全 文 ：金银花药材中绿原酸与木犀草苷提取工艺，所预测值与试
验值较好吻合，非线性拟合数学模型较接近客观事实，使
得 Box-Benhnken效应面对应的因素与指标的相互关系更加
明确、客观、真实。
参考文献:
［1］ 杨 欣，李洪波，陈 诚，等． 金银花药性与功效的文献
考证［J］． 中 国 实 验 方 剂 学 杂 志，2010，16 (18):
220-222．
［2］ 崔春雨，刘志平，周 敏，等． 金银花化学成分的研究
［J］． 广西大学学报 (自然科学版) ，2012，37 (3):
530-533．
［3］ 刘祥兰，刘重芳，张 英，等． 金银花中绿原酸提取工艺
的比较和优化研究［J］． 中成药，2000，22(6):402-404．
［4］ 闵春艳，游本刚，许琼明，等． 正交试验比较金银花药材
中绿原酸与木犀草苷的乙醇提取工艺［J］． 中成药，2011，
33(10) :1815-1818．
［5］ 辛 华，丰 杰，程若敏，等． HPLC 测定不同产地金银
花中绿原酸和木犀草苷［J］． 中国实验方剂学杂志，2011，
17(2):60-63．
［6］ 王永香，吴 云，孟 瑾，等． 江苏东海县金银花不同花
期绿原酸和木犀草苷动态变化研究［J］． 世界科学技术-中
医药现代化，2013，(9):1975-1979．
［7］ 张 燕，王文全，郭兰萍，等． 不同采收期金银花的产量
和质量研究［J］． 中草药，2013，44(18) :2611-2614．
［8］ 薛 满，游本刚． 正交试验设计比较金银花药材中绿原酸
与木犀草苷的水提工艺［J］． 南京中医药大学学报，2012，
28(6) :591-593．
［9］ 辛 华，丰 杰，程若敏，等． HPLC 测定不同产地金银
花中绿原酸和木犀草苷［J］． 中国实验方剂学杂志，2011，
17(2):60-63．
［10］ 程 怡，吴 琼，余秋强，等． Box-Behnken 效应面法优
化多西他赛长循环脂质体处方［J］． 中草药，2012，43
(10) :1946-1950．
［11］ 董自亮，徐瑞超． 基于 Box-Behnken 设计-响应面法优化白
芷香豆素闪式提取工艺［J］． 中药与临床，2013，4(1):
13-15．
［12］ 张 维，李雪雁，张秀兰，等． 响应面分析法优化菊芋渣
中蛋白的提取工艺［J］． 食品工业科技，2012，(1):305-
307，328．
［13］ 朱家校，何 伟，李 勇，等． 响应面分析法优化川芎藁
本内酯提取工艺的研究［J］． 中成药，2011，33(12):
2172-2175．
［14］ 常星洁，刘汉清，邹建荣，等． 响应面法优化女贞子有效
成分的提取工艺［J］． 中成药，2012，34(5) :839-842．
野鸦椿籽不同极性提取物抗菌作用研究
罗李娜， 向德标， 胡乔铭， 裴 刚*
(湖南中医药大学中药化学教研室，湖南 长沙 410208)
收稿日期:2013-08-12
作者简介:罗李娜 (1988—) ，女，硕士生，研究方向:天然药物化学。E-mail:881091110@ 163． com
* 通信作者:裴 刚 (1971—) ，男，副教授，硕士生导师，研究方向:中药活性成分。E-mail:peigang@ hotmail． com
摘要:目的 探讨野鸦椿籽不同极性提取物的抗菌活性。方法 制备野鸦椿籽提取物，采用试管二倍稀释法联合琼脂
平板法测定不同极性提取物对实验菌株的最低抑菌质量浓度 (MIC)。结果 野鸦椿籽不同极性提取物对实验菌均有
不同程度的抑制作用，对甲型溶血性链球菌的抑制作用最强，乙醇提取液对 5 种金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、甲型溶
血性链球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌的抑制活性均较高。结论 野鸦椿籽具有良好的抗菌作用。
关键词:野鸦椿籽;提取物;抗菌;最小抑菌浓度
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2014)10-2215-03
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 10. 050
野鸦椿 Euscaphis japonica 为省沽油科 Staphyleaceae 野
鸦椿属 Euscaphis落叶灌木，野鸦椿籽为其干燥果实［1］。野
鸦椿籽有温中理气，消肿止痛，祛风除湿之效［2］。据《湖
南药物志》载:野鸦椿籽治寒疝肿痛、睾丸肿、脱肛、子
宫脱垂。《四川中药志》载:野鸦椿籽性微温，味苦，无
毒，可治月瘕、月经不调、膀胱疝气、痢疾泄泻。《福建药
物志》载: “果治头痛，眩晕，感冒，荨麻疹，漆过敏，
疝气;根治风湿，腰痛，胃痛，产后风。在福建南平地区，
民间常用野鸦椿籽水煎液用于产妇产褥感染所致的发烧及
炎症的治疗。据不完全统计，全球每年至少导致 75 000 名
产妇死亡，发展中国家由于卫生条件和治疗技术较落后，
成为了产褥热的高发区［3］，产褥感染主要致病菌为甲型链
球菌、乙型链球菌、大肠杆菌、金黄葡萄球菌、肺炎双球
菌等［4-5］。早在 19 世纪晚期，Louis Pasteur发现并提出产褥
感染主要是由链球菌引起的［6］。赵宏伟等［7］研究表明，乙
型溶血性链球菌是链球菌中致病性最强的一种，可引起各
5122
2014 年 10 月
第 36 卷 第 10 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
October 2014
Vol． 36 No． 10
种化脓性炎症、产褥热。为此，本实验研究野鸦椿籽不同
极性部位提取物对临床分离的菌株和常见致病菌的抑制作
用，通过体外活性筛选抑菌实验，从抑菌活性的角度出发，
为寻找天然药物中抑菌的成分提供参考。
1 材料与方法
1. 1 药材 野鸦椿籽，采于福建省南平，经鉴定为省沽油
科植物野鸦椿 Euscaphis japonica的干燥果实。
1. 2 供试菌种 金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，甲型溶血性
链球菌，乙型溶血性链球菌，肺炎链球菌，均由湖南中医
药大学医学基础微生物与免疫学教学实验中心惠赠。
1. 3 培养基 营养琼脂 (杭州微生物试剂有限公司生产，
批号 20110823-02);营养肉汤 (杭州微生物试剂有限公司
生产，批号 20110926-05) ;血琼脂平板 (郑州安图绿科生
物工程有限公司，批号 20121211) ;小牛血清 (杭州四季
青公司，批号 9610003)。
1. 4 仪器设备 立式压力蒸汽灭菌锅 (LDZX-75KBS，上
海申安医疗器械厂)，隔水式电热恒温培养箱 (GNP-
9160BS-Ⅲ，上海新苗医疗器械制造有限公司) ，超净工作
台 (苏州安泰空气技术公司)。
2 实验方法与结果
2. 1 耐药菌株的筛选 采用琼脂平板法［8］，参照武雪
芬［9］的方法判断结果。
2. 2 不同极性提取物的制备 分别称取 2 份干燥粉碎野鸦
椿籽，每份 400 g。一份置于圆底烧瓶中，加水回流提取 3
次，每次加水 1 000 mL 回流提取 2 h，合并提取液，浓缩
至小体积，加入无水乙醇至乙醇体积分数为 80%，静置
24 h，过滤沉淀，母液浓缩干燥，分别得到水提醇沉物
51. 3 g，水提醇沉液浓缩物 23. 8 g;另一份野鸦椿籽置于圆
底烧瓶中，加 70%乙醇回流提取 3 次，每次加乙醇 1 000
mL，回流提取 2 h，合并提取液，回收乙醇，依次用二氯甲
烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂，分别得二氯甲烷
萃取物 15. 3 g，乙酸乙酯萃取物 32. 2 g，正丁醇萃取物
18. 5 g，水溶物 9. 3 g。临用前将不同极性部位低温冷冻干
燥成粉末，分别取 2. 4 g，溶于 30 mL 适当溶剂配制成 80
mg /mL的溶液。
2. 3 培养基的制备 营养琼脂培养基经高压灭菌
(120 ℃，15 Pa)30 min 后，冷却至 60 ℃时倒入培养皿
中，制备平板培养基，备用;营养肉汤培养基经高压灭菌
(120 ℃，15 Pa)30 min后，冷却，备用。
2. 4 菌悬液的制备 将所有供试菌株分别接种于营养琼脂
平板上，置 37 ℃恒温培养箱培养 24 h 活化，待用。挑取
琼脂平板上形态相同的菌落，用灭菌生理盐水校正菌液浓
度，再用营养肉汤稀释至含菌量约 107CFU /mL。稀释后的
菌液在 15 min内接种，备用。
2. 5 MIC的测定［10］ 取灭菌小试管 11 支为一组，其中每
组第 11 支为阴性对照。每支试管分别加入营养肉汤 2 mL。
配制野鸦椿籽不同极性提取物原液质量浓度为 80 mg /mL。
用吸管吸取药液 1 mL放入第 1 管内，混匀后吸取 1 mL 放
入第 2 管，同样混匀后吸出 1 mL放入第 3 管。依此二倍稀
释法［11］逐管进行稀释至第 10 管。各管药质量物浓度分别
为 40、20、10、5、2. 5、1. 25、0. 625、0. 312 5、0. 156 2、
0. 078 1 mg /mL，未达到抑菌质量浓度按原液质量浓度一倍
增加或者一倍稀释。各管均加入菌液 0. 1 mL，放入 37 ℃
恒温培养箱中培养 24 h，取出，观察生长情况。在对照管
符合要求的情况下，以肉眼未见生长的最低药物质量浓度
为野鸦椿籽对细菌的 MIC。再从未见细菌生长的试管中取
0. 02 mL于相应培养基的琼脂平板上作次代培养，培养过
夜，观察有无细菌生长。试验结果列于表 1、表 2。
由表 1 可知，醇提取液抑菌效果较水提取液抑菌效果
明显，与同一批次乙醇提取液萃取得到的二氯甲烷、乙酸
乙酯、正丁醇萃取液以及萃取后水层液，对金黄色葡萄球
菌、大肠杆菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、
肺炎链球菌五种致病菌进行抑菌试验的试验结果列于
表 2。
表 1 水提物与醇提物MIC (mg/mL)*
不同提取液 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 甲型溶血性链球菌 乙型溶血性链球菌 肺炎链球菌
水提醇沉液 10. 00 240. 00 2. 50 6. 40 × 103 40. 00
水提醇沉液浓缩液 20. 00 320. 00 20. 00 10. 00 80. 00
乙醇提取液 5. 00 0. 63 7. 80 × 10 －2 5. 00 5. 00
注:* 剂量相对于不同极性提取物质量
表 2 不同极性萃取液MIC (mg/mL)
不同萃取液 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 甲型溶血性链球菌 乙型溶血性链球菌 肺炎链球菌
二氯甲烷萃取液 2. 50 2. 50 1. 25 2. 50 10. 00
乙酸乙酯萃取液 8. 00 × 103 10. 00 6. 25 × 10 －1 5. 00 20. 00
正丁醇萃取液 5. 00 5. 00 7. 80 × 10 －2 2. 50 5. 00
萃取后水层液 10. 00 10. 00 10. 00 10. 00 10. 00
乙醇提取液 5. 00 0. 63 7. 80 × 10 －2 5. 00 5. 00
头孢拉定* 0. 63 1. 95 × 10 －2 1. 25 10. 00 4. 88 × 10 －3
注:* 头孢拉定取 0. 8 g，溶于 10 mL水中，配成 80 mg /mL的初始溶液
结果显示，野鸦椿籽提取物对各实验菌株均有不同程
度的抑制作用，对甲型溶血性链球菌的抑制作用最强，二
氯甲烷部分、正丁醇部分对各实验菌株的抑制作用最强，
与乙醇提取液相比，二氯甲烷部分对金黄色葡萄球菌、乙
6122
2014 年 10 月
第 36 卷 第 10 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
October 2014
Vol． 36 No． 10
型溶血性链球菌抑制效果较好，正丁醇部分对乙型溶血性
链球菌也较好，萃取后水层部分 MIC值均为 10. 00 mg /mL。
3 小结与讨论
目前，溶血性链球菌为产褥热最常见的致病菌，同时
又表现为多重耐药性，给临床治疗带来了极大的困难。随
着抗生素的滥用，给人们带来的危害越来越明显了，细菌
对抗生素产生耐药性和抗药性，以致普通的抗生素对一些
炎症起不到应有的疗效。近年来，链球菌感染致产褥热成
为了主流的研究方向，Green［12］对上世纪 80 年代欧洲导致
产褥热死亡的致病菌进行了研究，发现致病菌为革兰阳性
甲型链球菌。本实验结果显示野鸦椿籽中的有效成分对由
甲型溶血性链球菌为主引起的炎症能起到很好的疗效。野
鸭椿过去作为观赏性植物研究较多，但是关于药用成分及
作用机理研究未引起人们的重视［13-14］。2004 年来，有关野
鸦椿的研究文献逐年增多，多集中于其抗炎、抗纤维化、
抗细胞增殖等方面的报道。临床上其用于杀虫和杀菌，为
研究野鸦椿的药理指明了方向。目前，野鸦椿的杀虫杀菌、
抗炎、抗肝纤维及抗癌成分的筛选及研究正处于发展中，
发展前景广阔［15］。2012 年 8 月 1 日，国家出台的《抗菌药
物临床应用管理办法》正式实施，该办法的实施使抗生素
的临床应用受到限制，同时也为治疗感染的中成药新药研
发提供了更大的发展机会。
在前期实验中发现野鸦椿籽总提取物具有较强的广谱
抗菌作用，因此拟定对其抗菌活性部位进一步追踪。实验
结果显示，野鸦椿籽不同溶剂提取物对 5 种供试细菌的抑
制作用均较为明显，为野鸦椿籽抑菌活性部位，所选细菌
也具有一定的代表性。乙醇提取液对 5 种金黄色葡萄球菌、
大肠杆菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎
链球菌的抑制活性均较高;二氯甲烷萃取液、正丁醇萃取
液对 5 种菌的 MIC也较高，对金黄色葡萄球菌效果最好的
是二氯甲烷萃取液，大肠杆菌和甲型溶血性链球菌尤以乙
醇提取液抑菌效果最好，正丁醇萃取液对乙型溶血性链球
菌和肺炎链球菌抑菌效果最好。抑菌活性部位和活性成分
的确定为进一步阐明野鸦椿籽有效物质基础提供了科学
依据。
实验结果显示，野鸦椿籽提取物对 5 种菌均有很强的
抗菌活性，尤其是二氯甲烷、正丁醇部位。目前，正针对
这两部分进行进一步研究其化学成分和活性，从而发现新
的活性单体，筛选出抗菌活性更强的天然抑菌剂。
参考文献:
［1］ 敖小朋，徐耀东，童志刚． 野生赏药兼用植物野鸦椿［J］．
广西农学报，2009，24(1):45-46．
［2］ 贵州省药品监督局． 贵州省中药材． 民族药材质量标准
［M］． 贵阳:贵州科技出版社，2003:208．
［3］ Maharaj D． Puerperal pyrexia:a review． Part I［J］． Obstetri-
cal ＆ Gynecological Survey，2007，62(6):393-399．
［4］ Weissmann G． Puerperal priority［J］． The Lancet，1997，349
(9045) :122-125．
［5］ Kramer H M，Schutte J M，Zwart J J，et al． Maternal mortality
and severe morbidity from sepsis in the Netherlands［J］． Acta
Obstet Gynecol Scand，2009，88(6) :647-653．
［6］ 顾立刚． 医学免疫学与微生物学 ［M］． 北京:中国中医
药出版社，2004:2．
［7］ 赵宏伟，王 滔，高建民． A 组乙型溶血性链球菌致病因
子研究进展［J］． 福建医药杂志，2005，27(2):160-162．
［8］ 何昌国，董玲婉，阮肖平，等． 地胆草全草提取物抗菌抗
炎作用的实验研究［J］． 中国中医药科技，2008，15(3):
191-192．
［9］ 武雪芬，景小琦，李国茹． 金银花叶药用成分的提取及抑
菌试验［J］． 天然产物研究与开发，2001，13(3) :43-44．
［10］ Takeda Y，Okada Y，Masuda T，et al． Euscapholide and its
glucoside from leaves of Euscaphis japonica［J］． Phytochemis-
try，1998，49(8) :2565-2568．
［11］ 洪小凤，王 涛，施贵荣，等． 隔山消不同极性提取物抗
菌作用实验研究［J］． 中成药，2011，33(6) :1052-1054．
［12］ Green N M． Genome sequence of a serotype M28 strain of group
a streptococcus:potential new insights into puerperal sepsis and
bacterial disease specificity［J］． J Infect Dis，2005，192(5) :
760-770．
［13］ 葛玉珍． 野鸦椿资源及其利用［J］． 中国野生植物资源，
2004，23(5) :23-25．
［14］ 闫道良． 观果良木野鸦椿［J］． 植物杂志，2003(5) :6．
［15］ 罗海羽，姚 默，申万祥，等． 野鸦椿属药学研究概况
［J］． 安徽农业科学，2012，40(15) :8462-8463．
7122
2014 年 10 月
第 36 卷 第 10 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
October 2014
Vol． 36 No． 10