全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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［责任编辑 聂淑琴］
［收稿日期］ 20100809(002)
［基金项目］ 广西自然科学基金项目(桂科自 0832013Z)
［第一作者］ 邓航，硕士，副主任药师，研究方向:抗糖尿病药研究，Tel:0773-2824560，E-mail:hang_deng@ 163. com
［通讯作者］ * 黄仁彬，博士，教授，研究方向:生化药理学，Tel:0771-5339805，E-mail:huangrenbin518@ 163. com
柿叶多糖对糖尿病小鼠降血糖作用及其机制研究
邓航1，2，贺敏1，李江2，罗旭艳1，黄仁彬1*
(1. 广西医科大学药学院，南宁 530021;2. 桂林医学院附属医院，广西 桂林 541001)
［摘要］ 目的:研究柿叶多糖对链脲佐菌素糖尿病小鼠的降血糖作用及其作用机制。方法:将实验小鼠随机分成 5 组:正
常对照组、模型组、格列本脲组(25 mg·kg － 1·d － 1)，柿叶多糖低、高剂量组(150，600 mg·kg － 1·d － 1)。 ig 给于药物 15 d，并在相
应时间采血测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素敏感指数(ISI)、丙二醛(MDA)、超氧化歧化酶(SOD)等指标。结
果:高剂量的柿叶多糖能较明显的改善糖尿病小鼠的葡萄糖耐量(P < 0. 01)，低、高剂量组均能显著降低糖尿病小鼠的血糖水
平(P < 0. 05)，有效降低肝组织 MDA 值，相应增高 SOD 活力，并能显著增加胰岛素敏感指数(ISI)，改善胰岛素抵抗状态。结
论:柿叶多糖具有较强的降血糖作用，可能与其能提高小鼠肝脏抗氧化酶活性、改善胰岛素抵抗等有关。
［关键词］ 柿叶多糖;链脲佐菌素;降血糖;机制
［中图分类号］ R285. 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)04-0114-04
Hypoglycemic Effect of Persimmon Leaf Polysaccharide in
Diabetic Mice Induced by Streptozotocin
DENG Hang1，2，HE Min1，LI Jiang1，2，LUO Xu-yan1，HUNG Ren-bin1*
(1 . Pharmaceutical School，Guangxi Medical University，Nanning 530021，China;
2 . Affiliated Hospital of Guilin Medical College，Guilin 541001，China)
［Abstract］ Objective:To investigate the hypoglycemic effect and its action mechanism of persimmon leaf
·411·
第 17 卷第 4 期
2011 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 4
Feb.，2011
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2011.04.040
polysaccharide in diabetic mice induced by streptozotocin (STZ). Method:The diabetic mice were induced by STZ.
Mice were randomly divided into 5 groups:control group，model group，glibenclamide group (25 mg·kg － 1·d － 1)，
low and high dose groups of persimmon leaf polysaccharide (150 mg·kg － 1·d － 1，600 mg·kg － 1·d － 1). The drugs
were administrated to mice in every morning for 15 days. In the corresponding time，the contents of fasting blood glu-
cose (FBG)，fasting insulin(FINS)，malondialdehyde (MDA)，superoide dismutase (SOD)activity，insulin sensi-
tivity index (ISI)and oral glucose tolerance test (OGTT)were determined. Result:The persimmon leaf polysaccha-
ride could markedly decrease blood glucose in STZ-induced diabetic mice. Meanwhile it could reduce the content of
MDA and increase the activity of SOD in liver，and increase insulin sensitivity index (ISI)and the amount of islet
cells. Conclusion:The persimmon leaf polysaccharide decreases blood glucose，and it has a very potential value in
the treatment of diabetes.
［Key words］ persimmon leaf polysaccharide;streptozotocin;hypoglycemic effect;mechanism.
柿叶入药，始见于明代《滇南本草》，以后诸家
本草及医书也多有记载。我国民间也有用柿叶泡茶
饮的习惯。柿叶含有黄酮类、生物碱、挥发油、鞣质、
酚类、香素、三萜类、多糖、有机酸、β-胡萝卜素、维生
素 C、生物态等多种化学成分［1］。急性毒性试验、亚
急性毒性试验和长期毒性试验均表明柿叶是一种安
全的天然药物。柿叶已被制成中成药用于治疗冠心
病、心绞痛、高血压等［2］。目前国内外有关柿叶有效
成分应用于糖尿病治疗的药理和临床研究较少，本
实验探讨柿叶多糖对链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠
的降血糖作用，并对其作用机制进行初步研究，为柿
叶开发利用提供科学依据。
1 材料
1. 1 柿叶多糖制备 柿叶粉碎，粗粉用 70% 乙醇
冷浸 30 min 后，回流提取 2 h，过滤，药渣自然挥干
乙醇，加水煮沸，微沸 1. 5 h，过滤，滤渣再次加水煮
沸，微沸 1. 5 h，合并滤液，滤液于 3 000 r·min － 1离心
20 min，取上清液于微波干燥器浓缩，浓缩液加 95%
乙醇，混匀、静置 24 h，抽滤，滤渣依次用无水乙醇、丙
酮洗涤 5 次，挥干溶剂后，经 Sevag 法去蛋白处理，得
柿叶粗多糖，经化学定性鉴别，为多糖类化合物。
1. 2 动物 清洁级昆明种小鼠，雌雄兼有，体重
(25 ± 3)g，购自广西医科大学实验动物中心，合格证
号 SCXK(桂)2003-0003;动物饲料是由广西医科大
学实验动物中心生产(标准饲料)。
1. 3 药物与试剂 链脲佐菌素(Streptozotocin，
STZ):深圳晶美公司进口分装，Product ID:380-010-
G001。优降糖(格列本脲 Glibenclamide):浙江南洋
药业有限公司，规格 2. 5 mg /片，批号 20051101。血
糖试剂盒:四川迈克科技股份有限责任公司生产，批
号 1106121。胰岛素放射免疫分析试剂盒:北京北方
生物技术研究所产品，批号 20070120。丙二醛
(MDA)测定试剂盒:南京建成生物工程研究所第一
分所，批号 20061206。超氧化物歧化酶(SOD)测试
盒:南京建成生物工程研究所第一分所，批号
20070131。考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒:南京建成
生物工程研究所第一分所，批号 20070103。
1. 4 仪器 722S 紫外分光光度计:上海精密科学
仪器有限责任公司。RE-52 旋转式蒸发器:上海安
亭实验仪器有限公司。GC-1200γ 放免计数盒:中国
科技大学科技实业总公司中佳光电仪器分公司。微
波真空干燥机:WBZ-2，贵阳新奇微波工业有限责任
公司。高速冷冻离心机:TGL-16G-A，上海市金鹏分
析仪器有限公司。
2 方法
2. 1 小鼠糖尿病模型建立 小鼠禁食12 h，按文献
［3］并做预试后，以 150 mg·kg － 1链脲佐菌素(STZ)
ip(STZ 溶于 0. 1 mol·L － 1，pH 4. 2 的柠檬酸 /柠檬酸
钠缓冲液中，现配现用，冰浴保存)。正常对照组小
鼠 ip 等量上述缓冲液。72 h 后(小鼠采血前禁食 12
h)眼内眦采血，50 μL，用生理盐水稀释 5 倍，于离心
机3 500 r·min － 1离心 15 min，分离血清，用葡萄糖试
剂盒测定小鼠空腹血糖 (FBG)，凡 FBG≥ 11. 1
mmol·L － 1视为糖尿病动物模型［4］。
2. 2 分组及给药 将成模小鼠随机分为正常对照
组、模型组、格列本脲组、柿叶多糖低、高剂量组，各
组小鼠自由饮水、每组小鼠每日上午和下午 2 次给
予同样量饲料，以适当控制摄食。 ig 给药，格列本脲
组(25 mg·kg － 1·d － 1)，柿叶多糖高低、高剂量组
(150，600 mg·kg － 1·d － 1)，用时配成等体积不同浓度
·511·
邓航，等:柿叶多糖对糖尿病小鼠降血糖作用及其机制研究
溶液(小鼠 ig 10 mL·kg － 1)。柿叶多糖用无水乙醇、
吐温、蒸馏水按 1∶ 1∶ 10 的比例配成溶液。成模后第
2 d 开始给药，每天上午空腹给药 1 次，连续 ig 15 d。
模型对照组小鼠 ig 10 mL·kg － 1上述空白溶剂。
2. 3 一般指标 观察小鼠的精神活动、毛发改变、
饮水量、进食量、大小便等一般状态，并记录体重变
化情况、死亡情况等。
2. 4 血糖的测定 造模第 3 d 用采血针刺破眼内
眦，取血 50 μL，用生理盐水稀释 5 倍，于离心机
3 500 r·min － 1离心 15 min，分离血清，用葡萄糖试剂
盒测定小鼠空腹血糖(FBG)。成模小鼠进行随机分
组，第 2 d 开始给药。以后分别在用药第 7，15 d用
葡萄糖氧化酶法测定各组 FBG。
2. 5 血清胰岛素测定、胰岛素敏感指数计算 给药
第 15 d，各组小鼠拔眼球采血，分离血清，用放射免
疫法测定空腹胰岛素(FINS)水平。计算胰岛素敏
感指数(ISI)，计算公式:
ISI = ln1 /FINS × FBG［5］
2. 6 口服糖耐量试验 测定重复 2. 1，2. 2 操作。
用药第 3 周时，各组口服葡萄糖 2. 5 g·kg － 1，分别测
定 0，0. 5，1，2 h 各组小鼠血糖值，比较口服葡萄糖
耐量(OGTT)变化情况，并计算糖耐量血糖曲线下面
积(AUC)。
AUC = 0. 5 × 0 h 血糖 + 0. 5 h 血糖 + 1. 5 × 1 h 血糖 + 2 h
血糖［6］
2. 7 肝组织中 MDA，SOD 测定 各组小鼠给药第
15 d 拔眼球采血后，处死，取肝组织，用冰生理盐水
清洗，滤纸吸干，称重后低温冰箱冷冻保存，测定前
取出用生理盐水配成 10%肝组织液，用高速匀质机
制成 10%肝组织匀浆，于冷冻离心机 3 000 r·min － 1
离心 15 min，取上清液按要求用生理盐水稀释一定
倍数后用于肝组织蛋白含量、肝组织 MDA、肝组织
SOD 测定。组织蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝蛋
白测定法;MDA 含量测定采用硫代巴比妥酸法;SOD
活性测定采用黄嘌呤氧化酶法。
2. 8 统计学方法 数据采用 x ± s 表示。采用
SPSS11. 5.统计软件进行统计分析。P < 0. 05 有统
计学意义。
3 结果
3. 1 柿叶多糖对糖尿病小鼠一般状况的影响 正
常小鼠造模成功后出现精神萎靡，形体消瘦、多食、
多饮和多尿等症状。ig 给药后，格列本脲组、柿叶多
糖低、高剂量组较模型组小鼠状态有较明显改善，精
神状态良好。体重较模型组有所增加。
3. 2 柿叶多糖对糖尿病小鼠空腹血糖的影响 给
药期间，与同期糖尿病模型组比较，格列本脲组，柿
叶多糖低、高剂量组，有显著降低血糖的作用(P <
0. 01 或 0. 05)。结果见表 1。
表 1 柿叶多糖对 STZ 致糖尿病小鼠血糖水平的影响(珋x ± s，n = 10)
组别
给药剂量
/mg·kg －1·d －1
初始血糖
/mmol·L － 1
7 d 血糖
/mmol·L － 1
15 d 血糖
/mmol·L － 1
降糖率
/%
正常 － 3. 93 ± 1. 342) 3. 53 ± 1. 482) 3. 59 ± 1. 152)
模型 － 17. 08 ± 2. 79 16. 89 ± 4. 61 15. 69 ± 3. 31 8. 14
格列本脲 25 17. 11 ± 3. 24 13. 26 ± 4. 31 9. 35 ± 2. 362) 45. 35
柿叶多糖 150 17. 01 ± 3. 20 15. 14 ± 2. 39 12. 43 ± 3. 331) 26. 92
600 17. 19 ± 3. 05 15. 17 ± 3. 33 12. 50 ± 3. 221) 27. 28
注:与模型组相比较1)P < 0. 05，2)P < 0. 01(表 2 ～ 4 同)。
3. 3 柿叶多糖对糖尿病小鼠胰岛素水平和胰岛素
敏感指数的影响 STZ 所致糖尿病小鼠与正常小鼠
相比胰岛素水平异常升高，出现胰岛素抵抗，用药后
柿叶多糖低、高剂量组，胰岛素敏感指数均提高。结
果见表 2。
表 2 柿叶多糖对 STZ 致糖尿病小鼠胰岛素水平、
胰岛素敏感指数的影响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
/mg·kg －1·d －1
空腹血糖
/mmol·L － 1
空腹胰岛素
/mU. L － 1
胰岛素敏感
指数
正常 － 3. 59 ± 1. 152) 25. 41 ± 4. 752) － 4. 28 ± 0. 462)
模型 － 15. 69 ± 3. 31 63. 74 ± 25. 16 － 6. 73 ± 0. 43
格列本脲 25 9. 35 ± 2. 362) 47. 43 ± 15. 03 － 6. 41 ± 0. 32
柿叶多糖 150 12. 43 ± 3. 661) 37. 15 ± 13. 052) － 5. 99 ± 0. 52)
600 12. 50 ± 3. 221) 29. 53 ± 4. 702) － 5. 79 ± 0. 232)
3. 4 柿叶多糖对糖尿病小鼠糖耐量的影响 与糖
尿病模型组比较，柿叶多糖高剂量组口服葡萄糖后血
糖水平下降较快，糖耐量血糖曲线下面积(AUC)与模
型组比较有显著性差异(P < 0. 01)，且作用优于格列本
脲组(P <0. 01或 0. 05)结果见表 3。
3. 5 柿叶多糖对糖尿病小鼠肝组织 MDA，SOD 的
影响 STZ 所致糖尿病各组小鼠肝组织中 MDA 较
正常组有显著增高，SOD 显著降低，显示糖尿病小
鼠肝组织抗氧化能力下降。用药 15 d 后，与模型组
比较柿叶多糖有效降低肝组织 MDA，相应增高 SOD
活力(P < 0. 01)，结果见表 4。
3. 6 胰岛形态学观察 显微镜下观察:正常组织胰
腺由浆液性腺细胞和导管组成，胰岛由大小不等的
细胞团构成，分布在腺泡之间，胰岛数量最多，体积
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第 17 卷第 4 期
2011 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 4
Feb.，2011
表 3 柿叶多糖对 STZ 致糖尿病小鼠糖耐量的影响(珋x ± s，n = 6)
组别
剂量
/mg·kg － 1·d － 1
0 h 血糖
/mmol·L － 1
0. 5 h 血糖
/mmol·L － 1
1 h 血糖
/mmol·L － 1
2 h 血糖
/mmol·L － 1
AUC /mmol·L － 1·h
正常 － 4. 23 ± 0. 722) 9. 09 ± 1. 432) 7. 86 ± 0. 892) 4. 41 ± 1. 362) 27. 44 ± 2. 772)
模型 － 17. 44 ± 2. 78 27. 58 ± 2. 17 27. 41 ± 2. 59 23. 90 ± 3. 71 101. 42 ± 7. 68
格列本脲 25 19. 15 ± 2. 77 23. 49 ± 2. 971) 17. 95 ± 4. 492) 15. 74 ± 2. 862) 75. 65 ± 12. 582)
柿叶多糖 600 13. 81 ± 7. 98 20. 14 ± 5. 262) 15. 15 ± 5. 112) 15. 20 ± 6. 062) 68. 23 ± 23. 112)
表 4 柿叶多糖对 STZ 致糖尿病小鼠肝组织
MDA，SOD 的影响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
/ mg·kg －1·d －1
MDA
/μmol·g － 1
SOD
/U·mg － 1
正常 － 9. 63 ±0. 702) 234. 15 ±27. 192)
模型 － 15. 18 ±3. 35 108 ±10. 47
格列本脲 25 10. 34 ±1. 432) 200. 3 ±16. 982)
柿叶多糖 150 11. 49 ±1. 192) 178. 59 ±57. 462)
600 10. 63 ±1. 542) 198. 51 ±32. 202)
较大;模型组胰腺由浆液性腺细胞和导管组成，胰岛
由大小不等的细胞团构成，分布在腺泡之间，胰岛细
胞数量明显减少，分布稀疏;表明 STZ 所致糖尿病小
鼠胰岛细胞有一定损伤。
显微镜下胰岛细胞计数:各组胰腺内胰岛的分
布总数平均为(n = 3)∶ 正常组24(个 /切片)，模型组
5(个 /切片)，格列本脲 16(个 /切片)，柿叶多糖低剂
量 6(个 /切片)、柿叶多糖高剂量 17(个 /切片)。结
果提示:柿叶多糖对胰岛细胞有一定的保护和修复
作用。
4 讨论
糖尿病患者最典型的临床特征为高血糖，持续
的高血糖不仅引起广泛的周围组织和器官的损害，
而且高血糖对胰岛 β 细胞亦有“细胞毒性作用”，因
此在糖尿病的治疗中如何有效持久地控制血糖成为
关键。本实验结果显示，柿叶多糖对糖尿病小鼠的
血糖具有显著降低作用，同时其也能显著改善糖尿
病小鼠的糖耐量，而且其作用优于格列本脲组;应用
柿叶多糖后，糖尿病小鼠状态有较明显的改善，精神
状态良好，死亡率低，并能减缓实验性糖尿病小鼠体
重的下降。
文献报道糖尿病患者和糖尿病动物模型的抗氧
化能力均有下降，在糖尿病的发展过程中伴随自由
基对肝组织的氧化损伤，同时，链脲佐菌素诱导的糖
尿病大鼠的肝细胞肿大、轻度变形，肝窦变窄甚至消
失，肝脏抗氧化能力显著下降［7］。本实验结果表明，
柿叶多糖能显著提高肝脏 SOD 活性、降低 MDA 含
量。显微镜下胰岛细胞计数:柿叶多糖高剂量组胰
岛细胞计数明显增加，提示柿叶多糖对胰岛细胞有
较好的保护和修复作用。因此，提高抗氧化酶活性，
增强机体的抗氧化能力，清除活性氧自由基以解除
自由基对肝脏和胰岛 β-细胞的损伤，促进肝脏功能
的恢复和胰岛 β-细胞的修复和再生，可能是柿叶多
糖降血糖作用的机制之一。
胰岛素抵抗贯穿糖尿病的始终，同时也是导致
糖尿病各种并发症的根源，显性糖尿病的发生既存
在胰岛素抵抗，又存在胰岛素分泌缺陷［8-9］。寻找治
疗胰岛素抵抗药物成为研发治疗糖尿病新药的突破
口。本实验显示在应用柿叶多糖低、高剂量组后，胰
岛素敏感指数均提高，提示柿叶多糖能增加胰岛素
敏感指数，改善胰岛素抵抗状态。
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邓航，等:柿叶多糖对糖尿病小鼠降血糖作用及其机制研究