全 文 ：[饮片炮制]
不同来源桑白皮降压成分桑根酮 C 含量测定
李洪玉 , 孙静芸 , 吴素香
(浙江省中医药研究院 ,浙江 杭州 310007)
关键词:桑白皮;桑根酮 C;HPLC;含量测定
摘要:目的:研究不同来源桑白皮中桑根酮 C 含量和测定方法。方法:用 HPLC 法测定 , 以 MeOH-H2O(75∶25)为流动相 ,
280nm 为检测波长。结果:桑根酮 C 平均回收率为 96.94%, RSD 为 1.72%,线性范围为 0.32 ～ 4.80μg。不同来源最高
含量 0.55%,最低含量 0.02%。结论:HPLC 方法稳定可靠 , 重复性好。
中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2002)02-0104-03
Determination of depressor constituent sanggenon of Cortex Mori in different
sources
LI Hong-yu , SUN Jing-yun , WU Shu-xiang
(Zhej iang Academy of Trad it iona l Chinese Medicine , Hangzhou310007 , China)
Key words:Co rtex Mo ri;Sanggenon C;HPLC;determination
Abstract:Objective:To study the contents and determinate method of Sanggenon C of Cortex M ori in dif ferent
sources.Methods:Sanggenon C w as determined by HPLC.The mobile phase w as methanol-water(75∶25).De-
tection w aveleng th w as at 280nm .Results:The average recovery w as 96.94%with RSD =1.72% and the lin-
ear range w as 0.32 ～ 4.80μg.The highest content of Sanggenon C was 0.55% and the low est content w as 0.
02% f rom different producing area.Conclusion:The method is accurate and reliable wi th good reproducibility.
收稿日期:2001-06-16
基金项目:“九五”国家重点科技攻关计划(96-903-02-03).
作者简介:李洪玉(1963～ ),男 ,山东省人 ,副研究员,硕士 ,主要从事中药化学和分析化学研究与试验工作。电话:0571-88082214.
正品桑白皮(M .alba L.)经薄层色谱鉴别 、定性
对照品分离 、鉴定 ,结果证明具有降压活性成分桑根
酮C ,与文献[ 1]一致。为测定该成分在不同来源桑
白皮中的含量 ,进行了HPLC 测定方法学的研究。
实验部分
1 仪器与试药
岛津 LC-10ATvp高效液相色谱仪;HS 色谱数
据工作站;检测器 SPD-10AVP;色谱柱 VP-ODS
(150×4.6mm);岛津-265型紫外分光光度计;色谱
纯甲醇;双重蒸馏水 。
2 样品
桑白皮生药材粉碎的粗粉(不同产地购得 ,高家
鉴主任中药师鉴定均为 Morus alba L ,来源编号分
别 为:A961111 、 A970409 、 A970406 、 A970601 、
A980130 、A980131 、A980215 、A980200 、A000301 、
B980401);对照品桑根酮 C(自制 ,经紫外 、红外 、质
谱 ,核磁共振谱测定与文献[ 1] 报道一致 ,经标似纯
度为98.24%)。
3 含量测定
3.1 色谱条件
用十八烷基键合硅胶为填充剂 , MeOH-H2O(75
∶25)为流动相 , 280nm 为检测波长;理论板数按桑
根酮C 峰计算 ,应不低于 3000。
3.2 对照品溶液的配制
精密称取桑根酮 C ,以甲醇溶解制得每毫升含
0.32mg 桑根酮 C ,作为对照品溶液。
3.3 供试品溶液的制备
桑白皮粉末 , 60°C干燥 1h ,精密称取 2g ,置具
塞三角瓶中 ,精密加入乙醇 50mL ,加塞 ,称重 ,超声
提取 30min ,放冷 ,补足重量 。滤过 ,弃去初滤液 ,精
密量取续滤液 25mL ,置蒸发皿中 ,水浴蒸干 ,残渣
用乙醇溶解于 5mL 的容量瓶中稀释至刻度 ,即得。
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3.4 测定方法
精密吸取对照品溶液 、供试品溶液各 10μL 分
别注入液相色谱仪 ,测定 、计算 ,即得。
方法学的考察
1 样品处理条件的选择
根据桑根酮 C 易溶于 EtOH 的理化性质 ,故对
提取溶媒不作选择性试验 ,而影响超声提取率的主
要因素是提取时间的长短 。故作如下实验:
桑白皮(编号为:A970601)粉末 , 60°C干燥 1h ,
精密称取约 2g(4份),置具塞三角瓶中 ,精密加入乙
醇 50mL , 加塞 , 称重 , 分别超声提取 30 , 40 , 50 ,
60min ,放冷 ,补足重量。滤过 ,弃去初滤液 ,精密量
取续滤液 25mL ,置蒸发皿中 ,水浴蒸干 ,残渣用乙
醇溶解于 5mL 的容量瓶中稀释至刻度 ,即得 4份平
行供试品溶液 ,进样量为 10μL ,测定结果见表 1。
表 1 不同提取时间桑根酮 C的提取结果
提取时间(min) 30 40 50 60
HPLC 测得峰面积 2047112.5 2017880.5 2054371.8 2037791.5
结果:超声提取 30min ,已基本提取完全 。
2 色谱条件
色谱柱:VP-ODS(150 ×4.6mm);流动相:
MeOH-H2O(75∶25);流速:1mL/min;紫外检测波
长:280nm 。
2.1 流动相选择
曾选用流动相 MeOH-H2O(65∶35 , 70∶30 , 75∶
25 ,80∶20)进行试验 。结果表明 ,以 MeOH-H2O(75
∶25)为最佳流动相。
2.2 检测波长
取桑根酮 C 对照品溶液进行紫外分光光度仪
的扫描测定 ,结果在 280nm 处有最大吸收峰 ,故选
用该波长为检测波长。
3 系统适应性试验
取上述对照品溶液 10μL 进样测定 ,计算结果
理论板数为 3438。
4 对照品纯度测定
取上述对照品溶液 ,进样 10μL(n =15)。测定
结果见表 2。
表 2 桑根酮 C对照品纯度 HPLC测定结果
含量(%) 平均含量(%)RSD(%)
98.5648 99.8129 99.1668
96.8631 97.5945 98.7799
98.4058 98.1626 98.8205 98.2426 1.01
96.8970 97.2171 96.8997
98.7547 99.7547 97.9449
5 标准曲线的绘制
取桑根酮 C 对照品溶液(每毫升含 0.32mg),
在上述色谱条件下 ,分别以 1 , 3 ,5 ,10 ,15μL 进样测
得峰面积 ,以峰面积值为横坐标 ,对照品进样量为纵
坐标 ,得一组呈线性关系的序数对。以对照品进样
量为 X ,以峰面积值为 Y 进行线性回归 ,得回归方
程:
Y =810956.96X -7032.81 r=0.999984 线性
范围为 0.32 ～ 4.8μg 。
6 精密度的测定
取上述桑根酮 C 对照品溶液重复进样 5次 ,每
次 10μL ,连续测定峰面积 ,结果见表 3 。
7 重复性试验
表 3 精密度测定实验结果
次数 1 2 3 4 5 RSD
桑根酮 C峰面积 2591106.2 2577631.1 2641287.5 2587421.6 2564221.7 1.13%
取同一批药材(来源编号:A970601)(n=5)按
上述样品处理后 ,照含量测定方法进行测定 ,结果见
表 4。
8 稳定性试验
取新制备桑根酮 C 对照品溶液于 0 ～ 4h 内测
定 ,每隔 1h进样 1次 ,每次 10μL ,测定峰面积 ,结果
见表 5。
表 4 重复性实验结果(n=5)
次数 1 2 3 4 5 平均值 RSD(%)
百分含量 0.122 0.125 0.128 0.127 0.127 0.126 1.90
表 5 稳定性测定结果
时间(h) 0 1 2 3 4 RSD(%)
峰面积 2595612.5 2641573.7 2566741.4 2547185.5 2557963.1 1.47
结果表明:桑根酮 C对照品在室温下 ,0 ～ 4h 内
测定结果稳定。
9 回收率试验
精密称取已知含量的生药材粗粉(来源编号:
A970601)5份 ,再精密加入一定量的桑根酮 C 对照
品 ,用上述方法及色谱条件进行桑根酮 C 的提取和
含量测定 ,结果见表 6。
10 不同来源桑白皮中桑根酮 C含量测定结果
用上述方法和色谱条件 ,对不同来源生药材样
品进行桑根酮C 的提取和含量测定 ,结果见表 7 。
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表 6 回收率测得结果(n=5)
编号取样量(g)
样品含量
(mg)
加入对照
品的量(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
x
%
RSD
(%)
1 2.0147 2.539 1.976 4.468 97.6
2 1.9665 2.478 1.976 4.377 96.1
3 1.9478 2.454 1.976 4.420 99.5 96.94 1.72
4 2.1076 2.656 1.976 4.537 95.2
5 2.0119 2.535 1.976 4.438 96.3
表 7 不同来源桑白皮中桑根酮 C含量测定结果
编号 取样量 桑根酮 C含量(%)
平均含量
(%) 产地
A961111 1.9821 0.02
1.9912 0.02 0.020 浙江昌化
A970409 2.0140 0.13
2.0917 0.14 0.135 江西樟树
A970406 2.0127 0.14
1.9912 0.15 0.145 湖南
A970601 2.0017 0.13
2.0798 0.13 0.130 浙江嘉兴
A980130 1.9341 0.07
2.0113 0.08 0.075 安徽
A980131 2.1134 0.08
编号 取样量 桑根酮 C含量(%)
平均含量
(%) 产地
2.0112 0.09 0.085 湖北
A980215 1.9786 0.04 浙江昌化
1.9912 0.04 0.040 (采集)
A980200 1.9910 0.04
2.0341 0.04 0.040 云南寻甸
A000301 2.0147 0.56
1.9273 0.54 0.550 浙江临安
B980401 2.1176 0.08 浙江天目山
2.0789 0.08 0.080 (采集)
讨论
1 对不同来源桑白皮 10批 20件的桑根酮 C 测定
结果 ,最高含量为 0.55%,最低含量 0.02%。
2 采用 HPLC 方法测定桑白皮中桑根酮 C 的含
量 ,方法快速准确 ,重复性好 ,结果稳定可靠。
参考文献
[ 1] T Nomura.Phenolic compounds of the Mulberry Tree and Relat-
ed Plants[ J] .Progress in the Chemist ry of Organic Natural Prod-
ucts 53 , 1988 , 88-201.
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