co-possessing peaks of Clerodendranthus spicatus (min)
样品号 峰号
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9
均值
1 7.398 7.399 7.397 7.388 7.395 7.400 7.396 7.392 7.402 7.396
2 8.693 8.688 8.689 8.691 8.691 8.695 8.686 8.697 8.690 8.691
3 9.992 9.995 9.989 9.997 9.986 9.993 9.992 9.998 9.990 9.992
4 10.362 10.368 10.366 10.372 10.374 10.360 10.365 10.376 10.362 10.367
5 15.311 15.310 15.313 15.315 15.316 15.309 15.306 15.319 15.314 15.312
6 21.842 21.840 21.844 21.838 21.850 21.839 21.847 21.848 21.846 21.843
7 23.098 23.090 23.095 23.092 23.093 23.095 23.091 23.088 23.093 23.092
8 25.522 25.518 25.520 25.526 25.528 25.523 25.521 25.518 25.517 25.521
9 26.207 26.210 26.209 26.205 26.212 26.206 26.209 26.214 26.212 26.209
10 28.506 28.509 28.505 28.508 28.510 28.509 28.512 28.511 28.507 28.508
11 30.294 30.292 30.296 30.290 30.288 30.298 30.293 30.294 30.292 30.294
12 32.919 32.919 32.917 32.920 32.916 32.918 32.919 32.919 32.917 32.918
13 33.709 33.710 33.705 33.706 33.703 33.701 33.712 33.709 33.714 33.707
14 34.358 34.360 34.358 34.356 34.359 34.353 34.357 34.358 34.356 34.357
15 39.529 39.533 39.536 39.543 39.539 39.541 39.535 39.537 39.539 39.536

表4 9批猫须草共有峰的相对峰面积(μV·s)
Table 4 The relative peak area of co-possessing peaks of Clerodendranthus spicatus (μV·s)
样品号 峰号
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9
均值
1 115807 115810 115809 115805 115828 115789 115815 115827 115785 115808
2 1155028 1155040 1155048 1155028 1155018 1155030 1155022 1155024 1155048 1155031
3 124920 124932 124924 124928 124896 124880 124936 124896 124922 124915
4 80434 80442 80406 80412 80418 80440 80426 80428 80435 80427
5 130452 130432 130428 130444 130462 130452 130448 130438 130440 130444
6 1943880 1943864 1943876 1943886 1943890 1943866 1943860 1943878 1943854 1943872
7 687413 687423 687418 687386 687370 687434 687422 687392 687442 687411
8 259039 259022 259014 259066 259022 259028 259046 259050 259032 259036
9 5444833 5444812 5444820 5444798 5444844 5444852 5444802 5444824 5444854 5444827
10 328798 328810 328822 328830 328782 328790 328788 328806 328788 328802
11 476513 476533 476520 476554 476562 476496 476488 476522 476545 476537
12 212691 212671 212688 212666 212704 212712 212675 212650 212642 212678
13 175852 175821 175835 175844 175872 175866 175828 175836 175848 175845
14 473410 473428 473412 473440 473436 473401 473436 473427 473418 473423
15 228235 228224 228243 228261 228252 228228 228246 228253 228225 228241

2.2.2 指纹图谱相似度计算 采用药典委员会推荐的中药色谱指纹图谱相似度评价系统（A版），对9
批猫须草药材进行相似度评价。将猫须草指纹图谱导入相似度评价软件，设定匹配模板，进行谱峰自
动匹配，生成对照指纹图谱，进行相似度评价，相似度分别为0.986、0.984、0.975、0.983、0.948、0.968、
0.964、0.974、0.949。表明9批样品与对照指纹图谱相似度良好，对照图谱可作为猫须草的指纹图谱(图4)。
﹒201﹒第 3 期 李金雨,等：猫须草 HPLC 指纹图谱研究
时间/min
图4 对照指纹图谱
Fig. 4 The standard fingerprint of Clerodendranthus spicatus
3 讨论
在实验中还分别对提取溶剂、检测波长、流动相系统等进行了全面的考察。采用乙醇、甲醇、乙
酸乙酯、三氯甲烷分别作为提取溶剂，结果以甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷作为提取溶剂的供试品溶液
色谱峰较少，乙醇作为提取溶剂所得色谱峰较多，且分离度好，故确定采用乙醇作为提取溶剂。
采用二极管阵列检测器对图谱进行全波长扫描，结果在 254 nm 下色谱图基线较平稳，色谱峰信息
较为丰富，因此选用 254 nm 作为测定波长。选用甲醇-0.1%甲酸、甲醇-水、甲醇-1%冰醋酸、乙腈-冰
醋酸四种流动相系统进行比较试验，其中甲醇-水、甲醇-1%冰醋酸、乙腈-冰醋酸三种流动相的色谱峰
少、峰形差，而甲醇-0.1%甲酸作为流动相的色谱峰多、峰形较好，故选用甲醇-0.1%甲酸作为流动相。
本研究以迷迭香酸为参照峰，确定了猫须草中 15 个共有峰，并通过相似度计算软件得到 9 批猫须
草的对照图谱及各批样品与对照指纹图谱之间的相似度，结果均大于 0.9，表明各批猫须草药材质量较
稳定。猫须草对照指纹图谱能提供较为全面的质量控制信息，更好地反映药材的全貌，可作为猫须草
的质量评价方法之一。
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