全 文 ： 2004, Vol. 25, No. 10 食品科学 ※分析检验280
乌桕叶主要黄酮类物质的定性定量
霍光华1，高荫榆2
(1.江西农业大学生物工程系，江西 南昌 330045；2.南昌大学生命科学学院，江西 南昌 330047)
摘 要：通过硅胶和Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离乌桕叶黄酮类物质，HPLC鉴别其纯度和定量，UV、IR、
NMR、LC-MS定性，结果显示乌桕叶所含主要黄酮类物质为槲皮素、山柰酚及其组成的甙，其中槲皮素、山
柰酚和槲皮素甙百分含量分别为0.0965、0.1232、0.6975。
关键词：乌桕叶；黄酮类物质；定性定量
The Qualitative and Quantitative Analysis of Main Flavonoids from Chinese Tallow Leaf
HUO Guang-hua1，GAO Yin-yun2
(1.Bioengineering Department, Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China；
2.Life Science College, Nanchang University, Nanchang 330047, China)
Abstract ：Flavonoids were separated from Chinese tallow leaf (CTL) using silica and sephadex LH-20 gel column
chromatography, identified their purity and analyzed quantitatively using HPLC, analyzed quanlitatively using UV,IR,NMR,
LC-MS. The results showed that CTL flavonoids consist of quercetin, kaempferol and their glycosides. Contents (g/100g dry
mass) of quercetin, kaempferol and quercetin glycoside are 0.0965, 0.1232,0.6975 in CTL respectively.
Key words：Chinese tallow leaf；Flavonoids；Qu litative and quantitative analysis
中图分类号：Q946 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2004)10-0280-04
收稿日期：2004-0-0
作者简介：霍光华(1963-)，男，副教授，博士，从事生物资源及其功能成分研究。
黄酮类物质在抑制癌细胞、保护心血管、调节脂
代谢、雌性激素样作用、抗微生物、抗炎症、抗变
态反应、清除自由基等方面显示活性[1,2]，因此黄酮类
物质作为功能因子倍受关注。乌桕原产我国，栽培历
史悠久，对其脂质研究利用较为广泛，对其叶的研究
相对较少。乌桕叶具有消痈肿、治癣疾、抗病菌、杀
害虫等效[3,4]。为确定其相关功能因子，对乌桕叶主要
黄酮类物质进行了提取分离和定性定量分析。
1 实验部分
1.1分离材料
硅胶(160-200目，柱层析用)，GF254(薄层检测用)，
青岛海洋化工厂；Sephadex LH-20(凝胶柱层析)，
Pharmacia公司产。
1.2仪器
浓缩设备 旋转蒸发器RE52-98(金叶) 上海亚荣生化
仪器厂；循环水式多用真空泵SHB-ⅢA 河南太康教
材仪器厂；紫外光谱仪 美国Beckman DU-7 紫外可见扫
描分光光度计；三用紫外线分析仪 波长为365nm，
255nm。上海顾村电光仪器厂；红外光谱仪 美国伯乐
公司FTS-40傅里叶红外光谱仪；核磁共振波谱仪 美国
Varian UNTY-500NMR Spectrometer；液-质联用仪 美国
Waters Platform ZMD 4000 LC-MS；高压液相色谱仪 美
国Waters公司产高压液相色谱仪。
1.3样品
乌桕叶(Chinese tallow leaf，简称CTL)于11月中旬
采自江西农业大学校园内的结籽鸡爪桕叶，而后室内除
湿风干，硅胶干燥，粉碎过4 0目筛，备用。
1.4实验方法
1.4.1总黄酮提取
乌桕叶粉2kg，用10倍70%的乙醇水溶液水浴提
取2次，每次3h，纱布挤滤后，渣再用70%的乙醇水
溶液淋洗，合并挤滤液和淋洗液，过布氏漏斗抽滤获
得滤液。滤液减压浓缩得浸膏，用水制得悬浮液再分
别以石油醚、乙酸乙酯萃取。其中乙酸乙酯部分减压
浓缩回收溶剂后，获得乙酸乙酯浸膏58.36g，备用。
1.4.2黄酮类成分的分离
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乙酸乙酯浸膏，加适量甲醇热溶，拌入层析硅
胶，挥去甲醇后加到已装好的硅胶柱上端，反复以氯
仿-甲醇梯度洗脱，收集组分，再上Sephadex LH-20，
用甲醇洗脱，冷藏放置析出晶体S-1、S-2、S-3。
1.4.3乌桕叶黄酮类物质的纯度鉴定及含量测定[5,6]
HPLC归一化法测定纯度，将分离的黄酮类物质和
70%乙醇提取物，溶于色谱纯的甲醇溶剂中，浓度控
制在0.1mg/ml左右进样。色谱条件：Waters 1525泵，
2487紫外检测器，Breeze色谱工作站，SSI C18(250×
4.6mm)； 流动相为甲醇:水=60:40，pH=3(磷酸调)，流
速0.7ml/min，检测波长360nm。
1.4.4乌桕叶黄酮类物质的定性
1.4.4.1熔点测定 毛细管熔点测定法[7]。
1.4.4.2位移试剂的紫外光谱测定[8]
取分离化合物S-1、S-2、S-3 各约0.1mg，溶解于
10ml色谱纯甲醇中，紫外可见扫描分光光度计上测定
MeOH谱，而后加入三氯化铝溶液记录AlCl3谱，再加
3滴浓盐酸，测定并记录AlCl3/HCl谱。另份甲醇液中
加入过量粉碎的无水乙酸钠，立即测定NaOAc 谱，再
向比色杯中加入无水硼酸成饱和溶液，测定并记录样品
的NaOAc/H3BO3谱。
1.4.4.3红外光谱测定 溴化钾压片法在400～4000cm-1
区间测定红外光谱图。
1.4.4.4核磁共振波谱的测定4～10mg分离物，氘代甲
醇作溶剂，置于核磁管中，超声1min溶解，放入核磁
共振仪中进行测定。
2 实验结果
2.1分离物的纯度
如图1、4：分离物质S-1具有两个峰，其中主峰
面积为8225155，次峰为152006，面积归一化后主峰
(Time=10.715)含量为98.19%。分离物质S-3显示几乎单
一峰(Time=17.212)，其它峰可达忽略不计程度。表明分
离物S-1和S-3基本达色谱纯级。
图2：分离物质S-2至少含有5个组分，其中主峰
(Time=6.932)峰面积为1050695，占5个峰面积总和的80%
左右。对S-2用5%盐酸水解，酸水解液色谱如图3。
它在保留时间10.721处出现一主峰，在S-1主峰位置，
而原有主峰降得很低，因此认为S-2含有S-1的组成部分。
2.2乌桕叶黄酮类物质的定性解析
2.2.1化合物S-1
黄色粉末结晶，mp313～315℃。盐酸-镁粉反应
显玫瑰红色；二氯氧锆反应显黄色，再加柠檬酸后显黄
绿色；Molish反应呈阴性。表明为黄酮醇。
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紫外光谱(UV) λmax (MeOH)=255nm，371.5nm为黄
酮醇类物质的吸收峰。加入AlCl3/HCl后，带I发生红
移53nm，显示有5-OH和3-OH存在。比较加入AlCl3
与加AlCl3/HCl两谱带，后者较前者紫移6.5nm，显示
B环上有邻二羟基存在。加NaOAc后，带II红移16nm，
显示有7-OH存在。加NaOAc/H3BO3谱，带I发生红移
15nm，显示B环有邻二羟基存在。
红外光谱(IRKBr)波数(cm-1)：3380(分子内氢键)，
3285，1660(α、β不饱和酮)，1616，1559，1514(Ar)，
1364，1319，1167。
核磁共振谱( C D3O D，并作内标)，1H N M Rδ
(ppm)：6.17(1H,H-6)，6.37(1H,H-8)，6.87(1H,H-5)，7.61
(1H,H-2)，7.72(1H,H-6)(附图Fig.7)。13CNMRδ(ppm)：
146.4(C-2)，137.4(C-3)，177.5(C-4)，162.7(C-5)，99.4
(C-6)，165.7(C-7)，94.6(C-8)，15 .4(C-9)，104.7(C-10)，
124.3(C-1)，116.4(C-2)，148.1(C-3)，148.9(C-4)，116.
1(C-5)，121.8(C-6)。
根椐上述熔点测定值、定性反应、紫外光谱、红
外光谱、核磁共振谱等测定数据，与文献[8～11]核对，推
知化合物S-1为槲皮素。
2.2.2分离物S-2
黄色粉末状结晶。Molish反应呈阳性。
紫外光谱(UV)λmax (MeOH)=255nm，354.5nm为黄
酮或黄酮醇甙类物质的吸收峰。加入AlCl3后，带I红
移34.5，加入AlCl3/HCl后，带I红移4.5nm，显示有
5-OH和B环上邻二羟基存在。比较加入AlCl3与加AlCl3/
HCl两谱带，后者较前者紫移30nm，说明邻二羟基与
AlCl3形成的络合物不稳定，显示B环上有邻二羟基存
在。加NaOAc后，带II红移26.5nm，显示有7-OH存
在。加NaOAc/H3BO3，带I发生红移21nm，显示B环
有邻二羟基存在。
红外光谱(IRKBr)波数(cm-1)：3667(氢键)，1700，
1660(α、β不饱和酮)，1621， 616(Ar)，1396，1340，
1196。
从S-2酸水解前后的HPLC图、化学反应、紫外光
谱和红外光谱数据分析，可得出S-2为在3号位羟基上
发生取代的槲皮素的甙。
2.2.3化合物S-3
黄色结晶，mp 273～275℃。盐酸-镁粉反应显玫
瑰红色；二氯氧锆反应显黄色，再加柠檬酸后显黄绿
色；Molish反应呈阴性。表明为黄酮醇。
紫外光谱(UV)λmax (MeOH)=265.5nm，365.5nm为
黄酮醇类物质的吸收峰。加入AlCl3带I红移56nm，显
示有5-OH和3-OH存在。比较加入AlCl3与加AlCl3/HCl
两谱，带I几无紫移，表明B环上没有邻二羟基存在。
加NaOAc后，带II红移6.5nm，显示有7-OH存在。加
NaOAc/H3BO3谱，带I红移4nm，小于12nm，显示B
环没有邻二羟基存在。
红外光谱(IRKBr)波数(cm-1)：3316(OH)，1660(α、
β不饱和酮)，1613，1560，1508(Ar)，1382，1225，
1175，1009。
氢核磁共振谱(CD3OD，并作内标)，δ(ppm)：6.18
(1H,H-6)，6.40(1H,H-8)，6.91(2H,H-3,H-5)，8.09(2H,H-
6,H-2)。
根椐上述熔点测定值、定性反应、紫外光谱、红
外光谱、氢核磁共振谱等测定数据，并与文献[8,10,12]核
对，推知化合物S-3为山柰酚。
2.2.4乌桕叶中主要黄酮类物质的含量
乌桕叶70%乙醇浸膏的LC-MS的黄酮类物质的紫外
色谱图和总离子图对应的谱峰高低，以及主要谱峰的质
谱图可知乌桕叶中主要黄酮类物质是以槲皮素，山柰酚
及其以它们为甙元组成的单糖甙。所分离的S-1、S-2、
S-3是其主要的黄酮类物质。S-1、S-3分别为槲皮素和
山柰酚，以此为对照品可测定并计算出乌桕叶样品中它
们的含量。S-2定量以样品中槲皮素峰面积的增加量与
对照S-1峰面积之比等于S-2转化为槲皮素的量(X)与对照
S-1含量之比，再由X的量转化为黄酮醇甙的量(从LC-
MS相应质谱图的质荷比判断：可以1个分子的六碳糖
计)，最后据浸膏和叶粉的转换关系，换算成每100g叶
粉干基中含槲皮素的甙含量。
在70%乙醇水溶液提取物浸膏样的HPLC谱图上，
保留时间为10.592和16.952处出现两峰，分别与S-1和
S-3峰位相对应，它们的峰面积分别319690和251607，
如图5。图2、3槲皮素的峰面积变化可求S-2含量。
乌桕叶主要黄酮物质的含量如表1。乌桕叶黄酮甙
类物质高于甙元的含量。
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样品 S-1槲皮素 S-2槲皮素的甙 S-3山柰酚
(%) (%) (%)
结籽鸡爪桕叶 0.0965 0.6975 0.1232
表1 乌桕叶主要黄酮类物质的含量
Table 1 Main flavonoids content of CTL
3 结论与讨论
3.1黄酮类物质在许多中草药中是其显效成分，中药
现代化的一部分重要工作就是中草药功能成分的标准
化，而目前许多天然产物是难以购置的，有的即使可
购置，其价格也是十分昂贵的。制备高纯度的天然化
合物是一项十分有意义的工作。
3.2中草药如乌桕叶，其功能因子的最后确立，用其
所分离的单体进行功能试验才能最终阐明其化学成分与
功能活性的相互关系。本文是用自制的天然黄酮类物质
作为对照品，进行定量分析尝试。
3.3乌桕叶黄酮类物质主要有槲皮素、山柰酚及其为
甙元组成的甙，其中槲皮素、山柰酚和槲皮素甙含量
(占干基的百分率)分别为0.0965、0.1232、0.6975。其
中黄酮甙含量高于其游离甙元的含量。
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