全 文 ： 药理药化
收稿日期:2007-05-14;　修订日期:2007-09-10
基金项目:甘肃省中医管理局基金项目(No.2003-GZK-17)
作者简介:安方玉(1977-),女(汉族),甘肃兰州人 ,现为兰州大学基础医
学院在读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事免疫学研究工作.
＊通讯作者简介:马兴铭(1969-), 男(汉族),甘肃庆阳人 , 现任兰州大学
副教授 ,博士学位 ,主要从事中药药理与免疫学研究工作.
砂生槐水提取物对免疫抑制型小鼠免疫功能的影响
安方玉 1 , 刘　英2 , 马兴铭 1, 3＊ , 田卫花 1 , 郭　君 1 , 雒燕萍1, 3
(1.兰州大学基础医学院免疫学研究所 ,甘肃 兰州　730000;
2.甘肃省兰州市肺科医院　730000;　3.甘肃省新药临床前研究重点实验室 ,甘肃兰州　730000)
摘要:目的 研究砂生槐水提取物对免疫抑制型小鼠免疫功能的影响。方法 通过给小鼠腹腔注射环磷酰胺 , 建立免疫
功能抑制模型 , 并灌服砂生槐水提取物 [ 0.6 ～ 2.4 g/(kg· d)] 。以胸脾指数 , B淋巴细胞的增殖 ,抗绵羊红细胞特异抗体
的生成 , 腹腔巨噬细胞的吞噬作用为测定指标。结果 与模型对照组比较 , 砂生槐水提取物 3个剂量组均可提高免疫抑
制小鼠脾脏指数(P<0.01), 可协同 LPS促进免疫抑制小鼠 B淋巴细胞的增殖(P<0.01),高 、中剂量组可促进免疫抑制
模型小鼠抗绵羊红细胞特异抗体的生成(P<0.01, P<0.05), 3个剂量组均能增强免疫抑制小鼠巨噬细胞的吞噬功能(P
<0.05, P<0.01, P<0.01)。 结论 砂生槐水提取物对免疫抑制型小鼠 B淋巴细胞功能和巨噬细胞吞噬功能有增强
作用。
关键词:砂生槐;　水提取物;　免疫抑制;　B淋巴细胞;　巨噬细胞
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)02-0359-02
TheEffectofAqueousExtractsofSophoramoorcroftianaonImmuneFunctioninImmu-
nosuppressiveMiceInducedbyCyclophosphamide
ANFang-yu1 ,LIUYing1 , MAXing-ming1, 3＊ , TIANWei-hua1 , GUOJun1 , LUOYan-ping1, 3
(1.DepartmentofImmunologyofBasicMedicine, LanzhouUniversity730000, China;2.PulmonaryBranchHos-
pitalofLanzhou730000, China;3.KeyLaboratoryofPreclinicalStudyforNewDrugsofGansuProvince,
Lanzhou730000 , China)
Abstract:ObjectiveToexploretheeffectofSophoramoorcroftianaontheimmune-functioninthemodelofimmunosuppres-
sivemice.MethodsThemousemodelofinhibitionwasestablishedinducedbycyclophosphamide.Aftertakenorallytheaqueous
extractsofsophoramoorcroftiana〔0.6～ 2.4g/(kg· d)〕, antagonisticexperimentswereobservedinvivo, thespleenindexand
thymusglandindex, proliferationindexofBlymphocyte, theproductionofsheepredbloodcel(SRBC)specificantibody,
phagocytosisofthephagocyteswereusedasevaluatedindexes.ResultsThelow, middle, highdosesoftheaqueousextractsof
SophoraMoorcroftianacouldsignificantlyimproveimmunefunction, comparedwithmodelgroups, Sophoramoorcroftiana〔0.6 ～
2.4g/(kg· d)〕couldobviouslyincreasethespleenindex;antagonizeinhibitionofimmunologicalfunctioncausedbycyclopho-
hphamide, promoteBlymphocyteproliferation, thephagocytosisofthephagocytes.Sophoramoorcroftiana〔1.2 ～ 2.4g/(kg·
d)〕 couldalsoincreasetheproductionofsheepredbloodcel(SRBC)specificantibody.ConclusionTheaqueousextractsof
Sophoramoorcroftianaseedhasmuchpromotioneffectonimmunityandphagocytosisofthephagocytesinsuppressedmice.
Keywords:AqueousofSophoramoorcroftiana;　Cyclophsphamide;　Immunosuprpression;　Blymphocyte;　Phagocyte
　　砂生槐 Sophoramoorcroftiana又名 “西藏狼牙刺 ”“刺柴” ,豆
科槐属多年生矮灌木 ,其茎尖和托叶硬化为尖长刺 , 为西藏高原
一特有植物种。 在雅鲁藏布江河谷呈大片分布 , 具有极强的抗
旱 、耐瘠薄 、抗风沙等生态适应性和很好的防风固沙 、保持水土功
能 [ 1] 。藏医药记载 [ 2] , 砂生槐多以种子入药 , 味苦性凉 , 消炎解
毒 、催吐 ,主治湿热黄疸 、白喉 、痢疾 、赤巴病 、消化不良 、虫病等 ,
是一种极为宝贵的植物药用资源。本实验首次研究砂生槐水提
取物对免疫抑制型小鼠 B淋巴细胞功能 、腹腔巨噬细胞吞噬功
能等的影响 , 为充分开发其药用价值提供实验依据。
1　材料和方法
1.1　动物与试剂 昆明种小鼠 , 清洁级 , 体重 18 ～ 22 g, 雌雄各
半 , 由兰州大学实验中心提供(合格证:医动字第 14 -005号)。
环磷酰胺(CyclophosphamideCY)由江苏恒瑞医药股份有限公司
提供(批号 06122221);RPMI1640培养基为美国 GIBCO公司产
品;脂多糖(LPS)、噻唑蓝(MTT)购自美国 Sigma公司;小牛血清
为杭州四季清公司产品;砂生槐水提取物由兰州大学基础医学院
免疫学研究所提供。
1.2　方法
1.2.1　建立动物模型及给药 [ 3 , 4] 将昆明种小鼠随机分为 5组 ,
每组 10只。分别为①空白对照组:生理盐水 0.4 ml/(20 g· d)
腹腔注射 ,连续 3d,第 4天给予生理盐水灌胃 0.2 ml/(20g· d),
连续 10d;②模型对照组:环磷酰胺 0.4 ml/(20 g· d)[ 80 mg/
(kg· d)]腹腔注射 ,连续 3 d, 第 4天给予生理盐水 , 用量与给药
天数同上;③药物(炒生槐水提物低 、中 、高剂量)组:环磷酰胺的
剂量用法同上 , 第 4天开始灌服砂生槐子水提取物 0.2 ml/(20 g
· d),剂量分别为 0.6, 1.2, 2.4g/(kg· d), 连续 10d。同时于第
5天和第 9天分别给各组小鼠腹腔注射 10%绵羊红细胞(SRBC)
0.4 ml/(20 g· d)免疫 2次 , 给药结束后次日眼球采血 , 分离血
清并经 56℃30 min灭活备用。同时分离胸腺和脾脏并称量湿
重 , 计算胸 、脾指数 [ 5] , 胸腺指数或脾脏指数 =胸腺或脾脏重量
(mg)/体重(10 g)。
1.2.2　小鼠血清抗绵羊红细胞抗体效价测定 参考文献 [ 6] ,
·359·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.2 时珍国医国药 2008年第 19卷第 2期
血清抗绵羊红细胞抗体效价测定采用直接凝集反应。将分离的血清 加 在
24孔 U型板上 ,用生理盐水对倍稀释 , 每孔加入 1%SRBC0.5 ml, 37℃水
浴 1 h后 ,观察结果 , 以出现明显凝集(++)的最高稀释度作为其凝集效
价。同时用生理盐水作阴性血清对照。
1.2.3　B淋巴细胞增殖反应 小鼠分组及给药方法同上。采用噻唑蓝
(MTT)比色法 [ 7] ,常规制备脾细胞悬液(2×106 /ml),取 100 μl加入 96
孔细胞培养板内。每样本设 8个平行孔 , 其中 4孔加脂多糖(LPS)的完
全培养液(终浓度为 10 mg/L, 100 μl/孔), 4孔则只加完全培养液 100
μl/孔 , 于 37℃, 5%CO2培养箱中培养 68 h, 加 MTT(5 g/L)10 μl/孔 , 振
荡混匀 , 继续培养 4h后加酸化异丙醇 100 μl/孔 ,振荡混匀 , 用酶联免疫
测定仪(DG-3022型)测 OD值(检测波长 578 nm, 630nm为参比波长)。
计算刺激指数 =(实验孔 OD均值 /对照孔 OD均值)。
1.2.4　小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力的检测 小鼠分组及给药方
法同上。参照文献 [ 8, 9]在无菌条件下 ,每只小鼠腹腔注射灭菌生理盐水
10 ml,轻轻按揉腹部 2 ～ 3 min, 抽回腹腔液。用不完全 RPMI1640洗涤
离心后。再用 含 10%小牛血清的 RPMI1640培养液调细胞浓度至 1×
107 /ml, 取 100 μl于 96孔板 , 另加完全 RPMI1640 100μl为空白对照孔 ,
37℃5%CO2培养箱培养 4h, 甩去培养基 ,贴壁细胞即为腹腔巨噬细胞
单层 , 每孔加入 0.1%中性红生理盐水 100 μl, 继续培养 30 min, 弃上清
液 , 用 PBS液洗 2遍 ,每孔加入细胞溶解液(醋酸∶无水乙醇 =1∶1)100
μl,室温下放置过夜。待细胞溶解后 , 于 570nm酶标仪上测吸光度。
1.3　数据处理 采用 SPSS10.0软件的 One-Way方差分析(ANOVA),
最小显著差(LSD)进行统计处理。
2　结果
2.1　砂生槐水提取物对免疫抑制模型小鼠体液免疫功能的影响 小鼠抗
绵羊红细胞抗体效价及胸腺指数和脾脏指数见表 1。 结果显示砂生槐水
提取物可以抵抗环磷酰胺对体液免疫功能的抑制作用 , 与空白对照组比
较 , 砂生槐水提取物组的脾脏指数无统计学差异(P>0.05), 尤其砂生槐
水提取物中 、高剂量组的使脾脏指数恢复为正常水平 , 但对胸腺的影响不
明显(P>0.05)。环磷酰胺能明显抑制小鼠的抗体形成能力(P<0.01),
砂生槐水提取物 3个剂量组均可以促进免疫抑制模型小鼠产生抗体的能
力 , 与环磷酰胺组比较 ,高 、中剂量组小鼠抗体形成能力增强 , 具有显著性
差异(P<0.05或 P<0.01)。表 2显示环磷酰胺组(模型对照组)小鼠在
有无脂多糖(LPS)的刺激下 B淋巴细胞增殖反应均降低 ,有显著性差异;
同时给予砂生槐子水提取物后 , 小鼠 B淋巴细胞的自身增殖和脂多糖
(LPS)诱导的增殖及刺激指数均较环磷酰胺组增高 ,差异有显著性。
表 1　小鼠抗绵羊红细胞抗体效价及胸腺指数和脾脏指数( x±s)
分组 胸腺指数C/mg· (10g)-1
脾脏指数
C/mg· (10 g)-1 抗体效价
空白对照 30.34±10.83 118.92±27.30 1.29±0.20
模型对照 21.13±7.42b 53.34±4.65a 0.48±0.29a
砂生槐水提取物(低) 23.37±6.04 107.58±15.11c 0.60±0.31
砂生槐水提取物(中) 26.79±3.31 117.37±19.81c 0.87±0.36d
砂生槐水提取物(高) 28.49±8.41 124.32±15.09c 0.96±0.42c
　　与空白对照组比较 , aP<0.01 , bP<0.05;与模型对照组比较, cP<0.01, dP<0.05;n=10
表 2　小鼠B淋巴细胞增殖反应及腹腔巨噬细胞吞噬功能( x±s)
分组 巨噬细胞吞功能(A值)
淋巴细胞增殖反应
自增殖
578nm/630nm
刺激增殖
578nm/630nm 刺激指数
空白对照 0.29±0.15 0.34±0.19 0.50±0.33 1.69±0.16
模型对照 0.03±0.01a 0.05±0.03b 0.06±0.07a 0.54±0.30a
砂生槐子提取物(低) 0.11±0.07d 0.26±0.15d 0.45±0.29c 1.09±0.69c
砂生槐子提取物(中) 0.23±0.18c 0.27±0.21d 0.50±0.24c 1.27±0.35c
砂生槐子提取物(高) 0.25±0.17c 0.38±0.14d 0.52±0.22c 1.43±0.38c
　　与空白对照组比较 , aP<0.01, bP<0.05;与模型对照组比较 , cP<0.01, dP<0.05;n=10
2.2　 砂生槐水提取物对免疫抑制模型小鼠巨噬细胞功能的影响 表 2
显示模型对照组小鼠巨噬细胞吞噬中性红能力(A值)减弱(P<0.01),
砂生槐水提取物低 、中 、高剂量组小鼠的巨噬细胞吞噬中性红的能力均较
模型组增强 , 有显著性差异(P<0.05或 P<0.01),但各剂量组相比无显
著性差异(P>0.05)。
3　讨论
在早前研究中 , 崔建芳等 [ 10]用薄层光密度法分析得出结论:砂生槐
种子中至少含有 4种生物碱 , 即 1.64%氧化苦参碱 ,
0.5%氧化槐果碱 , 0.172%苦参碱 , 0.005%槐果碱。 研
究证明上述生物碱具有调节 Bcl-2蛋白表达 、抗肿瘤 、
抑菌 、抑病毒 、抗心率失常 、正性肌力 、抗缺氧 、扩血管 、降
血脂 、调节免疫功能等多种 药理作用 [ 11 ～ 14] 。马兴铭
等 [ 15 ～ 17]也证明砂生槐生物碱具有抑菌 , 抗寄生虫 、抗肿
瘤活性 , 因此 , 特有植物砂生槐具有重要的药物开发
价值。
本实验首次研究砂生槐水提取物对免疫抑制型小鼠
免疫功能的影响。从实验结果可以看出 , 砂生槐水提取
物 [ 0.6 ～ 2.4 g/(kg· d)]均能在不同程度上提高免疫抑
制模型小鼠的 B淋巴细胞产生抗体和体外增殖能力 , 不
同剂量的砂生槐水提取物对免疫抑制小鼠的脾重量均有
不同程度的提高。高剂量组淋巴细胞的抗体产生能力 、
增殖能力与对照组相近 , 表明该药在高剂量时可将受抑
制小鼠的体液免疫功能上调接近正常水平 ,促进 B淋巴
细胞产生抗绵羊红细胞抗体 , 因此 ,砂生槐水提取物能够
对抗环磷酰胺对体液免疫功能的抑制作用 , 提示砂生槐
水提取物对免疫功能低下者的 B淋巴细胞功能有增强
作用通过进一步观察砂生槐水提取物对免疫抑制型小鼠
腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。发现此药对免疫抑制小
鼠的腹腔巨噬细胞的活性有显著的提高作用 ,其细胞活
性的提高率与药物剂量也存在依赖关系 , 且均有统计学
意义 , 提示此药物对免疫功能低下机体的腹腔巨噬细胞
吞噬功也有显著的提高作用。
本实验从体液免疫和腹腔巨噬细胞吞噬功能两方面
证明 , 砂生槐水提取物对免疫抑制型小鼠的免疫功能具
有明显的增强作用。通常情况下 , 机体处于一种稳定状
态 , 阴阳调和 ,当这种平衡被破坏 , 机体就会产生疾病 , 即
失稳状态。本实验证明 ,砂生槐水提取物对失稳状态下
的机体免疫功能降低状态有显著的提高作用 ,甚至可使
其恢复至正常状态 , 体现了中药的调节效应。但是 ,砂生
槐水提取物是一种粗提物 , 这种粗提物中具体含有哪些
有效成分 , 以及何种成分对免疫抑制模型动物的免疫功
能有增强作用 , 尚需对该提取物进行分离纯化后进一步
研究。
参考文献:
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 2期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.2　
临床报道
咪唑安定 ———芬太尼辅助硬膜外麻醉
李新宇 , 苏　亮 , 邵忠新
(中国人民解放军 208医院 ,吉林 长春 　130000)
关键词:咪唑安定;　芬太尼;　硬膜外麻醉
中图分类号:R26　　文献标识码:C　　文章编号:1008-0805(2008)02-0361-01
　　硬膜外麻醉中病人常有紧张 、焦虑 、内脏牵拉不适等不良反
应 , 严重的甚至出现短暂的难以忍受的强烈的刺激 , 给病人带来
了严重的心理压力和恐惧感。本研究通过观察咪唑安定———芬
太尼与度冷丁———氟哌利多辅助硬膜外麻醉中的镇静作用 ,探讨
一种较为理想的辅助硬膜外麻醉方法。
1　一般资料
选择 ASAI-II级硬膜外麻醉下行下腹及下肢手术病人 60
例。男 25例 , 女 35例。年龄 25 ～ 60岁 , 平均年龄 41岁。将病
人随机分为 A、B两组 ,每组 30例。所有病人均排除有中枢神经
系统 、心血管系统 、内分泌系统疾病。各组病人年龄 、体重 、性别
及 ASA分级比较无显著意义(P>0.05)。
2　方法
术前 30 min肌注苯巴比妥钠 0.1 g, 入室后开放静脉通道 ,
行硬膜外穿刺置管。全部病例均于硬膜外阻滞平面确定 ,无明显
呼吸抑制及血压下降 , 手术开始前 5 ～ 10 min静脉注入辅助用
药。 A组静脉推注咪唑安定 0.06 mg/kg+芬太尼 0.75 μg/kg;B
组:度冷丁 1mg/kg+氟哌利多 0.05 mg/kg。所有病人手术过程
均给面罩吸氧 。
2.1　评估指标 镇静催眠效果评分采用根据 OAA/C(警觉 /镇
静)评分法 , 即将清醒至熟睡摇肩无应分为 5级(1级为深睡 , 2
级为浅睡 , 3级睡 , 4级基本清醒 , 5级完全清醒);焦虑程度(按
VAVT/SAI)评分:焦虑不安 2分 , 稍有不安 1分 , 无焦虑不安 0
分。术后 24h随访病人对麻醉穿刺及手术过程记忆情况 。
2.2　观察指标 监测并记录注药后 10, 20, 30minMPA, HR, SpO2
的变化情况 , 对术中 、术后镇静状态进行评估。术后 24 h随访病
人对麻醉穿刺及手术过程记忆情况。本组资料的统计采用资料
对比的 t检验和 χ2检验。
3　结果
A组病人用药前与用药后 10, 20, 30 minMPA、HR均无明显
变化(P>0.05)。 B组则于探查 、牵拉内脏时 MPA, HR下降显著
(P<0.01)。 A组未见 SpO
2
下降 , B组有 4例 SpO
2
降至 90%以
下 , 经面罩吸氧后逐渐好转。两组病人除 B组有 3例出现轻度恶
收稿日期:2007-07-09;　修订日期:2007-08-31
作者简介:李新宇 (1974-),男(汉族),吉林农安人 ,现任中国人民解放军
208医院主治医师 ,硕士学位 ,主要从事临床麻醉学工作.
心外 , 其余患者均未有其他不良反应。
A组病人用药后 10, 20, 30 min镇静效果略好于 B组 , 但无
统计学意义(P>0.05), 抗焦虑效果 A组较 B组明显增强 , 用药
后 10, 20, 30 min均有统计学意义(P<0.05)。结果见表 1 ～ 2。
表 1　用药后不同时间镇静度( x±s)
组别 10min 20min 30min
A 4.6±0.4 3.8±1.2 4.2±1.1
B 5.0±0.1 4.6±0.9 4.6±0.5
表 2　用药后不同时间焦虑度评分结果
组别 10min 20min 30min
A 0.6±0.5 0.5±0.4 0.4±0.5
B 1.0±0.3＊ 0.9±0.3＊ 0.8±0.9＊
　　与 A组比较 , ＊P<0.05
4　讨论
手术病人常由于焦虑和恐惧造成交感神经兴奋 ,使心率增快,
血压升高 ,并加重病人的心理负担和手术恐惧。 传统的度氟合剂
早已被广泛应用于临床 ,虽有一定效果 ,但并不理想。咪唑安定是
一种水溶性的苯二氮卓类药物 , 是一种抗焦虑和镇静作用良好的
短效药 ,对呼吸和循环功能影响小, 不良反应少 ,安全性能高, 有良
好的顺行性遗忘作用 ,但无镇痛作用。芬太尼通过中枢神经系统
的阿片受体所介导 ,选择性的抑制某些神经冲动的传递 , 解除机体
对疼痛的感受和心理行为反应 , 其特点为起效快 ,阵痛作用强 , 增
加病人心血管稳定性。两种药合用可以起到优势互补的作用。从
观察结果看 ,咪唑安定 +芬太尼合剂对循环、呼吸影响轻微 , 虽有
一定抑制作用 , 但较之度氟合剂抑制明显减少, 两者统计学上有显
著意义。理想的硬膜外辅助用药应达到镇静适度 , 基本消除内脏
牵拉反应。本研究咪唑安定 +芬太尼作为辅助用药与度氟合剂相
比 , 术中镇静适度 ,对抗内脏牵拉反应效果更确切 , 对一些镇痛不
完全 ,牵拉反应重的硬膜外麻醉的病人尤为适用。
本研究提示 , 0.06 mg/kg咪唑安定 +0.75 μg/kg芬太尼有
良好的镇静催眠及镇痛作用 ,可消除椎管内麻醉病人的焦虑与恐
惧 , 使其在睡眠中安度手术 , 术后遗忘效果满意 ,对病人心理健康
和生理健康有良好的保护作用 ,对提高医疗质量和服务质量具有
十分重要的意义。
(上接第 360页)
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.2 时珍国医国药 2008年第 19卷第 2期