全 文 ：药物与临床

CHINA JOURNAL OF PHARMACEUTICAL ECONOMICS 225
2013年第7期 Drugs and Clinical
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二角菱壳和四角菱壳
不同提取物抗氧化能力比较研究※
裴 刚 1 胡乔铭 2 向德标 2 罗李娜 2 丁扬洲 2 袁 园 1
【摘要】目的 研究不同菱角壳不同溶剂的提取物的抗氧化能力。方法 采用 DPPH 法分别测定二角菱角壳、四角菱角壳
氯仿、乙酸乙酯、乙醇、水提取浸膏的抗氧化能力，同时与抗坏血酸、槲皮素、没食子酸标准品进行了对比。结果 用同
一溶剂提取时，二角菱壳提取浸膏的 IC50 值均高于四角菱壳提取浸膏；同一种菱角壳用不同溶剂提取时，其提取浸膏与
标准品相比 IC50 值为：氯仿浸膏＞水浸膏＞乙醇浸膏＞抗坏血酸＞乙酸乙酯浸膏≈槲皮素＞没食子酸，即其清除 DPPH
自由基能力的顺序为：没食子酸＞乙酸乙酯浸膏≈槲皮素＞抗坏血酸＞乙醇浸膏＞水浸膏＞氯仿浸膏。结论 菱角壳具有
较好的抗氧化能力。四角菱壳抗氧化能力强于二角菱壳，菱角壳乙酸乙酯提取部分清除 DPPH 自由基的能力最强。
【关键词】氧自由基；DPPH；二角菱壳；四角菱壳
【中图分类号】R917 【文献标识码】A 【文章编号】1673-5846(2013)07-0225-02

菱角为菱科植物菱或细果野菱的干燥果实[1]。
前期的工作显示，浙江产二角菱壳（Trapa bicornis
Var.bispinosa）和湖南产四角菱壳（Trapa natans
L.Var.incisa Makino）提取物对肺癌 A549 细胞具有
较强的生长抑制作用[2]。诱发肿瘤的因素很多，现
代研究表明，肿瘤的始发和促生阶段具有氧自由基
形成及出现细胞增殖水平的增高，因此清除氧自由
基核抑制细胞增殖水平成为预防和治疗肿瘤的一项
措施[3]。DPPH 自由基结构简单、性质稳定、反应
容易控制，是抗氧化剂自由基清除活性筛选的常用
试剂；DPPH 比色法也仅需要分光光度计，简单、
方便，实验条件容易满足[4]。本文以不同溶剂对上
述菱角壳进行提取，研究提取物对 DPPH 自由基的
清除能力，为菱角壳的抗癌药理活性探索提供参考。
1 仪器与材料
1.1 仪器 UV-1750 紫外可见分光光度计（岛津仪
器有限公司）；AL204 型电子分析天平（梅特勒托
利多公司）；FW135 中药材粉碎机（天津市泰斯特
仪器有限公司）。
1.2 材料 菱角于 2010 年 10 月分别采于浙江和
湖南，经中南林业大学生命科学院植物学教研室
马英姿副教授鉴定分别为菱科植物二角菱（Trapa
bicornis Var.bispinosa）和四角菱（Trapa natans
L.Var.incisa Makino）的干燥果实。标本存于湖南
中医药大学药学院中药化学教研室。
1.3 试剂 DPPH（1,1-二苯基-2-苦基苯肼自由基，
日本和光纯药工业株式会社）；抗坏血酸、槲皮素、
没食子酸标准品（中国药品生物制品检定所）；其余
试剂均为 AR。
2 实验方法
2.1 菱角壳提取浸膏制备 称取二角菱壳、四角菱
壳药材粗粉各 33.7g、34.4g，用滤纸包好分别置于

1 湖南中医药大学药学院，湖南长沙 410208
2 湖南中医药大学硕士研究生，湖南长沙 410208
※基金项目：湖南省教育厅资助项目(12C0272)；2011 年度湖南中医药大学研究生科研创新项目课题资助；2012 年度湖南中医药大学研
究生创新性课题资助
通讯作者：袁园（1984-），女，硕士，助理实验师；研究方向：中药及其复方化学成分研究；E-mail：yykakashi@163.com，电话：13787208503。
药物与临床

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Drugs and Clinical 2013 年第 7期
索氏提取器中，按极性由小到大的顺序依次用氯仿、
乙酸乙酯、乙醇、水，加热回流提取 3h。分别回收
溶剂，水浴蒸干，干燥器内干燥 24h，得黑褐色浸
膏，称重，则得到 8 个样品即二角菱壳氯仿浸膏
1.2g，四角菱壳氯仿浸膏 1.3g，二角菱壳乙酸乙酯
浸膏 5.5g，四角菱壳乙酸乙酯浸膏 4.2g，二角菱壳
乙醇浸膏 7.6g，四角菱壳乙醇浸膏 5.5g，二角菱壳
水浸膏 2.5g，四角菱壳水浸膏 1.8g。
2.2 试液的制备
2.2.1 DPPH 溶液的配制 精密称取 DPPH10mg，
溶于少量 95%乙醇中，定容至 250mL，即得浓度为
0.04mg/mL 溶液，置于冰箱中冷藏备用。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取抗坏血酸、槲
皮素、没食子酸对照品 20.3mg、20.4mg、10.1mg，
分别置于 100mL 容量瓶中，加入 95%乙醇稀释至刻
度，摇匀，得 203μg/mL 抗坏血酸对照品溶液、
204μg/mL 槲皮素对照品溶液、101μg/mL 没食子酸
对照品溶液，再参考文献，按 2 倍倍比稀释分别得
抗坏血酸、槲皮素、没食子酸相应的 8 个不同浓度
药液。
2.2.3 供试品溶液制备 精密称取 2.1 中制备的各
样品 20.1mg、39.0mg、4.2mg、4.1mg、8.5mg、4.3mg、
8.1mg、8.1mg，分别用相应溶剂溶解并定容至 10mL，
摇匀，得 2.01、3.90、0.42、0.41、0.85、0.43、0.81、
0.81mg/mL 的第一浓度初始液，再按 2 倍倍比稀释分
别得样品 B1-B8 相应的 8 个不同浓度药液。
2.3 DPPH自由基稳定性实验 取浓度为 203μg/mL
的抗坏血酸和浓度为 3.90mg/mL 的样品 B1 溶液，按
照 2.4.1 项下方法加样，每隔 2 min 测定吸光度值 Ai，
直到 Ai值基本稳定。吸光度值 Ai在加入抗氧化剂的
最初 20min 内下降较快，在 20～30min 内，反应体
系的 Ai值变化缓慢，30min 后 Ai值基本保持不变。
因此选择测定菱壳提取浸膏与 DPPH 自由基的反应
时间为 30min。
2.4 清除 DPPH能力的测定方法
2.4.1 清除率的测定 参考文献精密量取 DPPH 溶
液 2.5mL、对照品溶液和供试品溶液分别为 0.5mL，
于 510nm 处测定各吸光值（A），每一吸光值平行测
定 3 次，按下公式计算 DPPH 自由基清除率：
清除率（%）=（1-
0
ji
A
A-A ）×100%
2.4.2 半清除率的测定 按 2.4.1 下的操作步骤测
定待测液 DPPH 自由基清除率，绘制 DPPH 自由基
清除率对待测液浓度标准曲线，通过线性方程计算
出 DPPH 自由基清除率为 50%时所需对照品、不同
菱角壳提取浸膏浓度，即 IC50值。IC50值越低，DPPH
自由基清除率达 50%时所需抗氧化剂浓度越低，表
明该抗氧化剂清除自由基的能力越强。
3 结果与讨论
通过测定各抗氧化剂清除 DPPH 能力的指标为
IC50值，其比较结果见下表 1。
表 1 抗氧化剂浓度与清除率关系
抗氧化剂 回归方程
相关系数
r
IC50
(μg/mL)
抗坏血酸 Y=2.3233C+0.1665 0.9987 21.45
槲皮素 Y=2.6631C+1.36 0.9998 18.28
没食子酸 Y=5.058C+1.5982 0.9992 9.57
二角菱壳氯仿浸膏 Y=0.0274C+3.3435 0.9914 1946.84
二角菱壳乙酸乙酯浸膏 Y=2.585C+1.042 0.9994 18.94
二角菱壳乙醇浸膏 Y=1.0025C+4.1417 0.9904 45.74
二角菱壳水浸膏 Y=0.8093C+4.6114 0.9797 56.08
四角菱壳氯仿浸膏 Y=0.0995C+2.5438 0.9967 476.95
四角菱壳乙酸乙酯浸膏 Y=3.0477C+3.303 0.9971 15.32
四角菱壳乙醇浸膏 Y=1.835C+2.9683 0.9984 25.63
四角菱壳水浸膏 Y=1.256C+2.2557 0.9956 41.30

由表 1 实验结果可知，不同种类菱角壳用同
一溶剂提取时，二角菱壳提取浸膏的 IC50 值均高
于四角菱壳提取浸膏，即四角菱壳提取浸膏清除
DPPH 自由基的能力强于二角菱壳提取浸膏；同一
种菱角壳用不同溶剂提取时，其提取浸膏与标准
品相比 IC50 值为：氯仿浸膏＞水浸膏＞乙醇浸膏
＞抗坏血酸＞乙酸乙酯浸膏≈槲皮素＞没食子
酸，即其清除 DPPH 自由基能力的顺序为：没食
子酸＞乙酸乙酯浸膏≈槲皮素＞抗坏血酸＞乙醇
浸膏＞水浸膏＞氯仿浸膏，乙酸乙酯部分清除
DPPH 自由基的能力最强。表明菱角壳中主要的抗
氧化活性成分溶于乙酸乙酯等极性溶剂中，其中
的弱极性成分不具备良好的抗氧化能力，则奠定
了以后的分离抗氧化活性单体实验中以乙酸乙酯
浸膏为主的基础。
参考文献
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