全 文 ：收稿日期：2010-06-18
*基金项目：国家自然科学基金“壮药狗肝菜中多糖抗乙肝作用及其化学结构研究”（No：30860393）
[通信作者] 张小玲，Tel：0773-5895291；E-mail：rose2006@glmc.edu.cn
狗肝菜 [Dicliptera chinensis（L.）Nees.]是爵床科
（Acanthaceae）华九头狮子草属（Dicliptera），全草味
甘、微苦且性寒，归心、肝及肺经，具有清热、凉血、利
湿、解毒、生津和利尿等功效[1-2]。《中华人民共和国
药典（2005版）》曾收录，拟定其来源为爵床科植物
狗肝菜的干燥全草 [1]。狗肝菜为广西民间药食两用
的中草药，也是壮族地区常用壮药，主要含有多糖、
有机酸及氨基酸等物质 [2]。多糖类中药具有免疫调
节作用，已广泛用于肝炎和肿瘤等疾病[3]。本研究通
过狗肝菜多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响，初
步探讨其免疫调节作用。
文章编号： 1005-8982（2011）04-0393-03
·论著·
狗肝菜多糖对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响*
朱 华 1，张小玲 2，张可峰 3，沈 洁 2
（1 .广西中医学院 中药鉴定学教研室，广西 南宁 530001；2.桂林医学院 生理学教研室，
广西 桂林 5410012；3. 桂林医学院 中药鉴定学教研室，广西 桂林 541001）
摘要：目的 研究狗肝菜多糖对小鼠免疫功能的影响。方法 建立环磷酰胺（CTX）经直肠给药致免疫低
下小鼠模型，测定胸腺和脾脏重量并计算脏器系数，碳粒廓清法测定单核巨噬细胞吞噬功能，比色法测定血清
溶血素含量，MTT法测定小鼠脾脏淋巴细胞增殖情况。结果 狗肝菜多糖能对抗环磷酰胺引起的小鼠脾萎缩
和胸腺萎缩，提高免疫抑制小鼠对碳粒的吞噬作用，且对小鼠血清溶血素的生成有较强的促进作用，能促进小
鼠脾脏淋巴细胞的增殖。结论 狗肝菜多糖能增强免疫抑制小鼠的免疫功能。
关键词：狗肝菜多糖；免疫抑制；环磷酰胺；免疫功能
中图分类号：R-332 文献标识码：A
Effect of the dicliptera chinensis polysaccharides on
immunity in mice*
ZHU Hua1, ZHANG Xiao-ling2, ZHANG Ke-feng3, SHEN Jie2
(1.Department of Authentication of Chinese Medicine, Guangxi Traditional Chinese Medical
University, Nanning, Guangxi 530001, P.R.China; 2.Department of Physiology, Guilin Medical
College, Guilin, Guangxi 541001, P.R.China; 3.Department of Authentication of Chinese Medicine,
Guilin Medical College, Guilin, Guangxi 541001, P.R.China)
Abstract:【Objective】To investigate the effection of Dicliptera chinensis polysaccharides on immunity in mice.
【Methods】A immunity suppression model was induced by cyclophosphamide (CTX) in Kunming mice through sub－
cutaneous injection. Splenic index and thymic index were evaluated by wet weight of spleen and thymus; The mono－
cyte/macrophage phagocytosis were assessed by clearance of ink; Serum hemolysin was detected by colorimetric
method; Lymphocytes proliferation rate was assessed by MTT method.【Results】The polysaccharides of dicliptera
chinensis could rescue the atrophy of spleen and thymus induced by CTX, speed the clearance of ink, promote the
secretion of hemolysin and increase the proliferation rate of splenic lymphocytes in immunity -suppressed mice.
【Conclusions】The polysaccharides of dicliptera chinensis could rescue the immunity function of immune-sup－
pressed mice.
Key words: dicliptera chinensis polysaccharide; immunity suppression; cyclophosphamide; immunity
第 21 卷第 4期 中国现代医学杂志 Vol. 21 No.4
2011 年 2 月 China Journal of Modern Medicine Feb. 2010
393· ·
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 昆明种小鼠，体重（20±2）g，雌雄
各半，豚鼠，300 g 左右，雄性，均由桂林医学院实验
动物中心提供，合格证号：SCXK桂 2007-0001。
1.1.2 药物与试剂 狗肝菜多糖提取方法见参考文
献[4]。环磷酰胺（CTX，山东北大高科华泰制药有限
公司，批号：0909298）；印度墨汁（德国 Chroma产
品），以 0.8%明胶稀释 5倍使用；RPMI-1640（GIB-
CO产品）；MTT（Sigma产品）；PHA（Sigma产品）；绵
羊红细胞（SRBC）均由本校实验动物中心提供。
1.1.3 主要仪器及设备 电子天平（TP-4101，Den-
ver）、离心机（型号 TDL-4，上海安亭科学仪器厂）、
分光光度计（型号 722型，上海第三分析仪器厂）、
CO2培养箱（型号 MCO-15AC，日本 SANYO），酶标
仪（型号 ELx800TM，美国 BioTek）。
1.2 方法
1.2.1 分组给药与建立免疫低下模型 将小鼠按体
质量随机分为 5组，每组 8只：正常对照组、模型组
和狗肝菜多糖高、中及低剂量组。狗肝菜多糖高、中
及低剂量组分别以 900、600和 300 mg/kg灌胃给药，
每日 1次，连续 12 d，正常对照组和模型组以等量生
理盐水灌胃。给药后 9 d，除正常对照组外，其余各组
小鼠均直肠给药 CTX 80 mg/kg，连续 3 d。建立
CTX 致小鼠免疫功能低下模型。
1.2.2 单核巨噬细胞吞噬活性的测定 照“1.2.1”项
的方法，于末次给药 2 h 后尾静脉注入墨汁 0.02
mL/g，用毛细玻璃吸管于 1 min和 5 min从小鼠眼眶
后静脉丛取血 20μL，置于 2 mL 0.1%碳酸氢钠溶
液中。722分光光度计检测波长 680 nm比色。最后
将小鼠颈椎脱臼处死，分别称取肝、脾重量[5]。按公
式计算廓清指数（K 值）=[（lgOD1-lgOD5）/（t5-t1）]及
吞噬指数（α值）=[ K3姨 ×小鼠体重 /（肝重量 +脾
重量）]。
1.2.3 血清溶血素含量测定及免疫器官指数的测定
按照“1.2.1”项方法，于第 9天给药后 1 h用 20%的
SRBC 免疫小鼠，腹腔注射给药 0.2 mL/只。末次给
药后 2 h眼眶取血制备血清。按文献[6]方法测定溶
血素含量，取血后处死小鼠，取脾脏、胸腺称湿重并
计算脏器指数。脏器指数 =脾脏或胸腺的重量（mg）
/小鼠体重（g）。
1.2.4 小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验 将 CTX 致免
疫功能低下的小鼠直肠给药 CTX 80 mg/（kg·d），每
天 1次，连续 3 d，放血致死[7-9]。常规制备脾细胞悬
液。用 RPMI-1640调整细胞浓度至 1×107/mL，接种
于 96孔培养板，每孔加入细胞悬液 100μL，加入不
同浓度的狗肝菜多糖（表 3）；PHA活化处理的各组
加入终浓度为 12.5μg/mL的 PHA，各组处理均作 6
个平行孔，以加入同体积的 RPMI-1640培养液或含
同浓度 PHA的 RPMI-1640 培养液为空白对照组。
将培养板置于 37℃、5%二氧化碳和饱和湿度的培
养箱中培养 68 h，加入 20 mL MTT（5 g/L）继续培
养 4 h，以 MTT法用酶标仪测定 A570 nm值，检测增殖
情况。各组比较时将 A570 nm值按下式转化为淋巴细
胞增殖率：淋巴细胞增殖率 =A 样品 /A 对照×100%。
1.3 统计学处理
用 SPSS11.5统计软件包进行统计分析，计量资
料以均数±标准差（x±s）表示，两组间的比较采用 t
检验，多组间比较采用方差分析，以 P <0.05为差异
具有显著性。
2 结果
2.1 狗肝菜多糖对小鼠廓清指数的影响
CTX处理小鼠（模型组）的廓清指数和吞噬指
数与正常对照组比较明显降低（P <0.05）；与 CTX导
致的免疫抑制组（模型组）比较，高剂量狗肝菜多糖
处理组吞噬指数及廓清指数明显升高（P <0.05），同
时中剂量狗肝菜多糖处理组吞噬指数升高有显著性
（P <0.05），详见表 1。
表 1 狗肝菜多糖对小鼠廓清指数和吞噬指数的影响
（n =8，x±s）
注：覮与模型组比较，P <0.05；K值：廓清指数，α值：吞噬指数
2.2 狗肝菜多糖对溶血素及小鼠肝脾指数的影响
由表 2 可见，CTX 构建的免疫抑制组（模型
组），其溶血素含量及脾指数、胸腺指数比正常对照
组降低（P <0.01）。与免疫抑制组（模型组）比较，高
剂量狗肝菜多糖处理组的溶血素含量明显升高（P
<0.01），高剂量狗肝菜多糖处理组的脾脏指数明显
升高（P <0.01），而高、中剂量狗肝菜多糖处理组胸
分组 K值 α值
正常对照组 0.0736±0.0497覮 6.82±1.55覮
狗肝菜多糖高剂量组 0.0612±0.0334覮 7.49±1.41覮
狗肝菜多糖中剂量组 0.0358±0.0315 7.32±1.90覮
狗肝菜多糖低剂量组 0.0344±0.0395 6.02±2.35
模型组 0.0295±0.0227 5.46±1.38
中国现代医学杂志 第 21 卷
394· ·
第 4期 朱 华，等：狗肝菜多糖对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响
表 3 狗肝菜多糖对小鼠体外培养的脾脏淋巴细胞增殖的影响 （n =6，x±s）
注：1）与对照组比较，P <0.05；2）与对照组比较，P <0.01
表 2 狗肝菜多糖对小鼠溶血素及肝脾指数的影响
（n =8，x±s）
注：覮与模型组比较，P <0.01
腺指数均明显升高（P <0.01）。
2.3 狗肝菜多糖对小鼠肝脾淋巴细胞增殖率的影
响
狗肝菜多糖高、中及低剂量组均能提高未活化
免疫抑制小鼠脾脏淋巴细胞的增殖（高、中剂量组，
P <0.01；低剂量组，P <0.05）。狗肝菜多糖高、中剂量
组能提高 PHA活化的免疫抑制小鼠脾脏淋巴细胞
的增殖（P <0.05）。见表 3。
分组 胸腺指数 /（mg/g）
正常对照组 2.81±0.35覮
狗肝菜多糖高剂量组 2.17±0.49覮
狗肝菜多糖中剂量组 1.15±0.43覮
狗肝菜多糖低剂量组 1.02±0.15
模型组 0.97±0.27
溶血素 脾脏指数 /（mg/g）
245.37±58.20覮 3.93±1.11覮
173.88±47.59覮 2.53±0.75覮
131.80±44.54 2.08±0.84
108.60±47.90 1.31±0.60
93.58±40.55 1.46±0.34
分组
脾淋巴细胞增殖率 /%
对照组 -
狗肝菜多糖高剂量 111.01
狗肝菜多糖中剂量 110.79
狗肝菜多糖低剂量 105.97
狗肝菜多糖终浓
度 /（μg/mL）
无 PHA PHA（12.5μg/mL）
吸光值 吸光值
- 0.3383±0.0163 - 0.3633±0.0285
200 0.3825±0.01692） 113.06 0.4033±0.02201）
100 0.3725±0.02202） 110.11 0.4025±0.03211）
50 0.3558±0.01061） 105.17 0.3850±0.0138
脾淋巴细胞增殖率 /%
3 讨论
机体免疫功能包括非特异性免疫与特异性免疫
两大方面。胸腺和脾脏是动物体内主要的免疫器官，
其重量及器官指数反映了免疫器官的发育状况，能
够较为客观地反映机体非特异性免疫能力。巨噬细
胞不仅参与机体的特异性免疫反应和非特异性免疫
反应，而且具有提呈抗原、吞噬消化以及分泌多种细
胞因子的重要功能。另外，淋巴细胞的增殖能力反映
了淋巴细胞对于免疫刺激产生增殖和转化的能力，
血清溶血素水平的形成能力反映了机体的特异性体
液免疫功能。
多糖类化合物作为免疫调节剂不但能激活淋巴
细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞等免疫细胞，还能激
活补体，促进细胞因子生成等，通过多途径对免疫系
统发挥调节作用[9]。本研究发现，狗肝菜多糖明显地
增加免疫抑制小鼠免疫器官的重量及免疫器官指
数，可提高小鼠巨噬细胞的吞噬功能，促进小鼠溶血
素的抗体生成，增加脾淋巴细胞的增殖率。以上结果
表明，狗肝菜多糖对机体的细胞免疫、体液免疫和非
特异性免疫均有明显的免疫增强作用，为以后进行
更深入的临床研究提供了实验依据。
参 考 文 献：
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（刘 刚，王吉伟 编辑）
有研究[13-14]显示，EMS1 基因扩增或 EMS1蛋白
过表达与肿瘤临床 TNM分期、肿瘤大小和组织分化
程度也具有显著相关性，其机制尚不十分明确。笔者
分析这可能是由于不同器官肿瘤的组织特异性以及
EMS1蛋白表达水平不同所致。EMS1蛋白不能使新
生肿瘤的成瘤能力增强[15]，提示其主要参与肿瘤中
晚期的侵袭进展“事件”。这与本研究观察到的
EMS1蛋白主要与食管鳞癌的侵袭、浸润及淋巴结转
移有显著相关性的情况一致。
综上所述，EMS1 蛋白与食管鳞癌的浸润深度、
淋巴结转移及肿瘤临床 TNM分期密切相关，而与患
者的年龄、性别、肿瘤大小及组织分化程度无关，
EMS1 蛋白可能是判断食管鳞癌患者的临床预后指
标之一。研发针对包括 EMS1蛋白在内的细胞肌动
蛋白骨架成分的药物，抑制肿瘤的侵袭转移，将会使
食管鳞癌患者受益。
参 考 文 献：
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（谭 亮 编辑）
第 4期 宋 珑，等：EMS1 蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义
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