全 文 ：CRTER
P.O.Box1200,Shenyang 110004 kf23385083@sina.com www.zglckf.com
中国组织工程研究与临床康复 第11卷 第34期 2007-08-26出版
JournalofClinicalRehabilitativeTissueEngineeringResearch August26,2007 Vol.11,No.34
赣南医学院,1药理
教研室,2第一附属
医院,3机能学实验
室,江西省赣州市
341000
黄贤华★,男,1971
年生,江西省九江市
人,汉族,赣南医学
院在读硕士,讲师,
主要从事心血管和
免疫药理方面的研
究。
xianhuahuang2002@
163.com
赣南医学院院级课
题(200335)*
中图分类号:R392
文献标识码:B
文章编号:1673-8225
(2007)34-06808-03
收稿日期:2006-10-31
修回日期:2007-05-21
(06-50-10-7869/M·Q)
HuangXian-hua1,PanHuo-ying2,HeWei1,
XiongXiao-qin3
InfluenceofDracocephalumMoldavicumwaterextractonimmunologicalfunctioninmice
Abstract
AIM:TostudytheefectofDracocephalumMoldavicumwaterextractonimmunologicalfunctioninmice.
METHODS:TheexperimentwasconductedattheDepartmentofPharmacologyinGannanMedicalColegefromApril
toJune2005.①FiftyadultKunmingmicewererandomlydividedintofivegroups, salinegroup, 1, 2and4g/kg
Dracocephalum Moldavicum groupsandcyclophosphamidegroup. Themiceweretreatedwithcorespondingdrugs
intraperitonealy,onceadayforsuccessively7days.Afterthelastadministration,bodymasswasrecordedonthe
folowingday.Themiceweresacrificedtocolectandweightthymusglandandspleen,andthenmicethymusglandand
spleenindexwerecalculated.②Totaly40adultKunmingmicewerecolectedandrandomlyassignedinto4groups,
salinegroupand1,2and4g/kgDracocephalumMoldavicumgroups.Themiceweretreatedwithcorespondingdrugs
intraperitonealy,onceadayforsuccessively10days.Thirtyminutesafterthelastadministration,Indianink(0.01mL/g)
wasinjectedbyvenacaudalis, 20μLbloodfrom venaorbitalisposteriorwascolectedatfirstandfifthminuteand
dissolvedintothesolutionof2mL0.1%Na2CO3.Absorbance(A)wasdetermined.Thenmiceweresacrificedbyluxating
C-spine.Theliverandspleenweretakenoutofandweighed.AtlastclearanceindexKandremedyingclearanceindex
αwerecalculated,respectively.③FortyadultKunmingmicewererandomlydividedinto4groups,salinegroupand1,2
and4g/kgDracocephalumMoldavicumgroups.5%salineandchickenredbloodcel(CRBC)suspension(0.2mL)was
injectedintraperitonealyandcariedoutimmuneineachmouse.Meanwhile,drugwasadministrated(onceadayfor7
days).Bloodwascolectedbydrawingeyebalandthencentrifugated.SerumandCRBCsuspensionandcomplement
weremixed,theywereincubatedandcentrifugated.Awasdeterminedastheindexofserumhemolysin.④Fiftyadult
Kunmingmicewererandomlydividedintofivegroups,salinegroup,1,2and4g/kgDracocephalumMoldavicumgroups
andcyclophosphamidegroup.Onehourafterthelastadministration,bloodwascolectedbycutingtailsandmade
smear.100lymphocyteswerecheckedineverybloodsmearpreparation.Atlast,thepercentageofT-lymphocytewas
calculated.
RESULTS:Al180miceenteredthefinalanalysiswithoutanyloss.①Percentagesofthymusgland,spleenindexand
T-lymphocyteinmicewerelowerinthe2,4g/kgDracocephalumMoldavicumgroupsthanthesalinegroup (P<0.05,
P<0.01).Therewerenosignificantdiferencesbetweensalinegroupand1g/kgDracocephalumMoldavicumgroup
(P>0.05).②Carbonclearanceindexwaslowerinthe2,4g/kgDracocephalumMoldavicumgroupsthanthesaline
group(P<0.05,P<0.01).③Serumhemolysinlevelwaslowerinthe4g/kgDracocephalumMoldavicumgroupthanthe
salinegroup(P<0.01).
CONCLUSION:MiddleandhighdoseswaterextractfromDracocephalumMoldavicumhasimmunosuppressiveefect.
HuangXH,PanHY,HeW,XiongXQ.InfluenceofDracocephalumMoldavicumwaterextractonimmunologicalfunctioninmice.Zhongguo
ZuzhiGongchengYanjiuyuLinchuangKangfu2007;11(34):6808-6810(China)
[www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/07-34/34k-6808(ps).pdf]
摘要
目的:观察山薄荷水提取液对小鼠免疫功能的影响。
方法:实验于2005-04/06在赣南医学院药理教研室完成。①取成年昆明种小鼠50只,随机均分成5组,生理盐水组、山薄荷水
提取液1,2,4g/kg组、环磷酰胺组。腹腔注射给予相应药物,1次/d,连给7d,末次给药后次日称体质量,麻醉下处死剥取胸
腺、脾称质量,计算小鼠的胸腺、脾指数。②取成年昆明种小鼠 40只,随机均分成 4组,生理盐水组、山薄荷水提取液 1,2,
4g/kg组。腹腔注射给予相应药物,1次/d,连给10d,于末次给药30min后,尾静脉注射印度墨汁0.01mL/g体质量,注射后
1,5min从眶后静脉丛取血20μL,溶于2mL0.1%Na2CO3溶液中,测定吸光度。最后将小鼠麻醉下颈椎脱臼处死,分别称取
肝、脾质量,计算廓清指数K和校正廓清指数 α。③取成年昆明种小鼠40只,随机均分成4组,生理盐水组、山薄荷水提取液
1,2,4g/kg组。每鼠腹腔注射5%生理盐水鸡红细胞混悬液0.2mL进行免疫,即日开始给予相应药物,1次/d,连给7d,摘眼
球取血,离心,取血清与鸡红细胞悬液、补体混合,孵育,离心,测定吸光度作为判定血清半数溶血值的指标。④取成年昆明种小鼠
50只,随机均分成5组,生理盐水组、山薄荷水提取液1,2,4g/kg组、环磷酰胺组。末次给药后1h,剪鼠尾取血涂片,每只小
鼠血涂片标本均查100个淋巴细胞,计算T淋巴细胞的百分比。
结果:参加实验的180只小鼠全部进入结果分析,没有脱失。①胸腺、脾指数及T淋巴细胞百分比:山薄荷水提取液2,4g/kg组
小鼠胸腺指数、脾指数、外周血T淋巴细胞百分比低于生理盐水组(P<0.05,P<0.01)。而山薄荷水提取液1g/kg组与生理
盐水组比较差异无显著性意义(P>0.05)。②校正廓清指数:与山薄荷水提取液2,4g/kg组校正廓清指数低于生理盐水组,差
异有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。③血清溶血素含量:4g/kg山薄荷水提取液组血清溶血素含量低于生理盐水组,差异有
显著性(P<0.01)。
结论:中、高剂量山薄荷水提液具有免疫抑制作用。
关键词:山薄荷;免疫抑制;小鼠
黄贤华,潘火英,何蔚,熊小琴.山薄荷水提取液对小鼠免疫功能的影响[J].中国组织工程研究与临床康复,2007,11(34):6808-6810
[www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/07-34/34k-6808(ps).pdf]
山薄荷水提取液对小鼠免疫功能的影响*★
黄贤华 1,潘火英 2,何 蔚 1,熊小琴 3
基础医学
1Department of
Pharmacology, 2First
Afiliated Hospital,
3FunctionLaboratory,
Gannan Medical
Colege, Ganzhou
341000, Jiangxi
Province,China
HuangXian-hua★ ,
Studyingformasters
degree, Lecturer,
Department of
Pharmacology,
Gannan Medical
Colege, Ganzhou
341000, Jiangxi
Province, China
xianhuahuang2002@
163.com
Supportedby:agrant
of Gannan Medical
Colege,No.200335*
Received:2006-10-31
Accepted:2007-05-21
6808
CRTER
沈阳1200邮政信箱 110004 kf23385083@sina.com www.zglckf.com
0 引言
山薄荷,又名摩眼子,为唇形科植物香青
兰的全草,主要功用为解表、清热、止痛,临床
多用于治疗外感头痛[1]。本药物为赣南医学院
童竞亚、张启兴教授用噬菌体筛选抗癌药[2]之
一,作者在对其进行抗S180肉瘤作用研究[3]
时发现,山薄荷在抑制肿瘤组织生长的同时还
可减轻胸腺和脾的重量,胸腺和脾是机体免疫
器官,故推测该药可能有免疫抑制作用。免疫
抑制剂临床广泛用于风湿性疾病、自身免疫性
疾病、器官移植等[4-6],环孢素 A、硫唑嘌呤等
传统制剂由于毒副作用大,有的甚至诱发机体
发生肿瘤等[6-14]缺点,限制了使用,而中药免
疫剂具有毒副作用小,无依赖性等优点。本课
题旨在探寻一种新的中药免疫抑制剂。
1 材料和方法
设计:随机对照动物实验。
单位:赣南医学院药理教研室。
材料:实验于2005-04/06在赣南医学院
药理教研室完成。选择健康成年昆明种小鼠
180只,雌雄各半,体质量 18～22g,由江西省
医学实验动物中心提供 (实验动物合格证号:
JXA2004085, 实 验 动 物 机 构 许 可 证 号 :
021-9712),自由饮食。
山薄荷水提取液的制备:山薄荷购自赣州
草药店,取适量加蒸馏水煮沸1h后过滤,残渣
再用蒸馏水提取1次,合并滤液并浓缩至每毫
升提取液相当于生药1g,供实验用。
主要试剂和仪器:注射用环磷酰胺(江苏
恒瑞医药股份有限公司)。鸡红细胞,采自市场
销售健康鸡,补体自制,其余试剂均为国产分
析纯。电子天平,AG135分析天平(梅特勒-托
利多仪器上海有限公司),721分光光度计 (上
海光学仪器厂)。
设计、实施、评估者:设计、评估为第一作
者,实施为全部作者。
方法:
免疫器官质量法[15]:取小鼠50只,随机均
分成5组,生理盐水组,山薄荷水提取液 1,2,
4g/kg组,环磷酰胺组。腹腔注射给药,每天给
药1次,连续给7d,末次给药后次日,称质量,
麻醉下眼眶放血处死,剥取胸腺、脾,电子天平
称质量,计算胸腺(脾)指数 =[胸腺(脾)质量
(mg)/体质量(g)]。
单核吞噬细胞功能测定法(小鼠碳粒廓清
法)[15]:取小鼠40只,随机均分成4组,生理盐
水组、山薄荷水提取液1,2,4g/kg组。腹腔注
射给药,每天给药1次,连续给10d,于末次给
药30min后,尾静脉注射印度墨汁0.01mL/g
体质量,注射后 1,5min用吸管(预先用肝素
溶液湿润)分别从眶后静脉丛取血 20μL,溶
于 2mL0.1%Na2CO3溶液中摇匀,置 721型
分光光度计在波长650nm下比色,测定吸光
度(A)。最后将小鼠麻醉下颈椎脱臼处死,分别
称取肝、脾质量,计算廓清指数 K和校正廓清
指数 α[K=(logA1-logA2)/(t2-t1),α=K1/3×体质
量/(肝质量+脾质量),t2-t1为取两血样的时
间差]。
鸡红细胞作免疫原的溶血素测定法[15]:
取小鼠 40只,随机均分成 4组,生理盐水组、
山薄荷水提取液1,2,4g/kg组。每鼠腹腔注
射 5%生理盐水鸡红细胞混悬液 0.2mL进
行免疫,即日开始腹腔注射给药,免疫后 7d,
摘眼球取血,离心,取血清用生理盐水稀释
100倍,取稀释血清 1mL与 5%鸡红细胞悬
液 0.5mL,10%补体0.5mL混合,在37℃恒
温箱中孵育30min后,0℃冰箱中中止反应。
离心,取上清液于 721分光光度计 540nm
处比色,测定吸光度(A),另设不加血清的空白
对照,取其上清液作为比色时调“0”的基准。以
吸光度读数作为判定血清半数溶血值的指
标。
小鼠外周血液中 T淋巴细胞酶标记染色
法[15]:取小鼠 50只,随机均分 5组,生理盐水
组,山薄荷水提取液1,2,4g/kg组,环磷酰胺
组。连续给药8d,于末次给药后 1h,剪鼠尾
取血涂片,自然干燥后,浸入 37℃孵育液 (已
预热 30min)中孵育 3h,自来水冲洗,加 1%
孔雀绿溶液染色 8s,自来水冲洗,晾干后油镜
检查,每只小鼠血涂片标本均查100个淋巴细
胞,计算T淋巴细胞的百分比。
主要观察指标:①各组小鼠胸腺指数和脾
指数。②各组小鼠校正廓清指数α。③各组小
鼠血清溶血素含量。④各组小鼠T淋巴细胞百
分比。
统计学分析:由第一作者进行数据处理,
数据以x±s表示,组间数据比较采用t检验,
以P<0.05为差异有显著性意义。
课题背景:山薄
荷为赣南医学院
童竞亚、张启兴
教授用噬菌体筛
选抗癌药之一,
作者在对其进行
抗 S180肉瘤作
用研究时发现,
山薄荷在抑制肿
瘤组织生长的同
时还可减轻胸腺
和脾的重量,胸
腺和脾是机体免
疫器官,故推测
该药可能有免疫
抑制作用。
ISSN1673-8225 CN21-1539/R
www.zglckf.com kf23385083@sina.com 黄贤华,等.山薄荷水提取液对小鼠免疫功能的影响
6809
CRTER
P.O.Box1200,Shenyang 110004 kf23385083@sina.com www.zglckf.com
2 结果
2.1 实验动物数量分析 参加实验的180只
动物全部进入结果分析,没有脱失。
2.2 山薄荷水提取液对小鼠胸腺、脾指数及
外周血中T淋巴细胞百分比的影响 见表1。
结果表明,与生理盐水组比较,山薄荷水
提取液 2,4g/kg组均可显著降低小鼠胸腺及
脾指数,降低小鼠外周血T淋巴细胞百分比,
差异有显著性。而山薄荷水提取液 1g/kg组
差异无显著性意义。
2.3 山薄荷水提取液对小鼠碳粒廓清率和血
清溶血素含量的影响 见表2。
实验结果表明, 山薄荷水提取液 2,
4g/kg组均可显著降低小鼠的校正碳粒廓清
指数,可使血清溶血素含量下降,而山薄荷水
提取液1g/kg组无明显作用。
3 讨论
传统的免疫抑制剂如环磷酰胺、环孢素
A等在器官移植和自身免疫性疾病方面发挥
了相当重要的作用,但这些药物具有选择性
不强,毒副作用大等缺点,而新型化学免疫抑
制剂昂贵的价格限制了其在临床上的广泛应
用 [16-17],而中药免疫抑制剂具有药理作用广
泛,毒副作用小无依赖性等特点[18-20]。故从自
然药物中寻找提取廉价有效的免疫抑制剂成
为制药界的热点[17]。
本实验结果表明,2,4g/kg山薄荷水提取
液能降低胸腺、脾指数,抑制小鼠碳粒廓清率,
表明它们对网状内皮系统吞噬功能具有抑制
作用,这显示出其对非特异性免疫功能的影
响;并且能降低血清溶血素含量和T细胞百分
比,表明其对机体体液免疫、细胞免疫功能均
具有抑制作用,提示山薄荷可能为一种免疫抑
制剂。今后的研究方向是在此基础上提取出它
的有效成份并进行深入研究,并最终开发为一
种临床可用的新型中药免疫抑制剂。由于其低
毒性、低价格和广泛的来源,所以有着较好的
开发前景。
4 参考文献
应用要点:实验结
果表明,2,4g/kg
山薄荷水提取液
能降低胸腺指数、
脾指数,抑制小鼠
碳粒廓清率,表明
它们对网状内皮
系统吞噬功能具
有抑制作用,这显
示出其对非特异
性免疫功能的影
响;并且能降低血
清溶血素含量和
T细胞百分比,表
明其对机体体液
免疫、细胞免疫功
能均具有抑制作
用,提示山薄荷可
能为一种免疫抑
制剂。
相关链接:传统
的免疫抑制剂如
环磷酰胺、环孢
素 A等在器官移
植和自身免疫性
疾病方面发挥了
相 当 重 要 的 作
用,但这些药物
具 有 选 择 性 不
强,毒副作用大
等缺点,而新型
化学免疫抑制剂
昂贵的价格限制
了其在临床上的
广泛应用,而中
药免疫抑制剂具
有 药 理 作 用 广
泛,毒副作用小
无 依 赖 性 等 特
点。故从自然药
物中寻找提取廉
价有效的免疫抑
制剂成为制药界
的热点。
表 1 山薄荷水提取液对小鼠胸腺、脾指数及外周血中 T
淋巴细胞百分比的影响 (x±s,n=10)
组别
4.37±1.69
3.26±1.62
1.66±0.56a
0.74±0.42b
0.53±0.34b
—
1.00
2.00
4.00
0.02
生理盐水组
山薄荷水提取液1g/kg组
山薄荷水提取液2g/kg组
山薄荷水提取液4g/kg组
环磷酰胺组
剂量
(g/kg)
7.18±1.73
5.11±1.36
4.01±1.13a
2.94±0.83b
2.13±0.94b
82.1±8.1
70.9±6.7
65.2±3.5a
60.0±2.7b
52.3±3.2b
脾指数
(mg/g)
胸腺指数
(mg/g)
与生理盐水组比较,aP<0.05,bP<0.01
T淋巴细胞
百分比(%)
表2 山薄荷水提取液对小鼠碳粒廓清率和血清溶血素含
量的影响 (x±s,n=10)
组别
5.69±2.05
4.48±1.49
2.09±0.83
1.30±0.46
生理盐水组
山薄荷水提取液1g/kg组
山薄荷水提取液2g/kg组
山薄荷水提取液4g/kg组
K值(×10-2) α值 半数溶血值
7.71±1.20
5.91±1.03
3.88±0.94a
2.17±0.77b
104.4±22.6
89.5±17.7
79.1±10.6
57.5±8.7b
与生理盐水组比较,aP<0.05,bP<0.01
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2
3
4
5
6
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