全 文 ：第３０卷第３期
２０１６年５月
兰州文理学院学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ａｒｔｓ　ａｎｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）
Ｖｏｌ．３０Ｎｏ．３
Ｍａｙ　２０１６
收稿日期：２０１６－０４－１３
基金项目：２０１３年安徽省省级自然科学研究项目（ＫＪ２０１３Ｚ２２０）
作者简介：白华（１９７４－），女，安徽亳州人，讲师，主要从事中医药教学研究．Ｅ－ｍａｉｌ：３０３７６３４３４０＠ｑｑ．ｃｏｍ．
　　文章编号：２０９５－６９９１（２０１６）０３－００３４－０４
高效液相色谱法测定不同生长年限和不同部位
桑白皮中桑根酮Ｃ的含量
白　华１，白　娟２
（１．亳州职业技术学院 药学院，安徽 亳州２３６８００；２．安徽省医学科学研究院，安徽 合肥２３００６１）
摘要：建立高效液相色谱法检测不同生长年限和不同部位桑白皮中桑根酮Ｃ的含量，采用ＳＢ－Ｃ１８色谱柱（２５０
ｍｍ×４．６ｍｍ）；以甲醇－水（７５∶２５）为流动相；检测波长２８０ｎｍ；柱温３０℃．结果桑根酮Ｃ在０．７３０～２．９２０μｇ
范围内呈良好的线性关系（ｒ＝０．９９９９，ｎ＝６），平均回收率为９７．６５％，ＲＳＤ为２．２４％．不同生长年限和不同部
位桑白皮中桑根酮Ｃ含量差异较大，生长年限越长桑根酮Ｃ含量越高，主根中桑根酮Ｃ含量比根茎高，须根含
量最低．
关键词：桑白皮；高效液相色谱法；桑根酮Ｃ；含量测定
中图分类号：Ｏ６５７．７＋２　　　文献标志码：Ａ
　　桑白皮为我国传统常用的中药材之一，始载
于《神农本草经》［１］，列为中品．历代本草均有收
载．２０１５版的《中国药典》［２］收载为桑科植物桑
Ｍｏｒｕｓ　ａｌｂａ　Ｌ．的干燥根皮．有泻肺平喘；利水消
肿之功能．现代药理研究表明桑白皮主要含有黄
酮类和生物碱类等化合物，具有降血糖、降血压、
抗病毒、利尿等作用．其中桑根酮Ｃ的含量相对
较高并为其主要有效成分．其主产地有安徽亳州、
四川通江、贵州省安龙、湖南省阮陵等地．以安徽
亳州桑白皮产量大、色白、皮厚、柔韧、质量好而享
誉全国，是四大亳药之一，故又称为亳桑皮．然而
亳州药材市场上桑白皮药材质量参差不齐，为了
明确不同生长年限和不同部位对桑白皮质量的影
响．笔者采用高效液相色谱法，以桑白皮中桑根酮
Ｃ为指标进行含量的测定比较，发现不同生长年
限和不同部位存在明显的差异，希望能为亳州桑
白皮药材资源的开发、利用和市场规范化等提供
依据．
1　材料与仪器
１．１　材料
药材来源：本实验所用的桑白皮药材均来自
安徽亳州药材种植基地桑园，经鉴定均为桑科植
物桑（Ｍｏｒｕｓ　ａｌｂａ　Ｌ．）的干燥根皮，为生长２年、３
年、３年以上的桑树．冬季挖取桑根，洗净，每个品
种挖取同一棵完整的桑根分３种处理：主根部，根
茎部，须根部．
１．２　仪器
美国安捷伦１２６０ｉｎｆｉｎｉｔｙ型高效液相色谱系
统，配有紫外检测器ＶＡＤ、自动进样器、柱温箱等．
１．３　试剂
桑根酮Ｃ对照品（成都普菲德生物技术有限
公司，批号：１９１３０－９６－２，纯度≥９８％）；甲醇（色谱
纯）；娃哈哈纯净水；其他试剂均为分析纯．样品：
分别将各品种获取的３种材料按照药典处理后粉
碎，过三号筛备用．
2　实验方法与结果
２．１　色谱条件
色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，
ＳＢ－Ｃ１８柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）；流动相为甲醇－
水（７５∶２５）［３］；检测波长２８０ｎｍ，柱温３０℃；流速
１ｍＬ·ｍｉｎ－１；进样量１０μＬ，理论塔板数按桑根酮
Ｃ计不低于２０００．高效液相色谱图见图１所示．
２．２　对照品溶液的制备
取桑根酮Ｃ对照品适量，精密称定，加甲醇
溶解并稀释，摇匀，制成０．１４６　０ｍｇ·ｍＬ－１的桑
根酮对照品溶液．
２．３　供试品溶液的制备
取本品粉末（过三号筛），放入干燥箱中，６０℃
DOI:10.13804/j.cnki.2095-6991.2016.03.008
（ａ）桑根酮Ｃ对照品
（ｂ）桑白皮供试品
图１　ＨＰＬＣ色谱图
干燥１小时后取出，称取１．５ｇ，精密称定，置具塞
平底烧瓶中，精密加入甲醇４０ｍＬ，称定重量，
８０℃加热回流６０ｍｉｎ，放冷，再称定重量，用甲醇
补足减失的重量，摇匀滤过．精密吸取续滤液
２５ｍＬ倒入蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解
并定量转移至５ｍＬ容量瓶中，加甲醇至刻度，摇
匀，用０．４５μｍ微孔滤膜滤过，取续滤液，即得．
２．４　方法学考察
２．４．１　线性关系考察　分别精密吸取上述对照
品溶液５，７．５，１０，１２．５，１５，２０μＬ进样，按上述色
谱条件测定峰面积，以桑根酮 Ｃ对照品进样量
（μｇ）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，
计算得回归方程为：Ｙ＝１３　６５７．３９　Ｘ－２８．９６（ｒ＝
０．９９９　９）．结果表明桑根酮Ｃ在０．７３０～２．９２０μｇ
范围内与峰面积呈良好的线性关系．
２．４．２　精密度试验　精密吸取桑根酮Ｃ对照品
溶液１０μＬ，注入液相色谱仪，测定峰面积．重复
进样６次，结果平均峰面积为１９　８７０．８，ＲＳＤ为
０．５１％，表明本法精密度良好，见表１所列．
表１　精密度实验结果
编号 桑根酮Ｃ峰面积
１　 １９　７１１．１
２　 １９　７８５．４
３　 １９　９０５．５
４　 １９　９４７．２
５　 １９　９６９．３
６　 １９　９０６．５
珡Ｘ＝１９　８７０．８
ＲＳＤ＝０．５１％
２．４．３　稳定性试验　精密吸取同一供试品溶液
（生长３年根茎部），依上述色谱条件，分别在０，
２，４，６，８ｈ后依法测定，结果桑根酮Ｃ平均峰面
积为１４　０２４．８，ＲＳＤ为０．６４％，表明供试品溶液
在８ｈ内稳定性良好，见表２所列．
表２　稳定性实验结果
编号 桑根酮Ｃ峰面积
０　 １４　０１２．５
２　 １４　１５３．６
４　 １３　９８８．２
６　 １４　０５７．９
８　 １３　９１１．７
珡Ｘ＝１４　０２４．８
ＲＳＤ＝０．６４％
２．４．４　重复性试验　取同一批样品６份（生长３
年根茎部），分别按“２．３”项描述的方法制备成供
试品溶液测定桑根酮 Ｃ含量，结果平均含量为
０．０５４％，ＲＳＤ为１．９２％，表明本法重复性良好，
见表３所列．
表３　重现性试验结果
编号 桑根酮Ｃ峰面积
１　 ０．０５４
２　 ０．０５５
３　 ０．０５５
４　 ０．０５３
５　 ０．０５４
６　 ０．０５６
珡Ｘ＝０．０５４
ＲＳＤ＝１．９２％
５３第３期 白华等：高效液相色谱法测定不同生长年限和不同部位桑白皮中桑根酮Ｃ的含量
２．４．５　加样回收率试验　精密称取桑根酮Ｃ含
量为０．０５４（％）的供试品（生长３年根茎部）９份，
置具塞平底烧瓶中，分别精密加入０．１４６ｍｇ·
ｍＬ－１的桑根酮Ｃ对照品溶液１．５ｍＬ，１．５ｍＬ，
１．５ｍＬ，３．０ｍＬ，３．０ｍＬ，３．０ｍＬ，４．０ｍＬ，４．０
ｍＬ，４．０ｍＬ，按供试品溶液制备方法平行制备并
测定，计算回收率，结果表明加样回收率较好，结
果见表４所列．
表４　回收率测定结果
称样量／ｇ 样品中桑根酮Ｃ含量／ｍｇ 桑根酮Ｃ加入量／ｍｇ 桑根酮Ｃ测得量／ｍｇ 回收率／％
０．７５１　１　 ０．４０５　６　 ０．２１９　０　 ０．６１２　１　 ９４．２９
０．７４９　８　 ０．４０４　９　 ０．２１９　０　 ０．６１３　３　 ９５．１６
０．７５２　３　 ０．４０６　２　 ０．２１９　０　 ０．６２１　２　 ９８．１７
０．７５０　７　 ０．４０５　４　 ０．４３８　０　 ０．８３５　２　 ９８．１３
０．７４８　１　 ０．４０４　０　 ０．４３８　０　 ０．８４５　７　 １００．８４
０．７５１　５　 ０．４０５　８　 ０．４３８　０　 ０．８３３　８　 ９７．７２
０．７５２　２　 ０．４０６　２　 ０．５８４　０　 ０．９６８　２　 ９６．２３
０．７５０　３　 ０．４０５　２　 ０．５８４　０　 ０．９７６　８　 ９７．８８
０．７５１　７　 ０．４０５　９　 ０．５８４　０　 ０．９９２　６　 １００．４６
珡Ｘ＝９７．６５％　　ＲＳＤ＝２．２４％
２．４．６　样品测试　分别取９批样品，按照“２．３”
项方法制备样品溶液，按上述色谱条件测定，记录
色谱图并计算各样品桑根酮Ｃ的含量，结果见表
５所列．
表５　样品测定结果（ｎ＝９）
标号 年限 部位 桑根酮Ｃ含量／％
１．１
１．２
１．３
２年生
主根 ０．０６３
根茎 ０．０４７
须根 ０．０３８
２．１
２．２
２．３
３年生
主根 ０．０６７
根茎 ０．０５５
须根 ０．０３９
３．１
３．２
３．３
３年以上生
主根 ０．０８８
根茎 ０．０６２
须根 ０．０４３
3　结果与讨论
（１）本实验经对桑根酮Ｃ对照品溶液进行紫
外扫描发现，在２８０ｎｍ 处有最大吸收，故选择
２８０ｎｍ作为测定波长．通过对甲醇－０．２％的甲
酸溶液（６８∶３２）［４］、甲醇－水（７５∶２５）［３］、甲醇－
水（６０∶４０）［５］等多种流动相进行比较实验，发现
甲醇－水（７５∶２５）的系统分离效果最好，且柱效
高，故选择本系统为流动相．
（２）因药材化学成分的含量受多重因素的影
响，如品种、栽培技术、采收时间、加工方法等，为
了尽量减少其它干扰因素，故选取样品时，我们采
用了在同一时间、同一块地采集同一品种不同生
长年限的桑树；关于不同部位，由同一株桑树挖取
整个根部进样采样；由同一人进行样品的处理．
（３）所用的方法简便、灵敏、准确，能较好地分
离测定桑根酮Ｃ的含量．从９份材料中发现，生
长年限对桑根酮Ｃ含量影响较大．桑根酮Ｃ含量
高低与生长年限成正比．通过不同部位的检测发
现主根桑根酮Ｃ的含量高于根茎，须根中桑根酮
Ｃ的含量最低，中国药典规定秋末叶落时至次春
发芽前采挖根部，刮去黄棕色粗皮，纵向剖开，剥
取根皮，晒干．在实地走访中发现药农一般采挖３
年以上的，并在处理桑白皮时细小的须根是废弃
不用的，以保证药材的美观与生药的质量．本实验
验证了药农的采集是科学的．但是须根除了桑根
酮Ｃ含量较低，还有没有其它的药效与成分，需
进行多成分同时测定并结合药效学实验进一步深
入探讨．
参考文献：
［１］孙星衍．神农本草经［Ｍ］．太原：山西科学技术出版
社，１９９１．
［２］国家药典委员会．中华人民共和国药典２０１５年版
［Ｍ］．北京：中国医药科技出版社，２０１５．
［３］李洪玉，孙静芸，吴素香．不同来源桑白皮降压成分桑
根酮Ｃ含量测定［Ｊ］．中成药，２００２，２４（２）：１０４－１０６．
６３　　　　　　　　　　　　　　　　兰州文理学院学报（自然科学版）　　　　　　　　　　　　　　　　第３０卷
［４］段志涛，高英，周刚．桑白皮药材的质量标准研究［Ｊ］
中药材，２０１３，３６（４）：５５３－５５７．
［５］陆向红，任其龙，苏云，等．从桑白皮中提取药物成分
桑根酮Ｃ［Ｊ］．浙江大学学报，２００１，２８（６）：６６５－６６９．
［责任编辑：纪彩虹］
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７３第３期 白华等：高效液相色谱法测定不同生长年限和不同部位桑白皮中桑根酮Ｃ的含量