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假蒟提取物对斜纹夜蛾幼虫拒食及成虫产卵的驱避活性



全 文 :[文章编号]1001-3601(2014)06-0321-0064-05
假蒟提取物对斜纹夜蛾幼虫拒食及成虫产卵的驱避活性
刘红芳
(长江师范学院 生命科学与技术学院,重庆408100)
  [摘 要]为探明假蒟提取物对斜纹夜蛾幼虫的拒食及成虫产卵的驱避活性,采用石油醚、氯仿、乙酸已
酯、乙醇和甲醇为提取溶剂,对假蒟根、茎、叶进行分步提取,研究假蒟提取物对斜纹夜蛾幼虫的拒食及成虫
产卵的驱避活性。结果表明:假蒟根与茎的石油醚提取物和根的氯仿提取物对斜纹夜蛾幼虫的拒食率分别
为99.67%、98.53%和68.60%,不同溶剂其余部位提取物拒食率均<40%;非选择性拒食中浓度(AFC50)
分别为0.47%、0.95%和4.70%,选择性拒食中浓度(AFC50)分别为0.35%、0.35%和3.55%。不同溶剂
各部位假蒟提取物对斜纹夜蛾成虫产卵忌避作用不明显,均<40%。
[关键词]假蒟;提取物;斜纹夜蛾;拒食;驱避
[中图分类号]S482.3 [文献标识码]A
Repelent and Antifeedant Efect of Extracts from
Piper sarmentosumon Spodoptera litura
LIU Hongfang
(Life Science and Technology Institute,Yangtze Normal University,Chongqing408100,China)
  Abstract:Taking petroleum ether,chloroform,acetic acid,ethyl alcohol and methyl alcohol as
extraction solvents,root,stem and leaf of P.sarmentosum were extracted step by step to explore the
P.sarmentosumextract activity against the larvae and adult of S.litura.The results showed that the
antifeedant rates of extract with petroleum ether from roots of P.sarmentosum,the extract with
petroleum ether from stems of P.sarmentosum and the extract with chloroform from roots of
P.sarmentosumwere 99.67%,98.53%and 68.60%respectively.The antifeedant rates of extracts from
other parts with different solvents were al lower than 40%;nonselective AFC50was respectively 0.47%,
0.95%and 4.70%,selective AFC50 was respectively 0.35%,0.35% and 3.55%.The extract from
different parts and different solvents of P.sarmentosumhad no significant oviposition deterrent.
Key words:Piper sarmentosum;extracts;Spodoptera litura;antifeedant;repelent
  假蒟(Piper sarmentosum Roxb.)属胡椒科的
一类药用植物,在我国南方分布十分广泛[1]。现代
药理试验证明,假蒟具有温中暖胃、驱风行气、化湿
消肿、行气通窍等药性[2]。斜纹夜蛾(Spodoptera
litura Fabricius)属鳞翅目(Lepidoptera)夜蛾科
(Noctuidae),是一种世界性分布的农业害虫,其食
性很广,已知寄主达290种以上[3]。由于化学农药
长期大量使用,使得该虫对许多杀虫剂产生了不同
程度的抗性[4-5]。关于假蒟提取物在农业害虫上的
应用,覃伟权等[6-9]分别研究了其对椰心叶甲
(Brontispa longissima)、斜纹夜蛾、比哈小爪螨(Ol-
igonychus biharensis)和皮氏叶螨(Tetranychus pier-
cei)的拒食、产卵驱避及抑制产卵等方面的生物活性。
在已有的研究中,仅刘红芳等[7]研究了假蒟提取物对
斜纹夜蛾的拒食活性,但仅局限于对假蒟全株乙醇粗
提物对斜纹夜蛾拒食活性的研究。为进一步探明假
蒟植株各部位不同溶剂提取物对斜纹夜蛾幼虫的拒
食及成虫产卵的驱避活性,笔者等采用石油醚、氯仿、
乙酸已酯、乙醇和甲醇等不同极性溶剂对假蒟根、茎、
叶进行系列溶剂分步提取,研究假蒟提取物对斜纹夜
蛾幼虫的拒食及成虫产卵的驱避活性,以期为斜纹夜
蛾高效低毒植物保护剂的开发应用提供依据。
 [收稿日期] 2014-01-20;2014-06-07修回
 [作者简介] 刘红芳(1978-),女,讲师,硕士,从事植物病虫害防治研究。E-mail:lhongfang@
櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃
163.com
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(2):17-18.
(责任编辑:聂克艳)
 贵州农业科学 2014,42(6):64~68
 Guizhou Agricultural Sciences
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 斜纹夜蛾 斜纹夜蛾卵块,采自中国热带
农业科学院环境与植物保护研究所试验场的甘蓝
地,将其带回室内待其孵化后用蓖麻叶将幼虫饲养
至成虫,用10%的蜜糖水为成虫补充营养让其产
卵,再收集卵块,待卵孵化后用新鲜蓖麻叶于室温下
饲养,选用发育整齐一致的F1代4龄幼虫用于测定
其拒食活性。测定其产卵驱避活性时,选用在室内
养殖一代后发育至成虫的斜纹夜蛾。
1.1.2 供试植物 假蒟,采自中国热带农业科学
院环境与植物保护研究所试验场。
1.2 方法
1.2.1 假蒟提取物的提取 将采集的新鲜假蒟清
洗干净,将根、茎、叶分开,置于避光处自然阴干,用
植物粉碎研磨机粉碎(30目)后称取适量干粉装入
高10cm、直径5cm的滤纸圆筒内,用石油醚、氯
仿、乙酸已酯、乙醇、甲醇等不同极性溶剂进行索氏
分步提取(即样品先用极性低的石油醚提取,其残渣
再用极性相对较高的氯仿继续提取,依次类推),计
算提取率(R)。
R=(W1-W2)/W×100%
式中,R为提取物的产出率,W1为浓缩后磨口
瓶与提取物的总重(g),W2为磨口瓶本身的重量
(g),W 为样品的重量(g)。
1.2.2 提取物溶液的配制 分别称取一定量不同
溶剂提取的假蒟各部位提取物,加入3mL丙酮和1
滴辅助剂吐温80,在震荡器上震荡,待提取物溶解
后加入清水定溶至所需浓度(质量百分比)并在震荡
器上震荡均匀。
1.2.3 斜纹夜蛾幼虫的拒食活性测定 采用叶碟
法分别测定非选择性拒食作用和选择性拒食作
用[10]。
1)非选择性拒食作用。用打孔器(避开主叶
脉)将新鲜蓖麻叶片打制成直径(d)为3.2cm的小
叶碟,在配制的浓度为5%的提取物溶液中浸3s后
取出在室内自然凉干,放入垫有湿滤纸直径为
12cm的培养皿中,每皿2片,然后接入饥饿4h的
斜纹夜蛾4龄幼虫,对照为3mL丙酮再加1滴辅
助剂吐温80并加水定容至与处理等质量,每处理
10次重复。置于(24±1)℃、相对湿度(80±10)%
和光周期为12∶12(L∶D)的人工气候箱中,待取
食24h后,用透明坐标纸测定剩余叶面积,计算非
选择性拒食率。
2)选择性拒食作用。具体操作方法同非选择
性拒食作用的测定方法,但每皿还交叉放入对照叶
片和浸药叶片各2片,每处理10次重复,取食24h
后,测定剩余叶面积。计算选择性拒食率。
非选择性拒食率=(SCK-St)/SCK×100%
选择性拒食率=(SCK-St)/(SCK+St)×100%
式中,SCK为对照组取食量,St为处理组取食量。
综合作用指数(CAI):由于假蒟对昆虫具有毒
杀活性[11],采用叶碟法测定其拒食活性时,单以拒
食率作为评价指标不能完全代表供试植物提取物的
生物活性,而把拒食率和死亡率合并得到的综合作
用指数(Comprehensive Action Index,CAI)可较全
面地反映假蒟提取物的生物活性。
CAI=[∑

n=1
(an-andn/m+dn/m)]/n×100%
式中,m 为每重复中试虫数,n为重复数,an为
第n个重复的拒食率,dn为第n个重复的死虫数。
1.2.4 斜纹夜蛾4龄幼虫的拒食中浓度 选择拒
食活性较高的溶剂提取物,参照文献[11]的方
法[12],采用等差或等比稀释法将提取物稀释成5个
浓度梯度(表1),分别测定不同浓度的拒食率,再将
拒食率转换成机率值,浓度转化为对数值,利用
SAS软件计算出拒食中浓度(AFC50值)。
表1 假蒟各部位提取物稀释浓度(AFC50)
Table 1 The diluteing concentration of extracts of Piper betle(AFC50)
部位
Position
提取溶剂
Extraction solvent
拒食活性溶液浓度/%Concentration
非选择性 选择性
根 Root 石油醚 0.80,0.70,0.60,0.50,0.40  0.50,0.45,0.40,0.35,0.30
根 Root 氯 仿 5.00,4.50,4.00,3.50,3.00  5.00,4.00,3.00,2.00,1.00
茎Stem 石油醚 4.00,2.00,1.00,0.50,0.25  2.00,1.00,0.50,0.25,0.125
1.2.5 斜纹夜蛾成虫产卵的驱避作用 采用半滤
纸法测定选择性产卵驱避作用。将高12cm、直径
12cm的养虫盒竖着从中间平均分成两部分,裁剪
与养虫盒壁和底部等大小的滤纸,同样平均分成两
部分,其中滤纸的1/2均匀涂布5%浓度的提取物
溶液,余下滤纸的1/2涂等量对照溶液,对照为水加
3mL丙酮加1滴吐温80(养虫盒盖不做处理,在数
据处理时,各处理的盒盖上卵块均不记数)。在室内
自然凉干后,用双面胶将没有涂提取物溶液的一面
粘贴于养虫盒内壁。每盒接入1对前一天羽化并于
当天配对的斜纹夜蛾成虫,并用10%蔗糖水补充营
养。置于为(24±1)℃、相对湿度(80±10)%和光周
期为12∶12(L∶D)的人工气候箱中,每24h将处
理和对照中的产卵纸分别用上述方法处理过的产卵
纸换出,并记录产卵块数量。统计不同时间段内
(1~3d,4~5d,6~7d)对照与各处理上的卵块数。
每个处理20次重复。在进行产卵驱避试验的同时,
接入试虫1h待其稳定后,每隔1h观察1次雌虫的
·56·
 高玉红 等 人工饲料饲育烟夜蛾滞育蛹的耐寒性
 GAO Yuhong et al Cold Tolerance of Diapause Pupae of Helicoverpa assulta Fed with Artificial Diet and Natural Diet
位置,连续观察12h,每处理观察20头雌虫。根据
下列公式计算选择性产卵驱避率。
选择性产卵驱避率=[(N1-N2)/(N1+N2)]
×100%
式中,N1为对照落卵量,N2为处理落卵量。
2 结果与分析
2.1 假蒟提取物对斜纹夜蛾幼虫的拒食活性
从表2~3中看出,不同溶剂提取的浓度为5%
假蒟各部位提取物,在24h内对斜纹夜蛾4龄幼虫
的拒食活性不同。根、茎部位提取物对斜纹夜蛾4
龄幼虫的拒食作用较强,而叶提取物在浓度5%时
无明显的拒食作用。其中,当提取物浓度为5%时,
根的石油醚提取物对斜纹夜蛾的生物活性最高,其
4龄幼虫几乎不取食,其非选择性拒食率和选择性
拒食率分别达99.67%和99.80%;茎的石油醚提取
物对斜纹夜蛾的生物活性次之,其选择性和非选择
性拒食活性分别为98.53%和98.63%。根的氯仿
提取物对斜纹夜蛾也有较好的效果,处理24h后拒
食率均大于50%,其非选择性和选择性拒食率分别
为68.60%和81.79%;茎的氯仿提取物对斜纹夜蛾
24h后,其非选择性和选择性拒食率分别为37.12%
和51.58%。相同浓度的其他溶剂的提取物的拒食
率均小于50%。假蒟拒食活性物质主要集中在根
和茎中,叶的提取物几乎无拒食活性,且提取物的选
择性拒食活性比非选择性拒食活性高。假蒟根和茎
的石油醚提取物、根的氯仿提取物CAI分别为100、
100和68.60。说明,假蒟根和茎的石油醚提取物、
根的氯仿提取物对斜纹夜蛾4龄幼虫具有较高的拒
食活性。
表2  5%假蒟提取物对斜纹夜蛾4龄幼虫非选择性拒食活性
  Table 2 Non-selective antifeeding action of 5%P.sarmentosumextracts to the 4th instar larvae of S.litura
部位
Position
提取溶剂
Extraction solvent
提取率/%
Extraction efficiency
取食面积/(cm2/头)
Feeding area
拒食率/%
Apastia rate
综合作用指数
CAI
根 石油醚 1.56  0.03±0.07a 99.67  100
 Root 氯仿 0.35  2.82±1.69b 68.60  68.60
乙酸已酯 0.46  6.90±1.43cd  23.17  23.17
乙醇 1.30  7.73±2.38de  14.00  14.00
甲醇 4.47  8.15±1.30def  9.26  9.26
茎 石油醚 1.75  0.13±0.17cd  98.53  100
 Stem 氯仿 0.30  5.65±2.45c 37.12  37.12
乙酸已酯 0.59  7.95±1.48def  11.55  11.55
乙醇 0.55  6.92±2.02cd  13.09  13.09
甲醇 8.87  9.43±1.26f -4.96 -4.96
叶 石油醚 5.59  7.29±1.21d 18.48  18.48
 Leaf 氯仿 3.26  9.25±0.91ef -2.92 -2.92
乙酸已酯 1.26  8.91±1.38f 0.88  0.88
乙醇 1.74  9.06±1.07cd  20.42  20.42
甲醇 3.99  7.04±0.99ef -0.78 -0.78
CK - 8.99±0.89ef - -
 注:同列数据后字母相同者表示经Duncan新复极差检测在0.05水平的差异不显著,数据方差分析前进行反正弦平方根转换;表中取食面积
为10头虫重复平均值(下同)。
 Note:Different letters in the same column indicated 5%significant level.The feeding area was the mean values of 10 S.lituralarvae.The
same below.
表3  5%假蒟不同溶剂提取物对斜纹夜蛾4龄幼虫的选择性拒食活性
    Table 3 Selective antifeeding action of 5%P.sarmentosumextracts to the 4th instar larvae of S.litura
部位
Position
提取溶剂
Extraction solvent
对照取食面积/(cm2/头)
Feeding area of CK
处理取食面积/(cm2/头)
Feeding area of treatments
拒食率/%
Apastia rate
综合作用指数
CAI
根 Root 石油醚 10.14±0.61  0.01±0.02** 99.80  99.95
氯仿 10.00±0.36  1.00±0.12** 81.79  81.79
乙酸已酯 9.14±0.88  3.37±0.59** 46.17  46.17
乙醇 7.71±1.20  3.53±0.70** 37.27  37.27
甲醇 7.64±2.40  5.32±1.66  17.92  17.92
茎Stem 石油醚 6.55±2.08  0.05±0.07** 98.63  99.39
氯仿 9.21±0.76  2.94±0.74** 51.58  51.58
乙酸已酯 7.47±1.10  3.60±0.85** 34.93  34.93
乙醇 6.40±1.30  4.63±2.02  16.05  16.05
甲醇 5.35±1.95  5.56±2.36 -1.94 -1.94
叶Leaf 石油醚 4.82±1.83  3.07±1.35* 22.26  22.26
氯仿 4.92±1.63  4.70±1.35  2.24  2.24
乙酸已酯 4.27±1.29  4.63±1.61 -4.05 -4.05
乙醇 5.25±1.42  3.20±1.09* 21.39  21.39
甲醇 4.84±1.19  4.03±1.00  9.08  9.08
 注:数据后“*”和“**”分别表示处理与对照t检验在0.05水平的显著性差异和0.01水平的极显著性差异。
 Note:“*”and“**”indicated 5%and 1%significant levels respectively.
·66·
                                        贵 州 农 业 科 学
                                   Guizhou Agricultural Sciences
表4 假蒟提取物对斜纹夜蛾4龄幼虫的非选择性及选择性拒食中浓度
Table 4 Non-selective AFC50of P.sarmentosumto the 4th instar larvae of S.litura
部位
Position
提取溶剂
Extraction solvent
毒力回归方程
Toxicity regression equation
AFC50/%
95%置信区间/%
95%interval
相关系数(r)
Correlation coefficient
非选择性 Nonselective
根 Root 石油醚 y=3.56x-4.54  0.47  0.35~0.65  0.97
氯仿 y=6.83 x-13.26  4.70  3.91~5.66  0.93
茎Stem 石油醚 y=3.05 x-1.02  0.95  0.67~1.33  0.98
选择性Selective
根 Root 石油醚 y=6.45 x-11.37  0.35  0.29~0.41  0.96
氯仿 y=6.434 x-11.42  3.55  3.05~4.14  0.99
茎Stem 石油醚 y=2.834 x-2.21  0.35  0.23~0.53  0.97
2.2 假蒟提取物对斜纹夜蛾4龄幼虫的拒食中浓度
从表4可知,假蒟根和茎的石油醚提取物、根的
氯仿提取物对斜纹夜蛾4龄幼虫的非选择性拒食中
浓度分别为0.47%、0.95%和4.70%,选择性拒食
中浓度分别为0.35%、0.35%和3.55%。说明,其
对斜纹夜蛾4龄幼虫具有较好的拒食活性。
2.3 假蒟提取物对斜纹夜蛾成虫产卵的驱避作用
从表5看出,假蒟不同部位石油醚提取物浓度
为5%时对斜纹夜蛾成虫有一定的产卵忌避作用,
但其活性均不高。茎的石油醚提取物在第6~7天
  表5 假蒟不同部位石油醚提取物对斜纹夜蛾
成虫产卵的忌避作用
  Table 5The repelent rate of P.sarmentosumto the
oviposition of S.litura
部位
Position
时间/d
Time
着卵量/(块/盒)
Egg quantity
对照 处理
产卵忌避率/%
Repelent
rate
根 Root  1~3  1.2  0.7  26.32
4~5  1.6  1.4  6.67
6~7  1.5  1.1  15.38
茎Stem  1~3  1.1  0.7  22.22
4~5  2.9  1.4  34.88
6~7  2.4  1.1  37.14
叶Leaf  1~3  1.3  1  13.04
4~5  1.8  1.45  10.77
6~7  0.7  0.5  16.67
时对斜纹夜蛾成虫产卵的忌避作用最高,达
37.14%;其次是第4~5天,为34.88%;其余处理
的产卵忌避率均<30%。
  从表6可知,在选择性试验条件下,接虫1h后,
根的石油醚提取物对斜纹夜蛾雌成虫停留在处理和
对照上的百分比分别为65%和35%,茎的石油醚提
取物对其分别为45%和55%,叶的石油醚提取物对
其分别为55%和45%;接虫5h后,根的石油醚提取
物对斜纹夜蛾雌成虫停留在处理和对照上的百分比
分别为55%和45%,茎的石油醚提取物对其均为
50%,叶的石油醚提取物对其分别为45%和55%;
接虫7h后,根的石油醚提取物对斜纹夜蛾雌成虫停
留在处理和对照上的百分比分别为55%和45%,茎
的石油醚提取物对其分别为70%和30%,叶的石油
醚提取物对其分别为45%和55%;接虫12h后,根
的石油醚提取物对斜纹夜蛾雌成虫停留在处理和对
照上的百分比分别为70%和30%,茎的石油醚提取
物对其均为50%,叶的石油醚提取物对其均为
50%。表明,斜纹夜蛾成虫对假蒟根和茎石油醚提
取物有一定的忌避作用,但不明显,而假蒟叶的石油
醚提取物对斜纹夜蛾基本无忌避作用。
表6 不同接虫时间选择性条件下假蒟提取物对斜纹夜蛾雌成虫停留地点的分布情况
        Table 6 The percentage of S.liturafemale adults stay locality on selective circumstance
with crude of P.sarmentosum %
提取溶剂
Extraction solvent
项目
Item
接虫时间/h Time
1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12
平均
Mean
根石油醚 对照 65  55  55  60  55  45  55  60  60  60  60  70  58.33
 Petroleum ether for root 处理 35  45  45  40  45  55  45  40  40  40  40  30  41.67
茎石油醚 对照 45  40  50  50  50  70  70  60  50  50  50  50  52.92
 Petroleum ether for stem
处理 55  60  50  50  50  30  30  40  50  50  50  50  47.08
叶石油醚 对照 55  55  50  45  45  45  45  45  45  45  45  50  47.5
 Petroleum ether for leaf
处理 45  45  50  55  55  55  55  55  55  55  55  50  52.5
 注:每种溶剂的提取物观察20头雌成虫。
 Note:20female adults were observed in every solvents.
3 小结与讨论
1)不同溶剂对同一植物提取物的提取效果不
同,同一植物不同部位提取物的有效成分也存在差
异[6]。为了更有效地提取植物活性物质,本试验选
用了5种极性不同的溶剂对假蒟根、茎、叶进行分步
·76·
 *刘红芳 假蒟提取物对斜纹夜蛾幼虫拒食及成虫产卵的驱避活性
 LIU Hongfang Repelent and Antifeedant Effect of Extracts fromPiper sarmentosumon Spodoptera litura
提取,总体来说,极性最强的甲醇和极性最弱的石油
醚的提取率相对较其他溶剂的提取率高。采用不同
溶剂提取假蒟植物提取物时,各溶剂对假蒟叶提取
物的提取率比对应溶剂对其根和茎提取物的提取率
高。同时生物活性也有很大差异。从提取溶剂看,
石油醚提取物拒食活性最高,其次为氯仿提取物,而
其他提取溶剂的提取物拒食活性很低或几乎没有拒
食活性;从提取部位看,假蒟根的提取物拒食活性最
高,茎为其次,叶最低。与张方平等研究的植物的杀
虫、杀螨活性物质受提取溶剂和提取方式等因素的
影响一致[6]。假蒟不同提取物对斜纹夜蛾成虫均无
明显的产卵忌避作用。
2)在用化学物质保护植物害虫的研究和实践
中,毒杀作用、拒食作用和忌避作用往往成为人们研
究化学物质保护植物免受害虫危害的选择顺序,毒
杀作用常常成为杀虫剂筛选的主要依据,过多的强
调了毒杀作用[13]。然而,植物次生化合物对大多数
昆虫作用过程的顺序却恰恰相反[14-15]。因此,在对
植物防御化合物的研究中,应综合考虑其对害虫的
拒食、驱避和毒杀等作用,以更好地发挥其对害虫种
群的控制作用。
[参 考 文 献]
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(责任编辑:杨 林)
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