全 文 ：第 19卷第 1期 　　　　　　　　　　　　　　　 分 析 科 学 学 报 2003年 2月
Vol. 19　 No. 1 　　　　　　　　　　 JOU RN AL OF ANALY TICAL SCIENCE Feb.　 2002
文章编号: 1006-6144( 2003) 01-0099-02
葛酒、葛粉中葛根素的高效液相色谱分析
杨　薇1　帅　琴1, 2　张　欣1*
( 1.中国地质大学材料科学与化学工程学院 ,武汉 , 430074;
2.华中科技大学煤燃烧国家重点实验室 ,武汉 , 430074)
摘　要:本文研究了用 Discovery C18色谱柱 ,甲酵-水为流动相的反相高效液相色谱
法测定葛酒、葛粉中葛根素的方法。讨论了流动相的组成和流速对葛根素分离及测定
的影响 ,考察了葛根素在不同条件下的提取效果及稳定性。
关键词: HPLC;葛根 ;葛粉
中图分类号: O657. 7+ 2　　　文献标识码: A
葛根为豆科植物野菊 ( Pueraria Lobata ( wild. ) Ohwi )或甘葛藤 ( Puera ria Thomsonii Benth. )的根 ,
是常用中药材 ,具清热解毒、生津止渴、降低血压血脂、治疗冠心病等多种功效。葛根素是中药葛根的有
效成分之一 ,属异黄酮类化合物。近年来关于葛根素的药理作用和临床应用已有不少报道。本文采用甲
醇和水为流动相测定了天然葛酒和葛粉中有效活性成分葛根素 ,比已有的高效液相色谱法更简便 ,同时
对葛根素在不同条件下的稳定性进行了研究。 将所建立的方法用于实际样品分析 ,结果令人满意。
1　实验部分
1. 1　仪器与试剂
200B /785A /TU RBO EL液相色谱仪 , 785A紫外-可见分光光度计 (美国 ,珀金 -埃尔默公司 ) ; 557
双波长双光束分光光度计 (日本 ,日立公司 ) ; AS 2 060超声清洗器 (天津 ,奥特赛恩斯仪器有限公司 ) ;
微孔溶剂过滤器 (天津 ,津腾过滤器件厂 )。
葛根素标准物质 (北京 ,中国药品生物制品检定所 ) ;甲醇为色谱纯 ;水为二次蒸馏水 ;临川葛酒 (江
西临川葛酒厂生产 ) ,祺良葛酒 (江西祺良酒厂生产 ) ;老农牌纯葛粉 (江西临川老农葛粉厂生产 ) ;山峡牌
野生葛粉 (购自平价超市 )。
1. 2　色谱条件
色谱柱: Discovery-C18柱 ( 150× 4. 6 mm, 5μm);流速: 0. 7 mL /min;流动相: 甲醇∶水 = 30∶ 70
( V /V ) (经过滤和超声脱气 ) ;检测波长: 250 nm;进样量为 10μL。
1. 3　对照品溶液及样品的制备
称取一定量葛根素对照品 ,用 50%乙醇溶解配制成浓度为 100μg /mL的葛根素标准储备液 ;精确
称取一定量葛粉于 10 mL刻度管中 ,用 80%甲醇定容 ,超声提取 1 h,离心 ,取上层清液过 0. 45μm滤膜
作为样品溶液 ,进样 10μL。 移取一定量葛酒过 0. 45μm滤膜后作为样品 ,进样 10μL。
2　结果与讨论
2. 1　检测波长选择
收稿日期: 2001-10-31　　　通讯联系人: 帅　琴
* 2001届工业分析专业毕业生
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用双波长双光束分光光度计在 190～ 290 nm范围扫描 ,绘制吸收曲线 ,葛根素最大吸收波长为 250
nm ,实验中选择 250 nm作为检测波长。
2. 2　色谱条件的选择
采用甲醇 -水为流动相 ,考察了甲醇比例在 25% ～ 35%范围内峰面积及保留时间的变化。当甲醇比
例为 30%时 ,峰面积值最大 ,分离效果最好。同时还考察了流动相流速的影响。结果表明:采用甲醇比例
为 30% ,流速为 0. 7 mL /min时 ,葛根素的峰形较好 ,且保留时间比较适宜 ,为 5. 49 min。
2. 3　稳定性试验
分别取一定量的葛根素对照品和葛酒于 5 m L试管中 ,考察了在常温光照、水浴加热、振荡等不同
条件下葛根素的稳定性。结果发现:紫外光连续照射 7 h、连续振荡 2 h葛根素含量均未发生变化 ,但
70℃水浴连续加热 2 h后 ,葛酒中葛根素含量降低了 16. 1% ,日光连续照射 10 d后 ,葛根素含量降低了
25. 6% 。实验表明:葛根素在常温下、长时间保存性质稳定 ,但在长时间日光照射及高温条件下稳定性变
差。因此 ,葛制品最好采用棕色瓶盛装 ,避免在温度高于 70℃的条件下长期存放。
2. 4　提取方法的选择
精密称取等量的同一批号的老农牌葛粉 6份 ,分别用 100%甲醇、 80%甲醇、 50%甲醇超声提取 1
h,结果表明用 80%甲醇提取的葛根素含量高 ,杂质少 ,分离效果好 ;以 80%甲醇作为提取溶剂 ,对葛粉
进行水浴加热回流、超声波振荡、冷浸三种提取方法及不同提取时间进行比较研究。结果表明:采用超声
振荡法提取效果好 ,且操作简单、快速 ,故选择用 80%甲醇为提取剂 ,超声波振荡 1 h提取样品。
2. 5　线性关系
精密注入浓度为 20, 40, 80, 120, 160, 200μg /mL的葛根素标准溶液 10μL,按色谱条件测定 ,实验
表明葛根素在 20～ 200μg /m L范围与峰面积 ( A )呈良好的线性关系 ,回归方程为: Y = 42655x - 1. 0
× 106 , r = 0. 9995。
2. 6　精密度和加标回收试验
吸取葛根素对照品 ( 100μg /m L) 10μL,重复进样 10次 ,测得峰面积的 RSD为 0. 45% ( n= 10)。准
确移取适量已知浓度的葛酒溶液及处理后的葛粉样品溶液 ,精密加入一定量的葛根素标准液 ,按选定的
色谱条件进行加标回收实验 ,以外标法定量 ,其回收率在 89. 6% ～ 102. 7%之间。
2. 7　样品分析
按样品制备方法 ,在选定的色谱条件下对不同批号葛酒及不同品牌葛粉进行测定。结果表明:葛酒
中的葛根素含量在 91. 33～ 183. 28μg /mL之间 ,且含量较稳定。 葛粉中的葛根素含量在 0. 01% ～
0. 11%之间 ,不同品牌之间葛根素含量相差悬殊。
Study of Pueraria in Pueraria Wine and
Pueraria Powder by Reversed-phase
High Performance Liquid Chromatography
YANG Wei
1
, S HUAI Qin
1, 2*
, ZHANG Xin
1
( 1. Faculty o f Materials Sciences and Chemical Engineering , China Universit y
of Geosciences , Wuhan , 430074; 2. National Laboratory of Coal Combustion ,
Huazhong universit y of Science and Technology , Wuhan , 430074)
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第 1期 杨　薇等:葛酒、葛粉中葛根素的高效液相色谱分析 第 19卷