全 文 ：解粗品为宜 , 5倍量时溶解不充分 , 水量过大造成后处理溶
液体积过大 , 使产品有一部分溶解在水中 , 造成得率下降 , 由
图知 6倍量水时得率最高。
表 2 L16(43)实验方案及结果
实验号 A水的用量
B
碱度(pH值)
C
酸度(pH值)
得率
/%
1 1∶5 8.5 1 0.813
2 1∶5 9.5 2 0.872
3 1∶5 10.5 3 0.846
4 1∶5 11.5 4 0.765
5 1∶6 8.5 2 0.903
6 1∶6 9.5 1 0.922
7 1∶6 10.5 4 0.881
8 1∶6 11.5 3 0.864
9 1∶7 8.5 3 0.823
10 1∶7 9.5 4 0.786
11 1∶7 10.5 1 0.897
12 1∶7 11.5 2 0.908
13 1∶8 8.5 4 0.788
14 1∶8 9.5 3 0.824
15 1∶8 10.5 2 0.886
16 1∶8 11.5 1 0.862
K1 3.28 3.31 3.48
K2 3.56 3.39 3.55
K3 3.39 3.49 3.45
K
4 3.34 3.38 3.20
R 0.28 0.18 0.35
2.1.2 碱度对产品得率的影响 结果见表 1(b),由图可知
pH值在 10.5时 , 产品得率最高 , 碱度过大 , 产品得率下降 ,
可能是石灰乳用量大 ,后序处理中盐酸的用量也大 , 溶解体
积变大 , 产品有一定的溶解性 , 造成得率下降 , 成本上升 , 故
选 pH8.5 ～ 9.5为宜。
2.1.3 酸度对产品得率的影响 结果见图 1(c), 由图可知
pH2时产品得率最高 ,酸度太低或太高均不利于产品得率的
提高 , 故选择 pH2为酸度调节值。
2.2 正交实验优化工艺条件
由表 2可知 ,影响产品得率的因素主次为:C※A※B即:
沉淀时的酸度 , 溶解时水的用量 , 除胶时的碱度 ,最佳组合为
A
2
B
3
C
2
即:6倍量的水 , 石灰乳调pH10.5, 沉淀时的酸度为
图 1 实验因素对得率影响
pH2。
在该工艺条件下对工艺进行了验证 , 结果得率为
92.8%, 纯度 98.6%均高于正交实验各实验得率 ,因此确定
为最佳工艺。
3 讨论
由盐酸小檗碱粗品制备精品 , 其得率与用水量 ,酸 、碱度
密切相关 ,水量太大 , 不仅浪费资源 , 而且使其得率明显降
低 ,是因为水量太大 , 有一部分产品会溶解而损耗 , 在用石灰
乳除杂质时 ,石灰乳用量大 ,即碱度高 , Ca2+与杂质生成螯合
物的过程中会包裹部分产品形成沉淀 , 过滤除杂会损耗部分
产品 ,从而使得率降低 ,而酸化沉淀时 , 酸度过大 , 使部分产
品溶解 ,而且使水洗过程中用水量加大 ,部分产品随水流失 ,
得率下降 ,而酸度过小 ,产品沉淀不完全 ,得率也明显降低 ,
因此最佳工艺为 6倍量水煮沸 ,加石灰乳调 pH8.5 ～ 9.5,过
滤 ,滤液以盐酸调 pH2,沉淀 , 过滤 ,滤饼水洗 ,干燥。
参考文献:
[ 1] 肖崇厚.中药化学 [ M] .上海:上海科学技术出版社 , 2007:
143.
[ 2] 卢艳花编.中药有效成分提取分离技术(第 2版)[ M] .北京:
化学工业出版社 , 2008:147-148.
[ 3] 詹益兴.绿色精细化工-天然产品制造法 [ M].北京:科学技术
文献出版社.2005:440.
[ 4] 王艳萍 , 赵文翠 ,孟庆彪 ,等.前列腺炎冲剂质量标准的研究
[ J] .中草药 , 2002, 33(2):129.
[ 5] 任露泉.试验优化设计与分析 [ M] .北京:高等教育出版社 ,
2003:19-25.
收稿日期:2008-04-16
作者简介:任燕冬(1979-),女 ,硕士研究生 ,讲师,从事中药质量控制研究。 Tel:13258601495。
＊通讯作者:张 宁 ,中药学博士 ,副教授,从事中药药效物质基础及体内代谢研究。 Tel:(0454)6050350
祖师麻质量控制研究
任燕冬 1 , 杨武亮 2 , 宋宏杉3 , 杨智荣 1 , 张 宁 1＊
(1.黑龙江中医药大学佳木斯学院 ,黑龙江 佳木斯 154007, 2.江西中医学院 ,江西 南昌 330006;3.大庆市
龙南医院 ,黑龙江 大庆 163001)
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关键词:祖师麻;祖师麻甲素;TLC;薄层色谱
中图分类号:R284.1 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2009)06-0950-04
祖师麻为民间常用中草药 , 收载于 1977年版 《中国药
典》 ,为瑞香科植物黄瑞香 DaphnegiraldiiNitsche.、甘肃瑞
香 DaphnetanguticaMaxim.或凹叶瑞香 DaphneretusaHemsl.
的干燥茎皮及根皮。 临床用于治疗风湿痹痛 , 关节炎 ,类风
湿性关节炎痛等。但目前对祖师麻的质量标准研究较少 , 尚
缺乏系统的研究。为了进一步完善其质量标准 ,保证用药安
全有效 , 本实验以祖师麻有效成分祖师麻甲素(Daphnetin)
和祖师麻对照药材为对照 , 建立了祖师麻的薄层色谱鉴别方
法 , 同时建立了祖师麻中祖师麻甲素的 HPLC含量测定法。
按照文中建立的上述方法 , 本实验对不同来源的祖师麻分别
进行了测定。
1 薄层色谱鉴别
1.1 仪器与试药
仪器:CAMAG点样器 Linomat5, CAMAG双槽展开箱 ,
CAMAG薄层色谱摄像仪(REPROSTAR3);超声波清洗器
(上海超声波仪器厂)。
试剂:硅胶 G(60型)预制板 10×20 cm(青岛海洋化工
集团公司出品 国家药典会监制), 所用试剂均为分析纯(购
自江西南昌市东方仪器试剂公司)。
对照品与对照药材:祖师麻甲素 (Daphnetin, 编号:
0900-200102,含量测定用);祖师麻对照药材(批号:1243-
0301), 均购于中国药品生物制品检定所。
1.2 方法与结果
1.2.1 对照品溶液的制备 称取祖师麻甲素对照品适量 ,
加甲醇制成每 1 mL含 1.2 mg的溶液 ,作为对照品溶液。
1.2.2 供试品溶液的制备 取本品粉末 0.5 g, 加甲醇 30
mL,超声处理 30 min, 滤过 ,滤液浓缩至约 1 mL,作为供试品
溶液。
1.2.3 对照药材溶液制备 称取祖师麻对照药材 0.5 g, 按
1.2.1项 “供试品溶液的制备”方法制备 ,即得。
1.2.4 方法 照薄层色谱法(《中国药典 》 2005版一部附录
Ⅵ B)试验 , 分别吸取供试品溶液 、对照品溶液各对照药材溶
液各 10μL, 点于同一 0.5%CMC-Na硅胶 G(60型)板上 , 以
氯仿-醋酸乙酯-甲酸-乙醚(10∶1∶1∶3)为展开剂 , 展开 ,
取出 , 晾干 ,喷以 5%三氯化铁乙醇溶液 , 日光下检视。
1.2.5 样品测定 按照上述方法 , 对不同来源的祖师麻进
行薄层鉴别测定 , 结果见图 1 ～ 3。
1.2.6 结果 供试品色谱图与祖师麻对照药材 、对照品色
谱图相应位置上显相同颜色的斑点 , 供试品各斑点分离清
晰 , 层析效果好 ,可以达到鉴别的目的。
2 HPLC含量测定
2.1 仪器与试药
2.1.1 仪器 Agilent1100高效液相色谱仪:四元泵 、柱温
箱 、MVD检测器 , Agilent1100 色谱工作站;电子分析天平
AE240(十万分之一 , 瑞士 , METTLER-TOLEDOCo.);CQ250
超声波清洗器(上海超声波仪器厂);UV-3300(日本日立公
图 1 祖师麻 TLC图
1.芫花瑞香 2.凹叶瑞香 3.甘肃瑞香 4.黄花瑞香 5.尖瓣瑞香
(1～ 5药材 2004-5采于甘肃文县) 6.祖师麻甲素对照品 7.祖师
麻对照药材 8.祖师麻 9.祖师麻(8、9药材由山西万荣三九药业
提供)
图 2 祖师麻 TLC图
1.祖师麻(伪品 1) 2.祖师麻(伪品 2) 3.祖师麻(甘肃天水购)
4.祖师麻(安徽亳州购) 5.祖师麻甲素对照品 6.祖师麻对照
药材 7.凹叶瑞香 8.甘肃瑞香 9.黄花瑞香(7 ～ 9药材 2003-10
采于甘肃文县)
图 3 祖师麻 TLC图
1.甘肃瑞香 2.甘肃瑞香叶(甘肃天水) 3.祖师麻 4.祖师麻
(3、 4山西万荣三九提供) 5.祖师麻甲素对照品 6.祖师麻对照
药材 7.祖师麻 8.祖师麻 9.祖师麻(7～ 9药材由山西万荣三
九药业提供)
司)。
2.1.2 试药 祖师麻甲素(瑞香素 Daphnetin, 编号:0900-
200102,含量测定用 ,中国药品生物制品检定所购);祖师麻
样品来源见表 1,乙腈为色谱纯(MerkCo.), 水为双蒸水 ,其
它试剂均为分析纯。
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2.2 方法与结果
2.2.1 对照品溶液制备:精密称取祖师麻甲素对照品适量 ,
加甲醇制成每 1 mL含 40 μg的溶液 ,即得。
2.2.2 供试品溶液的制备:精密称取本品干燥的粉末 0.25
g, 置 50 mL量瓶中 , 精密加入 50%甲醇 50 mL, 称定重量 , 超
声提取 30min,冷却 , 再称定重量 , 用 50%甲醇补足减失的
重量 , 摇匀 ,过 0.45 μm滤膜 ,取续滤液作为供试品溶液。
2.2.3 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为 DikmaDia-
monsilC18(4.6mm×200 mm, 5 μm),流动相为乙腈-0.05%
磷酸水(15∶85), 检测波长为 UV326 nm, 流速为 1.0 mL/
min,柱温为 25 ℃。理论塔板数以祖师麻甲素峰计算不得低
于 4 000。
在上述色谱条件下 ,取对照品溶液 、供试品溶液各进样
10 μL进行 HPLC测定 , 结果见图 4、图 5。 由图中可见供试
品中祖师麻甲素峰与祖师麻甲素对照品峰保留时间一致 , 并
且与样品中其它组分达到了很好的分离。
图 4 对照品的 HPLC图
图 5 供试品的 HPLC图
2.2.4 线性关系考察 精密称取祖师麻甲素对照品
0.015 50 g, 置 100 mL量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 即得到
0.155mg/mL的祖师麻甲素对照品溶液 , 从中分别精密吸取
0.5、 1.0、5.0、10.0、15.0、20.0和 30.0 mL的对照品溶液 , 分
别置 50mL的量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 , 分别精密吸
取上述对照品溶液各 10μL, 依次进样 ,测定峰面积 , 以进样
量(ng)对峰面积进行线性回归 , 得回归方程为 y=5.795 1x
-6.923 2(r=0.999 6),表明祖师麻甲素在 15.5 ～ 930.0 ng
范围内呈线性关系良好。
2.2.5 精密度试验 精密吸取同一份供试品溶液 10 μL,
重复进样测定 , 面积相对标准偏差(RSD)为 0.70%(n=6),
表明精密度良好。
2.2.6 重复性试验 按 “供试品溶液的制备”方法 , 对同一
批样品分别制备 5份供试品溶液 , 各吸取 10 μL进样测定 ,
面积相对标准偏差(RSD)为 0.91% (n=5), 表明本法重现
性良好。
2.2.7 供试品溶液的稳定性试验 取同一份供试品溶液在
上述色谱条件下 ,分别在 0、2、 4、 6、8、10 h进样 10 μL, 以祖
师麻甲素色谱峰面积计算 RSD%为 0.47%, 表明 ,供试品溶
液在 10 h内基本稳定。
2.2.8 回收率试验 采用加样回收测定法 , 分别精密称取
已知含量(含量为 0.32%)的样品适量(约 0.125 g), 共 5
份 ,分别加入祖师麻甲素对照品溶液(每 1 mL含祖师麻甲素
0.318 4 mg)1.0 mL, 按 “供试品溶液的制备”方法制备供试
品溶液 ,进行 HPLC测定 , 回收率平均值为 100.59%,相对标
准偏差 RSD为 2.32%,表明本法回收率较高。
2.2.9 样品测定 取不同来源祖师麻 , 按照 2.2.2项 “供试
品溶液的制备”方法制备 , 精密吸取对照品溶液和供试品溶
液各 10 μL进样测定 ,结果见表 1。
表 1 样品的含量测定结果(n=3)
中文名称及学名 样品来源 含量 /%
芫花瑞香
DaphnegenkwaSieb.etZucc.
甘肃文县高楼山
2004 /5 0.630
凹叶瑞香
DaphneretusaHemsl
甘肃文县高楼山
2004 /5 0.815
甘肃瑞香
DaphnetanguticaMaxim.
甘肃文县高楼山
2004 /5 0.851
黄花瑞香
DaphnegiraldiiNitsche
甘肃文县高楼山
2004 /5 0.624
尖瓣瑞香
DaphneacutilobaRehd
甘肃文县武都南山
2004 /5 0.657
祖师麻 山西万荣三九药业
2004 /4 0.341
祖师麻 山西万荣三九药业
2003 /7 0.480
祖师麻 山西万荣三九药业
2003 /7 0.150
祖师麻 甘肃天水医院药房购买
2004 /9 0.221
祖师麻 安徽亳州
2003 /10 0.336
凹叶瑞香
DaphneretusaHemsl
甘肃文县武都南山
2003 /10 0.232
甘肃瑞香
DaphnetanguticaMaxim.
甘肃文县武都南山
2003 /10 0.355
黄花瑞香
DaphnegiraldiiNitsche
甘肃文县武都南山
2003 /10 0.378
甘肃瑞香
DaphnetanguticaMaxim. 甘肃天水 2003 /10 1.602
祖师麻 山西万荣三九药业
2004 /3 0.474
祖师麻 山西万荣三九药业
2003 /4 0.392
祖师麻 山西万荣三九药业
2004 /11 0.809
祖师麻 陕西西安药材公司购买
2003 /8 0.436
祖师麻(伪品) 山西万荣三九药业
2003 /7 0.025
甘肃瑞香叶
DaphnetanguticaMaxim.
甘肃天水
2003 /10 1.096
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3 讨论
3.1 本品收载于《中国药典》 1977年版一部 , 此标准中无鉴
别和含量测定项。由于药材中主要含有祖师麻甲素 ,又是其
主要药效活性成分 , 故本实验以祖师麻甲素对照品和祖师麻
对照药材为对照 , 建立了 TLC鉴别方法和 HPLC含量测定方
法 , 同时对不同来源的祖师麻分别进行了鉴别和含量测定。
其中 TLC谱斑点清晰 , 特征明显 , 可用于祖师麻的鉴别;
HPLC法简便 、准确 ,可用于祖师麻的含量测定。
3.2 TLC鉴别试验中 , 对供试品溶液的制备方法 、展开系
统 、显色剂 、硅胶板都做了大量的考察和比较 ,结果以文中采
用的方法最优。对不同来源的祖师麻进行测定 ,均可以显现
黄绿色斑点 , 含量高的斑点颜色较深 , 比较清晰 ,含量低的颜
色较浅 , 稍模糊 ,而祖师麻伪品和次品中则无此斑点 ,故该法
适用于祖师麻的鉴别 。
3.3 对祖师麻甲素含量有影响的因素考察 通过对不同来
源的祖师麻进行含量测定 , 不同种祖师麻中祖师麻甲素含量
以甘肃瑞香含量较高 , 而甘肃瑞香从产地来看以甘肃天水含
量较高 , 采集品种祖师麻甲素含量显著高于购买品种;对不
同采收期中甘肃瑞香中祖师麻甲素的含量也做了考察 , 发现
10月份和 5月份采收祖师麻甲素含量高于其他月份 , 这与
传统祖师麻的采收季节吻合;取贮存期分别为二个月 、五个
月 、八个月及十二个月的甘肃瑞香测定其祖师麻甲素的含
量 , 结果随着贮存期的延长 , 含量逐渐降低 , 且降低幅度较
大 , 因而祖师麻药材在实际应用过程中贮存期不应太长。
另外 , 发现甘肃天水的甘肃瑞香叶子中祖师麻甲素含量
较高 , 据此可以把其叶子作为进一步研究的对象 , 为黄瑞香
药用部位的进一步拓展提供参考依据。
3.4 含量测定色谱条件的考察 流动相曾采用文献报道的
流动相:甲醇-0.5%醋酸水(30∶70)[ 1] , 甲醇-水-三乙胺-磷
酸(77∶33∶0.5∶0.08)[ 2] ,用 HypersilODS色谱柱(规格:
4.6 mm×200 mm, 5 μm)、LichrosperC18色谱柱(规格:4.6
mm×200 mm, 5μm)、DikmaDiamonsilC18色谱柱(规格:4.6
mm×200 mm, 5μm)分别考察祖师麻甲素色谱峰的分离与
对称性 ,结果均不理想。 而采用乙腈-0.05%磷酸水(15∶
85)为流动相 , 色谱柱为 DikmaDiamonsilC18(4.6 mm×200
mm, 5μm), 结果祖师麻甲素的色谱峰的对称性和分离度均
较好。检测波长选择 , 取祖师麻甲素对照品溶液 , 在 200 ～
400 nm光谱扫描 , 其最大吸收波长为 325 ～ 327 nm, 故选用
326 nm为检测波长。
3.5 供试品溶液提取方法考察 根据祖师麻甲素在甲醇中
略溶 ,在乙醇中微溶 , 在水中不溶的特点 , 本试验考察了提取
溶剂 ,如甲醇 、乙醇和醋酸乙酯 3种提取溶剂在相同的超声
提取时间内(规定为 15 min)的提取结果进行比较 , 以确定
最优提取溶剂。结果以甲醇提取效果较好 , 浓度以 50%甲
醇提取率相对最高。提取方式通过对回流 、超声 、索氏 3种
方法的比较 ,超声提取提取效率最高 , 且方便快捷。 综合考
虑各因素 ,最后确定供试品溶液的制备方法为:0.25 g药材
粉末用 50 mL的 50%甲醇超声提取 30 min即可。
参考文献:
[ 1] 位海强 ,袁才英 ,杨金风 ,等.祖师麻质量标准研究 [ J] .广东
药学 , 2004, l4(3):1-3.
[ 2] 谢廷泉 ,徐丽婷 ,谢景文 ,等.高效液相色谱法测定复方祖师麻
注射液中瑞香素的含量 [ J] .药物分析杂志 , 1993, 13(4):262-
263.
GC-MS分析薏苡仁油中不皂化物的主要成分
陈碧莲 , 祝 明 , 陈 勇 , 何云珍
(浙江省药品检验所 ,浙江 杭州 310004)
收稿日期:2008-05-12
作者简介:陈碧莲(1972-),女 ,副主任中药师 ,从事中药分析工作。 Tel:(0571)86459425E-mail:zsyonly@hotmail.com
关键词:薏苡仁油;不皂化物;GC-MS
中图分类号:R284.1 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2009)06-0953-02
薏苡仁是禾本科薏苡仁属植物薏苡 CoixlacrymajobiL.
var.mayuen(Roman.)Stapf的干燥成熟种仁。薏苡仁甘 、淡 ,
凉 , 民间药用已有几千年的历史。由薏苡仁提取的薏苡仁油
经药效学实验证实具有抑杀癌细胞和调整机体免疫功能的
作用 , 有文献报道薏苡仁油的主要成分为甘油三酯 [ 1] , 但对
甘油三酯以外成分的文献报道目前尚不多见 ,本研究通过先
将油脂皂化 ,再用有机溶剂提取不皂化物 , 后采用毛细管气
相色谱-质谱联用法(GC-MS)分离并鉴定其主要成分 , 为薏
苡仁油成分的进一步研究打下了一定的基础。
1 实验部分
1.1 仪器与材料
Agilent6890N气相色谱仪和 Agilent5973质量型检测
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2009年 6月
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