全 文 ：天然产物研究与开发 NatProdResDev2009, 21:477-479
文章编号:1001-6880(2009)03-0477-03
　
　
　收稿日期:2007-10-10　　　接受日期:2007-12-05
　基金项目:甘肃省中医管理局基金项目(2003-GZK-17)
＊通讯作者 E-mail:mingxm@163.com
砂生槐水提取物对免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响
田卫花 1, 3 ,马兴铭 1, 2＊ ,刘　英 4 ,安方玉 1 ,郭　君 1 ,雒艳萍 1
1兰州大学基础医学院免疫学研究所;2甘肃省新药临床前研究重点实验室 ,兰州 730000;
3甘肃省中医药研究所 ,兰州 730050;4兰州市肺科医院 ,兰州 730046
摘　要:探讨藏药砂生槐水提取物对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。通过小鼠腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑
制动物模型 , 应用砂生槐水提取物对免疫抑制小鼠进行治疗 , 采用 MTT比色法检测免疫抑制小鼠 T淋巴细胞增
殖和放免法测定其血清 IL-2和 TNF-α水平。结果表明:与模型对照组比较 ,砂生槐水提取物三个剂量组均可协
同 ConA促进免疫抑制小鼠 T淋巴细胞的增殖(P<0.01),同时提高免疫抑制小鼠血清 IL-2、TNF-α的水平 ,尤
其 2.4 g/kg· d剂量组的 IL-2、TNF-α水平升高较为明显(P<0.05)。提示砂生槐水提取物可以增强免疫抑制
小鼠的 T细胞免疫功能。
关键词:砂生槐;免疫抑制;淋巴细胞;细胞因子
中图分类号:R285.5;Q949.751.9 文献标识码:A
EfectsofAqueousExtractsfromSophoramoorcroftianaonCelular
ImmunologicalFunctionsintheImmunosuppressiveMice
TIANWei-hua1, 3 , MAXing-ming1, 2＊ , LIUYing4 , ANFang-yu1 , GUOJun1 , LUOYan-ping1
1InstituteofImmunology, SchoolofBasicMedicine, LanzhouUniversity;2KeyLaboratoryof
PreclinicalStudyforNewDrugsofGansuProvince, Lanzhou730000 , China;3InstitateofChinese
MedicineofGansuProvince, Lanzhou730050 , China;4LanzhouLungBranchHospital, Lanzhou730046 , China
Abstract:ThispaperstudiedtheefectsofaqueousextractsfromSophoramoorcroftianaonimmunityfunctionsintheim-
munosuppressivemicebydifferentmethods.Immunosuppressiveanimalmodelwasestablishedbyinjectingcyclophos-
phamide(80 mg/kg· dCY)intotheabdominalcavityofmice.Allimmunosuppressivemiceweretreatedwithaqueous
extractsfromSophoramoorcroftiana.WedetectedmultiplicationofTlymphocytesintheimmunosuppressivemiceby
MTTmethodanddetectedthelevelofIL-2, TNF-αbyradioimmunoassay.Comparedwiththemodelcomparisongroup, a-
queousextractsfromSophoramoorcroftianaobviouslyincreasedthemultiplicationofTlymphocytesintheimmunosup-
pressivemice(P<0.01)aswelasthelevelofIL-2 andTNF-α, especiallyinthe2.4 g/kg· ddosegroup(P<
0.05).ItwasindicatedthataqueousextractsfromSophoramoorcroftianacouldevidentlyimprovetheimmunological
functionsofTlymphocytesinCY-inducedimmunosuppressivemice.
Keywords:Sophoramoorcroftiana;immunosuppression;lymphocyte;cytokine
　　砂生槐(Sophoramoorcroftiana)又名 “西藏狼牙
刺 ”, “刺柴 ”,豆科槐属。多年生矮灌木 ,其茎尖和
托叶化为尖长刺 ,产于西藏波密 、拉萨 、米林等地 ,为
西藏高原一特有植物种 ,具有极强的抗旱 、耐瘠薄 、
抗风沙等生态适应性和很好的放风固沙 ,保持水土
的功能 [ 1] 。在雅鲁藏布江河谷呈大片分布。藏医
药记载 [ 2]砂生槐多以种子入药 ,味苦性凉 ,清热解
毒 、催吐 ,主治湿热 、黄疸 、白喉 、痢疾 、赤巴病 、消化
不良 、虫病等 ,是一种极为宝贵的植物药用资源。为
了充分开发其药用价值 ,本文首次用砂生槐水提取
物研究其对免疫抑制小鼠 T细胞功能的影响 。
1　材料与方法
1.1　动物与试剂
清洁级昆明种小鼠(合格证:医动字第 14-005
号),兰州大学医学实验动物中心提供 , 6 ～ 8周龄 ,
体重 20 ～ 24 g,雌雄各半。砂生槐水提取物由兰州
大学基础医学院免疫学研究所提供。注射用环磷酰
胺(Cyclophosphamide, CY, 江苏恒瑞医药股份有限
DOI :10.16333/j.1001-6880.2009.03.029
公司 ,批号:06050821);RPMI-1640粉剂 (美国 In-
vitrogen公司);刀豆蛋白(ConA,美国 Sigma公司);
四氮噻唑蓝(MTT)、十二烷基硫代硫酸钠(SDS)(上
海生工生物工程有限公司 );IL-2放免试剂盒和
TNF-α放免试剂盒(解放军总医院科技开发中心放
免所)。
1.2　免疫抑制模型建立与给药 [ 3 , 4]
昆明种小鼠随机分为 5组 ,每组 10只 。分别为
①正常对照组:正常对照组腹腔注射生理盐水每天
1次 ,连续 3 d,之后给予生理盐水灌胃 0.2 mL/d·
次 ,连续 10d;②模型对照组:腹腔注射环磷酰胺 80
mg/kg·d,连续 3 d,之后给予生理盐水 ,用量与给
药天数同正常对照组;③药物组:环磷酰胺的剂量与
给药天数同模型对照组 ,之后灌服砂生槐水提取物 ,
剂量分别为 0.6、1.2、2.4 g/kg·d,连续 10d。
1.3　MTT比色法 [ 5, 6]
末次给药后第三天处死小鼠 ,取脾脏制备脾细
胞悬液 ,培养于 RPMI-1640完全细胞培养液中 (含
100mL/L灭活小牛血清 , L-谷氨酰胺 2 mmol/L,青
霉素和链霉素各 100 IU/L),以 2 ×106个 /mL的浓
度接种于 96孔塑料培养板 ,每孔 100 μL。设阴性
对照组(不加 ConA), ConA组(每孔终浓度 5 μg/
mL),每组 4个复孔 , 并设调零孔(每孔加 RPMI-
1640全培养液 100 μL)。置 37 ℃ 50 mL/LCO2饱
和湿度的培养箱(美国 Shil公司)中培养 72h,实验
终止前 4 h每孔加入 MTT液 10 μL,孵育结束时每
孔加 SDS100 μL,过夜 ,用 318-MC型酶联免疫检测
仪(上海三科仪器有限公司)于 578 nm波长(设 630
nm为参比波长)处测定各孔的 OD值并计算刺激指
数 ,刺激指数 =OD实验孔 /OD对照孔 。
1.4　IL-2, TNF-α含量检测
于末次给药后第三天 ,将各组小鼠乙醚麻醉后
固定 ,剪开上肢腋下皮肤 ,从腋动脉处取血 ,室温下
放置 1 h,离心 2000r/min×10 min,分离血清 ,按照
试剂盒说明进行操作 ,智能放免测定仪 SN-695B型
(上海原子能研究所日环仪器厂)测定血清中 IL-2,
TNF-α的含量。
1.5　统计学方法
数据以 x±s表示。采用 SPSS10.0 forWIN-
DOWS软件进行方差分析 ,采用 LSD检验 ,以 P<
0.05作为具有统计学意义的标准 。
2　结果
2.1　对 T淋巴细胞增殖的影响
与模型对照组比较 ,在有 ConA刺激下 ,药物组
T细胞增殖反应均增高 ,其中 1.2、2.4 g/kg·d剂量
组 T细胞增殖反应均增高尤为明显(P<0.05), 2.4
g/kg·d剂量药物组的 T细胞增殖指数高达 1.58±
0.95;药物组之间比较结果均无统计学差异 (P>
0.05)(表 1)。
表 1　砂生槐水提取物对免疫抑制小鼠 T淋巴细胞增殖的影响 (x±s, n=10)
Table1　EfectofaqueousextractsfromSophoramoorcroftianaonTlymphocyticfunctionintheimmunosuppressivemice(x±s, n=10)
分组
Group
自增殖(OD:578nm)
Selfproliferation
刺激增殖(OD:578nm)
ConAexcitedproliferation
刺激指数
Excitationindex
空白对照组 0.64±0.23 0.82±0.17 1.52±0.82
模型对照组 0.35±0.14 0.47±0.22 1.41±0.59
砂生槐水提取物
0.6g/kg· d 0.45±0.22 0.57±0.24 1.37±0.51
1.2g/kg· d 0.48±0.16＊ 0.66±0.23＊＊ 1.51±0.72
2.4g/kg· d 0.52±0.20＊＊ 0.69±0.23＊＊ 1.58±0.95
　　注:与模型对照组比较:＊P<0.05, ＊＊P<0.01。 Note:Comparedwiththemodelcomparisongroup＊P<0.05, ＊＊P<0.01.
2.2　对 IL-2和 TNF-α含量的影响
与模型对照组比较 ,砂生槐水提取物 2.4 g/kg
· d剂量组有统计学意义(P<0.05),砂生槐水提
取物三个剂量组均提高免疫抑制小鼠血清 TNF-α
的水平趋势 ,但与对照组比较无统计学意义(P>
0.05)(表 2)。
3　讨论
　　在早前研究中 ,崔建芳等[ 7]用薄层光密度法分
析得出以下结论:砂生槐种子中至少含有 4种生物
碱 ,即氧化苦参碱 ,氧化槐果碱 ,苦参碱 ,槐果碱。研
究证明上述生物碱具有调节 Bcl-2蛋白表达 ,抗肿
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表 2　砂生槐水提取物对免疫抑制小鼠血清 IL-2、TNF-α的
水平(x±s, n=10)
Table2　EfectofaqueousextractsfromSophoramoorcroftiana
onIL-2, TNF-αlevelintheimmunosuppressivemice
(x±s, n=10)
Group IL-2(ng/mL) TNF-α(ng/mL)
空白对照组 6.09±1.21 1.78±1.22
模型对照组 2.71±0.48 1.39±0.76
砂生槐水提取物
0.6g/kg· d 3.92±1.65 1.50±0.88
1.2g/kg· d 4.18±1.73 1.55±0.97
2.4g/kg· d 4.75±2.38＊ 1.63±0.95
　　注:与模型对照组比较 , ＊P<0.05。 Note:Comparedwiththe
modelcomparisongroup, ＊P<0.05.
瘤 ,抑菌 、抑病毒 、抗心率失常 、正性肌力 、抗缺氧 、扩
血管 、降血脂 ,调节免疫功能等多种 药理作用 。马
兴铭等 [ 8-10]也证明砂生槐生物碱具有抑菌 ,抗寄生
虫 、抗肿瘤活性 ,因此 ,特有植物砂生槐具有重要的
药物开发价值。
本实验首次研究砂生槐水提取物对免疫抑制型
小鼠细胞免疫功能的影响 ,用 MTT比色法通过测定
细胞线粒体能量代谢水平间接地反映 T细胞增殖
情况 ,实验结果表明:砂生槐水提取物可协同 ConA
促进免疫抑制小鼠 T淋巴细胞的增殖 ,中 、高剂量
的砂生槐水提取物对免疫抑制小鼠 T细胞增殖的
效应较为明显。
IL-2主要由活化的 T细胞产生 ,由 133个氨基
酸组成 ,分子量 15 kD。其主要生物活性是促进 T
淋巴细胞和 NK细胞的增殖 ,促进 B细胞分化和增
殖 ,促进抗体生成等 , IL-2在机体免疫应答 、免疫调
节和抗肿瘤免疫中具有重要作用。本实验结果表明
砂生槐水提取物能促进 T淋巴细胞产生 IL-2,尤其
2.4g/kg· d剂量的砂生槐水提取物能够明显对抗
环磷酰胺对 T细胞免疫功能的抑制(P<0.05),从
而促进 T淋巴细胞的活化 , 提高细胞免疫功能 。
TNF-α是由巨噬细胞和单核细胞分泌的一种重要的
细胞因子。具有多种生物学效应 ,主要是介导抗肿
瘤及调节机体的免疫功能 ,并且也参与炎症病变的
多方面病理变化 。本实验结果表明砂生槐水提取物
对免疫抑制小鼠血清 TNF-α含量有所提高 ,说明砂
生槐水提取物对免疫抑制小鼠非特异性免疫细胞的
功能有一定的上调节作用 。
因此 ,砂生槐水提取物能提高免疫抑制模型小
鼠的 T淋巴细胞增殖和产生细胞因子的能力 ,是一
种潜在的细胞免疫调节剂。然而 ,砂生槐水提取物
是通过何种机制促进 T细胞活化和产生细胞因子?
是那些有效成分发挥作用? 有待对该提取物进行分
离纯化后进一步研究。
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479Vol.21 　　　　　　田卫花等:砂生槐水提取物对免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响