全 文 ：乌桕叶提取物的体外抑菌试验
彭小列，刘世彪，张 丽，杨 珂
（吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000）
摘 要：以大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、白念球菌、鸡白痢沙门氏杆菌、金黄色葡萄球菌、猪丹毒丝菌和多杀性巴氏杆菌为受
试菌，采用杯碟法测定乌桕叶水提取物和醇提取物对各种病原菌的抑菌活性，并用二倍稀释法测定其最小抑菌浓度（MIC）。结果
表明，两种提取液对猪丹毒丝菌和多杀性巴氏杆菌的抑制作用不灵敏，而对其余受试菌的抑制作用明显，尤其对鸡白痢沙门氏杆
菌和变形杆菌的抑菌活性最强，且醇提液的作用大于水提液。乌桕叶水提液对鸡白痢沙门氏杆菌和变形杆菌的最小抑菌浓度为
0.1 g/mL，醇提液为 0.05 g/mL。
关键词：乌桕；叶；抑菌活性
中图分类号：Q946 文献标识码：A 文章编号：1006－060X（2011）09－0105－03
Antibacterial Experiment in vitro for Extracts from Leaves of Sapium sebiferum
PENG Xiao-lie, LIU Shi-biao, ZHANG Li, YANG Ke
(College of Biology and Environmental Sciences, Jishou University, Hunan 416000, PRC)
Abstract: The antibacterial activities of aqueous extract and ethanol extract from leaves of Sapium sebiferum on
Escherichia coli, Proteus vulgaris, Bacillus subtilis, Candida albicans, Salmonella pullorum, Staphylococcus aureus,
Erysipelothrix rhusiopathiae and Pasteurella multocida were determined by using oxford cup method and the minimum
inhibitory concentration (MIC) was detected by double dilution method. The results showed that both kinds of extracts all
had insensitive antibacterial effects on Erysipelothrix rhusiopathiae and Pasteurella multocida, while had obvious
antibacterial effects on other bacteria, especially had the strongest antibacterial effects on Salmonella pullorum and
Proteus vulgaris. The antibacterial effect of ethanol extract was better than that of aqueous extract. The MIC of aqueous
extract and ethanol extract on Salmonella pullorum and Proteus vulgaris was 0.1 g/mL and 0.05 g/mL, respectively.
Key words: Sapium sebiferum; leaf; antibacterial activity
乌桕[Sapium sebiferum（L.）Roxb]又名乌果树、
乌桕籽、木梓、桕子柴等，系大戟科乌桕属落叶乔
木，在我国南方分布较广。传统中医理论认为，乌桕
性凉、味苦、具小毒，其叶、根、皮入药能清热解毒、
消肿、利水通便、疗毒等，主治头痛、牙疼、水肿、湿
疮、疥癣、蛇伤和肝硬化等病症[1]。湘西民间有利用
乌桕叶来治疗人和畜禽的腹泻及细菌性感染疾病
的习俗。目前，治疗家禽、家畜疾病采用的药物及其
饲料添加物质多为抗生素、化学合成药物和激素
等，这些物质在治疗和饲料中长期使用，会产生一
定的副作用和残留，最终危害人体健康。天然的中
草药具有营养性和药物性的双重作用，既能促进机
体代谢又能增强机体抵抗力，中草药的抑菌功能可
以用作药物或饲料添加剂来治病防病[2-3]。关于乌桕
根皮水提物的抑菌试验已有报道[4]，而有关乌桕叶
抑菌试验的受试菌较少，了解尚不深入[5-6]。本文用
乌桕叶的水提物和醇提取物对大肠杆菌等 8种受
试病原菌进行了抑菌测定，并用二倍稀释法测定了
其最小抑菌浓度，以期为乌桕叶在畜禽疾病治疗方
面的应用提供依据。
1 材料与方法
1.1 材 料
1.1.1 试验材料 乌桕叶采自湖南省湘西自治州
永顺县城郊外。原植物经吉首大学植物分类学张代
贵教授鉴定为大戟科植物乌桕 [Sapium sebiferum
（L.）Roxb]。
1.1.2 指示菌 鸡白痢沙门氏杆菌（Salmonella pul－
lorum）、猪丹毒丝菌（Erysipelothrix rhusiopathiae）和
多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）由中国兽药
监察所提供；大肠杆菌（Escherichia coli）、变形杆菌
（Proteus vulgaris）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）、白
念球菌（Candida albicans） 和金黄色葡萄球菌
（Staphylococcus aureus），由吉首大学微生物教研室
收稿日期：2011-03-02
基金项目：湖南省自然科学基金资助项目（09JJ3051）
作者简介：彭小列（1966-），女，湖南永顺县人，高级实验师，
硕士，研究方向为动物生理与药理学。
通讯作者：刘世彪
湖南农业科学 2011，（9）：105~107 Hunan Agricultural Sciences
DOI:10.16498/j.cnki.hnnykx.2011.09.037
表 1 乌桕叶的水提取液和乙醇提取液的抑菌作用
大肠杆菌
变形杆菌
枯草杆菌
白念球菌
鸡白痢沙门氏杆菌
金黄色葡萄球菌
猪丹毒丝菌
多杀性巴氏杆菌
菌必杀抑菌圈
直径 D（mm）
28.00
21.50
26.10
27.70
31.20
24.06
18.10
22.60
水提取液抑菌圈
直径 D（mm）
13.02
16.30
9.08
14.08
18.90
17.02
6.40
6.70
醇提取液抑菌圈
直径 D（mm）
14.00
19.28
13.50
17.40
20.70
18.60
9.30
8.80
无菌水对照
直径 D（mm）
0
0
0
0
0
0
0
0
注：抑菌效果判断标准：D≤8mm 为不灵敏，8mm≤D≤13mm为低
度灵敏，13mm≤D≤19mm为中度灵敏，D>19mm为高度灵敏[9]。
致病指示菌
提供。
1.1.3 试验仪器和试剂 恒温干燥箱、RE52-99旋
转蒸发器、KQ-500DB型数控超声波清洗器、FDU-
1200冷冻干燥机、振荡培养箱、立式压力蒸汽灭菌
锅。乙醇（分析纯，上海国药集团）、乳酸恩诺沙星
（菌必杀）SP（杭州富阳市动物保健药品厂）。
1.2 方 法
1.2.1 乌桕叶提取液的制备 （1）水提取液的制
备。取乌桕叶粉末 40 g，加入 6倍蒸馏水（m/v），封
口膜封口，超声波处理 30 min，在恒温干燥箱
（60℃）中放置 24 h，趁热减压抽滤，滤渣再加入 3
倍蒸馏水，在恒温干燥箱放置 12 h，再次抽滤，合并
滤液。用旋转蒸发器于 50℃条件下浓缩至干，用灭
菌水温溶并定容至 100 mL而成水悬浊液，获得 0.4
g/mL的生药水提取物，经细菌过滤器过滤，于 4℃
冰箱中保存备用。（2）乙醇提取液的制备。取乌桕叶
粉末 40 g，加入 3 倍（m/v）的 95 %乙醇，封口膜封
口，超声波处理 30 min，振荡浸泡提取 24 h，减压抽
滤，滤渣再加入 3 倍的 95%乙醇，浸泡提取 12 h ,
减压抽滤，合并滤液，旋转蒸发器浓缩（50℃）至粘
稠状，用冷冻干燥机蒸发成干粉状（24 h），用甲醇
溶解并定容至 100 mL，配成 0.4 g/mL的生药醇提
取物，经细菌过滤器过滤，于 4℃冰箱中保存备用。
1.2.2 乳酸恩诺沙星液的制备 取乳酸恩诺沙星
（菌必杀）0.05~0.1 g加蒸馏水定容至 1 000 mL，配
成 0.005%～0.01%的溶液，作为阳性对照。
1.2.3 培养基的配制 牛肉膏蛋白胨培养基的配
制方法为，先称取牛肉膏 1.5 g，蛋白胨 5 g，NaCl
2.5 g, 琼脂 8 g, 再加入蒸馏水 500 mL，用蒸汽压力
灭菌锅在 121℃下灭菌 30 min，冷却至 45℃备用。
1.2.4 抑菌试验 （1）供试菌株的活化和菌悬液
的制备。将所有供试菌株接入斜面培养基，置于
37℃恒温培养箱内培养 24 h，置 4℃冰箱中备用。用
接种环挑取试验菌种，放入装有玻璃球的 50 mL无
菌生理盐水中，于振荡培养箱中，37℃ 振荡培养
18~24 h，使菌分布均匀，采用比浊法以无菌水将菌
液稀释成浓度为 106~107 cfu/mL 的各种试验菌悬
液，于 4℃下保存备用。（2）杯碟法抑菌试验。于超净
工作台内，向无菌培养皿中倒入灭过菌的含 2%琼
脂的水琼脂 10 mL作为下层，凝固后再倒入 10 mL
培养基（琼脂为 1%）和 0.5 mL含指示菌的菌悬液
混合液作为上层。凝固后，将 4个已灭菌的牛津杯
（外径为 8 mm）等距离地装在带菌平板上，依次在
各杯中加入菌必杀、乌桕叶水提液和乌桕叶醇提取
液各 0.2 mL，以无菌水作为对照，标记各培养皿和
杯位号后，置于 37℃培养箱中培养 24 h。取出后用
游标卡尺测定抑菌圈直径（以抑菌圈直径大于 6
mm 者评价为有抑菌作用，无菌水对照组应无抑制
圈产生）。各提取液的每项抑菌试验平行重复 3次，
取其平均值作为测定结果。（3）最低抑菌浓度（MIC）
的测定。抑菌浓度测定采用 2倍稀释法。在无菌条
件下，取灭菌试管 6 只，以乌桕叶水提取液（0.4 g/
mL）作为 100%原液，取 10 mL放入第 1管，再从第
1管中取出 5 mL乌桕叶水提液加入第 2管，另取 5
mL灭菌水加入混匀；再从第 2管中取出 5 mL溶液
加入第 3管，同时加入灭菌水 5 mL，混匀。依此作
倍比稀释，使各管生药提取液的浓度分别为 0.4、
0.2、0.1、0.05、0.025和 0.012 5 g/mL，另取一支试管
加入 10 mL灭菌水作对照。同法配制乌桕叶的醇提
液，以甲醇进行稀释，另取一支试管加入 10 mL甲
醇作对照。向上述 12支试管分别加入 24片直径 6
mm的圆滤纸片，混合均匀，浸渍 1 d后风干。在无
菌条件下，吸取 0.1 mL适宜浓度的各类菌悬液加
入到备用平板培养基上，涂布均匀。将上述处理过
的滤纸片贴到培养基上，每个培养皿等距离贴 4片
滤纸片，分别为乌桕水提液、乌桕醇提液、灭菌水和
甲醇。37℃下培养 24 h，用十字交叉法测定抑菌圈
直径大小，取其平均值。
2 结果与分析
2.1 乌桕叶的抑菌作用
测得乌桕叶的水提取液和乙醇提取液对大肠
杆菌等指示菌的抑制作用，见表 1。
表 1显示，乌桕叶提取物对各种供试致病细菌
均有一定的抑制作用。其中水提取液对金黄色葡萄
球菌、大肠杆菌、变形杆菌、白念球菌和鸡白痢沙门
氏杆菌的抑菌效果为中度灵敏，对枯草杆菌抑菌效
第 9期湖南农业科学106
表 2 乌桕水提液对供试菌的最低抑菌浓度（MIC）（g/mL）
致病指示菌
大肠杆菌
变形杆菌
枯草杆菌
白念球菌
鸡白痢沙门氏杆菌
金黄色葡萄球菌
猪丹毒丝菌
多杀性巴氏杆菌
无菌水对照
++
++
++
++
++
++
++
++
0.012 5
++
+
++
++
+
++
++
++
0.025
+
+
+
+
+
+
++
++
0.05
+
+
+
+
+
+
+
+
0.1
+
-
+
+
-
+
+
+
0.2
-
-
-
-
-
-
+
+
0.4
-
-
-
-
-
-
-
-
注:“－”表示无菌生长，“+”表示少量菌生长，“++”表示菌大量生长。
表 3 乌桕醇提液对各供试菌的最低抑菌浓度（MIC）（g/mL）
致病指示菌
大肠杆菌
变形杆菌
枯草杆菌
白念球菌
鸡白痢沙门氏杆菌
金黄色葡萄球菌
猪丹毒丝菌
多杀性巴氏杆菌
甲醇对照
++
++
++
++
++
++
++
++
0.012 5
++
+
++
++
+
++
++
++
0.025
+
+
+
+
+
+
++
++
0.05
+
-
+
+
-
+
+
+
0.1
-
-
-
-
-
-
+
+
0.2
-
-
-
-
-
-
-
-
0.4
-
-
-
-
-
-
-
-
注：“－”表示无菌生长，“+”表示少量菌生长，“++”表示菌大量生长。
果为低度灵敏，对猪丹毒丝菌和多杀性巴氏杆菌抑
制效果为不灵敏。醇提取液对变形杆菌和鸡白痢沙
门氏杆菌的抑制效果为高度灵敏，对金黄色葡萄球
菌、大肠杆菌、枯草杆菌和白念球菌的抑制效果为
中度灵敏，对猪丹毒丝菌和多杀性巴氏杆菌抑制效
果为低度灵敏。乌桕醇提取物比水提取物的抑菌效
果要好，表明其叶中的有效成分多为醇溶性的。特
异的阳性对照菌必杀除对猪丹毒丝菌的抑菌作用
为中度灵敏外，对其余病原菌的抑菌作用均为高度
灵敏，而对照无菌水无抑菌作用。与菌必杀相比，乌
桕叶提取物对上述细菌的抑菌效果适中，但它对鸡
白痢沙门氏杆菌、变形杆菌和金黄色葡萄球菌的抑
制作用仍很明显。
2.2 乌桕叶的最低抑菌浓度
用二倍稀释法测定的乌桕水提液对供试菌的
最低抑菌浓度（MIC），见表 2。
由表 2可知，乌桕叶水提液对猪丹毒丝菌和多
杀性巴氏杆菌的最小抑菌浓度为 0.4 g/mL，对大肠
杆菌、枯草杆菌、白念球菌和金黄色葡萄球菌的最
小抑菌浓度为 0.2 g/mL，对变形杆菌和鸡白痢沙门
氏杆菌的最小抑菌浓度为 0.1 g/mL。
用二倍稀释法测定的乌桕叶醇提液对供试菌
的最低抑菌浓度（MIC），见表 3。
表 3表明，乌桕叶醇提液对猪丹毒丝菌和多杀
性巴氏杆菌的最小抑菌浓度为 0.2 g/mL，对大肠杆
菌、枯草杆菌、白念球菌和金黄色葡萄球菌的最小
抑菌浓度为 0.1 g/mL，对变形杆菌和鸡白痢沙门氏
杆菌的最小抑菌浓度为 0.05 g/mL。与乌桕叶水提
液对各类病原菌的最小抑菌浓度相比，醇提液的浓
度相应地降低 1/2，说明醇提液中含有更多的抑菌
活性物质。
3 讨 论
乌桕根皮作为传统的中草药，毒副作用小，在
民间用于治疗由大肠杆菌引起的腹泻和志贺氏杆
菌引起的痢疾，疗效很好，原因在于其水提物对大
肠杆菌和志贺氏杆菌具有抑制作用[4]，而对枯草杆
菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌没有活性。但有试
验表明，乌桕叶乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的抑
菌活性最大，尤其是其乙醇提取物的乙酸乙酯可溶
部的抑菌活性最强。本试验表明，乌桕叶的水提液
和醇提液对大肠杆菌等 8种受试菌均具有不同程
度的抑菌活性，尤其对鸡白痢沙门氏杆菌和变形杆
菌的抑菌作用明显。抑菌试验和最小抑菌浓度试验
都表明，乌桕叶醇提液的抑菌效力更强，表明抑菌
的主要有效成分是醇溶性的。霍光华等在乌桕叶抑
菌活性功能成分的研究中指出，其抑菌活性的先导
物应是具有相当极性的一些化合物，即以酸类物质
和黄酮类物质为主，由不同结构物质的协同作用而
产生活性。乌桕叶提取物的抑菌效果明显，可以直
接用于治疗因病菌引起的人畜疾病，或作为食品添
加剂和饲料添加剂加以开发利用。
参考文献：
[1] 彭小列，易 能，程天印. 乌桕的药用成分与药理作用研究进
展[J]. 中国野生植物资源，2008，27（3）：1-2.
[2] 邰发红，王新华. 中草药添加剂在畜禽生产中的应用研究进展
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[3] 董欣炜，王友国，玉永雄. 中草药饲料添加剂的研究进展[J]. 吉
林畜牧兽医，2005，（2）：8-30.
[4] 陈国华，邵 伟，何晓雯. 乌桕根皮水提物抗菌活性的初步研
究[J]. 时珍国医国药，2007，18（9）：2139-2140.
[5] 彭元丽，邹 坤，陈国华，等. 乌桕根皮乙酸乙酯部位抑菌活性
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[6] 董必慧，董 伟，刘 岩. 沿海生物能源植物——乌桕的生物
学特性及其开发利用[J]. 安徽农业科学，2009，37（29）：14173-
14174，14190.
（责任编辑：李 睿）
第 9期 彭小列等：乌桕叶提取物的体外抑菌试验 107