全 文 ：· 1172· China Pharm acy 2007 Vol.18 No.15 中国药房 2007年第 18卷第 15期
*主管药师。研究方向:医院制剂。电话:023-63511428
T LC -UV 法测定祖师麻熏洗液中祖师麻甲素的含量
刘 露 *,敖 利 ,宋 健(重庆市中医研究院 ,重庆市 400013)
中图分类号 R927.2;R283.61 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2007)15-1172-02
摘 要 目的:建立以 TLC-UV 法测定祖师麻熏洗液中祖师麻甲素含量的方法 。方法:采用硅胶 G 薄层板 ,以甲苯-甲酸乙脂-
甲酸(5∶4∶1)为展开剂 ,氨气显色定位分离 ,用 95%乙醇-0.1mol· L -1盐酸(10∶1)洗脱 ,测定波长为 328nm 。结果:祖师麻甲
素在 1.04 ～ 5.20mg ·mL -1浓度范围内与吸收度呈良好的线性关系(r =0.999 9);加样回收率为 98.89%,RSD=0.84%。结论:
本方法简便 、快速 、重现性好 ,可用于祖师麻熏洗液的质量控制 。
关键词 祖师麻熏洗液;祖师麻甲素;薄层色谱-紫外分光光度法;含量测定
Determination of Daphnetin in Girald Daphne Bark Fumigant by TCL_UV Spectrophotometry
LIU Lu , AO Li , SONG Jian(Chongqing Academy of T radit ional Chinese M edicine , Chongqing 400013 ,
China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To de term ine the con tent of Daphnetin in Gira ld Daphne Bark fumigant by T LC_UV Spec-
tropho tom etry.METHODS:The thin layer plate w as silica gel.T he developer w as toluene_e thyl fo rmate_fo rmic acid (5∶4∶
1).The characte ristic spot w as distinguished and separa ted w ith ammonia and eluted by 95%e thanol_0.1mol ·L -1 hydrochlo ric
acid (10∶1)wit h UV detection w aveleng th a t 328nm.RESULTS:The linear range o f Daphne tin w as 1.04 ～ 5.20mg ·mL -1
(r =0.999 9)and the recovery w as 98.89%(RSD=0.84%).CONCLUSION :The method is simple , rapid and reproducible ,
and sui table fo r the quality contro l o f Girald Daphne Bark fumigant.
KEY WORDS Girald Daph ne Bark fumigant;Daphne tin;T LC_UV Spectrophotomet ry ;Content determination
祖师麻为瑞香科植物唐古特瑞香 Daphne tangutica
M axim.的茎皮和根皮 , 其主要成分为祖师麻甲素 (瑞香素
(Daphne tiy), 7 , 8-二羟基香豆素)、瑞香苷(Daphnin ,7 ,8-二
羟基香豆素-7-β -D-葡萄糖苷)、皂苷等。药理和临床实验
证明 ,瑞香素具有消炎 、镇静 、镇痛作用 ,用于治疗风湿性 、类风
湿性关节炎疗效确切 [1 ] 。
祖师麻熏洗液是由祖师麻 、乳香 、没药等 14味中药组成的
复方制剂 ,具有祛淤止痛 、祛风除湿的功效 ,临床上用于治疗退
行性骨关节病 [2 ～ 4 ]。根据处方中药材所含有效成分的性质 , 分
别需要提取挥发油 ,或用水提取 ,或用乙醇提取 。其中 ,祖师麻 、
乳香 、没药采用乙醇回流提取 ,提取工艺通过正交试验筛选 ,应
以祖师麻所含的主要有效成分之一祖师麻甲素含量为考察指
标 , 因此需要建立祖师麻甲素的含量测定方法 。本文以薄层色
谱-紫外分光光度(T LC-UV)法测定了祖师麻甲素含量 , 并
进行了方法学研究 。
1 仪器与试药
UV -752紫外分光光度仪 (上海电子光学技术研究所);
HN -S11-2 型电热恒温水浴锅 (上海跃进医疗器械厂);
AZ-200型电子天平(瑞士Mettler 公司);PBQ -Ⅰ型薄层自
动铺板仪(重庆南岸新力实验电器厂);微量进样器(上海医用
激光设备厂);KQ -250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声
仪器有限公司);TG L-16G 台式高速离心机(上海医用分析仪
器厂);薄层层析硅胶G 板(中国青岛海洋化工集团公司);祖
师麻甲素对照品 (中国药品生物制品检定所 , 批号:0900-
200102);祖师麻对照药材(购自重庆市药材公司 , 经鉴定为瑞
香科植物唐古特瑞香 Daphne tangutica Maxim.的茎皮和根
皮);祖师麻 、乳香、没药乙醇提取样品(重庆市中医研究院自
制);所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层试验
2.1.1 点样试液的制备:取祖师麻甲素对照品 10.4mg , 用
95%乙醇溶解定容至 10mL , 即得对照品试液;取乳香 、没药各
10g ,加 75%乙醇回流提取 1.5h ,滤过 ,浓缩 ,加 95%乙醇定容
至 10mL , 即得阴性对照品试液;取祖师麻 10g , 加 75%乙醇
50mL ,回流提取 1.5h ,滤过 ,浓缩 , 加 95%乙醇定容至 10mL ,
即得对照药材试液;供试品试液:取自制的祖师麻 、乳香、没药
乙醇提取样品 ,不经处理 ,直接取样 、点样 。
2.1.2 薄层条件 :薄层板为硅胶 G -3‰羧甲基纤维素
(CMC)-Na 板(0.4mm),展开剂为①甲苯-甲酸乙脂-甲酸
(5∶4∶1)、 ②正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)、 ③氯仿-乙酸
乙脂-甲酸(10∶1∶1),展距为 15cm ,点样为对照品点 10μL 、
供试品点 20μL , 显色剂
为氨气 、碘蒸气 。
2.1.3 薄层鉴别:吸取
对照品 、 供试品试液适
量 ,点于同一硅胶 G 薄层
板上 , 分别以不同的展开
剂展开 , 以氨气或碘蒸气
显色 , 展开剂①的色谱详
见图 1。
2.1.4 结果:对 3种展
开剂进行筛选 , 展开剂①
的展开效果较好;分别以
氨气 、碘蒸气显色后 , 祖
师麻甲素斑点分别显黄
中国药房 2007年第 18卷第 15期 Ch ina Pharmacy 2007 V ol.18 No.15 · 1173·
绿色 、蓝紫色 ,Rf=0.62 ,综合考虑 ,显色剂选用氨气 。结果 ,供
试品色谱中 , 在与对照品色谱相应位置处显相同颜色斑点 , 而
阴性对照品在此处无斑点 ,故不会产生干扰 。
2.2 最大吸收波长的确定
吸取祖师麻甲素对照品 (1.04mg ·mL -1乙醇溶液)20μL ,
加 95%乙醇-0.1mol · L -1盐酸溶液 (10∶1)稀释定容至
10mL ,于 200 ～ 400nm 波长范围内扫描 。结果表明 , 祖师麻甲
素的最大吸收波长为 328nm ,详见图 2。
2.3 洗脱条件试验
吸取祖师麻甲素对照品溶液(2.08mg ·mL -1)10μL , 共 4
份 , 点于同一硅胶 G 薄层板上 , 以甲苯-甲酸乙脂-甲酸(5∶
4∶1)为展开剂展开 ,取出 ,晾干 ,以氨气显色 、定位 。挖取展开
的斑点 , 装入小试管中 , 加入 1.0mL 95%乙醇-0.1mol ·L -1
盐酸溶液(10∶1), 超声洗脱 10min(60℃水温), 以 10 000r ·
m in
-1离心 1min ,吸取上清液 。每份样品洗脱不同的次数 ,合并
上清液 , 定容于 10mL 。另取 10μL 祖师麻甲素对照品溶液
(2.08mg ·mL -1)加同样的洗脱剂定容至 10mL 。以洗脱剂为
空白 , 于 328nm波长处扫描 。结果表明 , 洗脱 4次与洗脱 5次
及直接取样测定的数据结果几乎一致 , 故为节约时间 , 选取洗
脱 4次 。
2.4 标准曲线的绘制
吸取祖师麻甲素对照品 (1.04mg ·mL -1乙醇溶液)10 、
20 、 30 、 40 、 50μL , 加入 10mL 容量瓶中 , 各加 95%乙醇-
0.1mol ·L -1盐酸溶液 (10∶1)至 10mL , 以试剂为空白 , 于
328nm波长处扫描 。以取样量(C)为横坐标 ,吸收度(A)为纵
坐标进行回归 , 得回归方程:A =0.000 3+0.064 9C(r =
0.999 9)。结果表明 , 祖师麻甲素在 1.04 ～ 5.20mg ·mL -1浓
度范围内与吸收度的线性关系良好 。
2.5 稳定性试验
吸取祖师麻醇提样品液 20μL 、 祖师麻甲素对照品溶液
10μL , 点于同一硅胶 G 薄层板上 , 按 “2.1.2”项下薄层条件展
开 ,显色 ,定位 ,挖取祖师麻甲素斑点及空白斑点 ,加 95%乙醇-
0.1mol ·L -1盐酸溶液 (10∶1)超声洗脱 4次 (10min ·次 -1 ,
60℃水温),每次以 10 000r ·min -1离心 1m in ,合并上清液 ,定
容至 10mL ,于 328nm波长处测定 A 值 ,于 0 、2 、4 、8h各测定 1
次 。结果表明 ,本试验条件下 ,祖师麻甲素在 8h内稳定 。
2.6 精密度试验
在同一薄层板上点 5个同量的同一供试品溶液点 , 同时点
对照品溶液 10μL , 依法操作 , 测定吸收度 。结果 , RSD=
0.19%,表明本方法精密度良好 。
2.7 重现性试验
照上述方法 , 对同一批样品进行 5次独立测定 。结果 ,
RSD=1.69%,表明本方法重现性好 。
2.8 加样回收率试验
吸取祖师麻醇提样品液 6份 , 每份 4mL , 分别精密加入一
定量的祖师麻甲素对照品 , 混匀 , 每份取 20μL 点样 , 薄层展
开 ,定位 ,挖取斑点 ,用 95%乙醇-0.1mol ·L -1盐酸溶液洗脱
4次(10min ·次 -1 , 60℃水温),以 10 000r ·min -1离心 1min ,
取上清液 ,定容至 10mL ,测定 A 值 ,计算 ,结果详见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
Tab 1 Results of recovery test
样品含量
/mg·mL -1
加入量
/mg·mL -1
测得量
/mg·mL -1
回收率
/ % /%
RSD
/ %
1.367 1.094 2.450 98.97
98.89 0.84
1.367 1.094 2.459 99.86
1.367 1.367 2.720 98.97
1.367 1.367 2.702 97.63
1.367 2.320 3.647 98.28
1.367 2.320 3.678 99.61
x
2.9 样品含量测定
照上述方法 , 测定同样条件下制备的 3批样品 , 计算样品
中祖师麻甲素含量 ,结果详见表 2。
表 2 样品含量测定结果
Tab 2 Results of content determination of samples
样品 祖师麻甲素含量(标示量/ %)
1 0.54
2 0.52
3 0.51
3 讨论
本试验采用祖师麻 、乳香 、没药乙醇提取样品 , 不经处理 ,
直接取样 、点样 。试验表明 ,经乙醚处理后 ,使祖师麻甲素含量
减少 。
洗脱环节的操作会影响测量结果 , 要使洗脱完全 , 洗脱的
温度 、时间、次数需控制好。
本方法简便 、快速 ,结果准确 , 重现性好 , 可用于本制剂的
质量控制 ,并跟踪指导工艺研究 。
参考文献
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(收稿日期:2006-12-31 修回日期:2007-03-20)