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虎尾轮根提取物对脾虚小鼠的影响



全 文 :基金项目:福建省卫生厅资助项目 (2011 - 1 - 48)。
作者简介:陈素慧 (1982 -) ,女,讲师。E - mail:chensuhui2005@ 163. com
虎尾轮根提取物对脾虚小鼠的影响
陈素慧 谢伟容 黄建军
【摘 要】 目的:筛选虎尾轮根健脾固胃的有效部位。方法:采用系统溶剂提取法对虎尾轮根进行提取、分离得到不同部位的提取
物,并采用大黄所致脾虚模型及饮食失节型脾虚模型,以各组提取液灌胃给药,观察各种提取液对脾虚模型小鼠的影响。结果:虎尾轮根
的乙醇提取总浸膏、乙酸乙酯部位、水饱和正丁醇部位可增加脾虚小鼠体质量,提高胸腺和脾脏指数,改善小鼠脾虚症状,具有健脾固胃
的功效,对小鼠脾虚模型有较好的抗脾虚作用,其他部位活性较弱。结论:虎尾轮根的总浸膏、乙酸乙酯、水饱和正丁醇部位有较好的抗
脾虚的作用。
【关键词】 虎尾轮根;提取物;脾虚
【中图分类号】R285. 5 【文献标志码】A 【文章编号】1007 - 8517 (2016)01 - 0017 - 02
虎尾轮为豆科狸尾草属植物长穗猫尾射 (Uraria crini-
ta)的全草,主要分布于云南、广东、广西、福建、台湾
等省份。据《中药大辞典》、《闽南民间草药》、《台湾民间
药》记载,虎尾轮有活血通络、健脾和胃、除湿化痰的功
效,用于治疗肺结核、咳嗽、肺痈、吐血、尿血、胃十二
指肠溃疡、小儿疳积、白带、关节炎等疾病。虎尾轮在闽
南、台湾等地区广泛使用为食疗药材,闽南地区常作药膳,
用于小儿脾胃不开、小儿疳积等症;台湾民间用于小儿发
育不良之转骨,以及运动伤害和跌打内外伤[1]。虎尾轮根
具有理气、化痰、益肾的功效[2]。
课题组前期对虎尾轮根和茎已进行初步化学研究[3 - 4],
发现虎尾轮根主要含有黄酮类、皂苷、糖类、氨基酸类、
酚类、有机酸以及甾体等物质;茎中含有糖类、黄酮及其
苷类。但对其固胃健脾的有效成分尚不清晰。研究采用
80%乙醇对虎尾轮根进行提取,分离得到不同部位的提取
物,并观察各种提取物对大黄所致脾虚模型及食失节型脾
虚模型小鼠的影响。
1 仪器与材料
1. 1 动物 健康昆明小鼠,清洁级,雌雄各半,体质量
(20 ± 2)g,由漳州卫生职业学院机能实验室提供。
1. 2 药品与试剂 虎尾轮采自福建漳州市南靖县和溪镇,
经漳州卫生职业学院药学系实训中心巫庆珍高级实验师鉴
定为豆科 Uraria crinita (L. )Desv. ex DC. 的根;归脾丸
(批号:20140826,九芝堂股份有限公司) ;大黄药材 (漳
州聚善堂药业有限公司)。其余试剂均为分析纯。
1. 3 仪器 电子天平 AB135 - S (十万分之一) (梅特勒,
瑞士) ;KQ -50B 型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限
公司) ;R50 - 2B 型旋转蒸发仪 (上海申生科技有限公
司) ;SHB -Ⅲ型水循环式多用真空泵 (上海亚荣有限公
司)。
2 方法
2. 1 供试品的制备 取虎尾轮根粗粉,80%乙醇回流提取
3 次,提取液减压回收得浸膏,浸膏加水混悬,依次用石油
醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取,萃取液减压回收溶剂,
得石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏、正丁醇浸膏和水浸膏。灌
胃前分别用 0. 5% CMC - Na溶液配制成适宜浓度,分别灌
胃给药 10ml /kg。
2. 2 大黄[2,5,6]所致脾虚模型的建立
2. 2. 1 造模 将 80 只小鼠随机分为正常组、模型组、阳
性对照组、醇提组、石油醚组、乙酸乙酯组、水饱和正丁
醇组、水组,每组 10 只。分别记录每只动物体质量,适应
性正常饲养。除正常组外,各组灌胃给予大黄水煎液
(0. 5g /10g) ,连续 8d;正常组给予同体积蒸馏水。最后一
次灌胃大黄水煎液后,记录各组小鼠体质量。
2. 2. 2 给药 第 9天起,正常对照组与模型组给予同体积蒸
馏水;各提取部位组和醇提取组给予 1. 2g生药 / (kg·d);阳
性组灌胃给予归脾丸 0. 064g / (kg·d);连续给药 7d。
2. 2. 3 肠推进率的测定 各组动物最后一次给药前再次记
录各组小鼠体质量,记录完毕后禁食不禁水 24h,试验时空
白组给予墨汁,其他组以墨汁稀释药物,按 0. 3ml /10g 体
质量灌胃,30min后颈部脱臼处死,迅速解剖取出肠道,用
直尺量取幽门至墨汁前沿的距离作为在肠道中的推进距离,
从幽门至回盲部的总长度作为小肠总长度,计算推进率,
推进率 (%) =墨汁在小肠内推进距离 (cm) /小肠总长
度 (cm) × 100%。
2. 2. 4 胸腺系数和脾脏系数的测定 将处死后的小鼠取出
胸腺与脾脏,称体质量,计算脏器系数。
2. 3 饮食失节型脾虚模型的建立[7]
2. 3. 1 造模 将 80 只小鼠随机分为正常对照组、模型组、
阳性对照组 (归脾丸组)、醇提组 (总膏组)、石油醚组、
乙酸乙酯组、水饱和正丁醇组、水浸膏组,每组 10 只。分
别记录每只动物体质量,适应性正常饲养。除正常组外,各
组每天灌胃给予精炼猪油脂 (0. 2ml /10g) ,同时喂食卷心
菜,连续 8d;正常组给予同体积蒸馏水。
2. 3. 2 给药 第 9 天起,正常对照组与模型组给予同体积
蒸馏水;各提取部位组和总膏组给予 1. 2g 生药 /(kg·d) ;
阳性对照组灌胃给予归脾丸 0. 064g / (kg· d) ;连续给
药 7d。
2. 3. 3 一般观察以及体重测量 观察并记录小鼠活动、饮
食、体形变化及泄泻、纳呆、毛色等情况。每天灌胃前测
体质量。
2. 4 统计方法 数据采用 SPSS 17. 0 统计软件做统计分析,
·71·中国民族民间医药 2016年 1月第 25卷第 1期 Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy,2016,Vol. 25,No. 1
计量资料用 (x ± s)表示,行 t检验,P < 0. 05 表示差异有
统计学意义。
3 结果
3. 1 对大黄所致小鼠脾虚模型的影响
3. 1. 1 对小鼠肠推进率的影响 大黄水煎液灌胃造模后,
模型组与正常对照组相比较,小鼠大肠推进距离变长,推
进率增加;给药组均能不同程度地降低脾虚小鼠的肠推进
距离,乙醇提取总膏组、乙酸乙酯组、正丁醇组组的肠推
进距离降低较为显著 (P < 0. 05)。结果表明,造模后小鼠
推进率增加,乙醇提取总膏组、乙酸乙酯组、正丁醇组可
以明显降低推进率,见表 1。
表 1 虎尾轮根对大黄致小鼠脾虚模型肠推进率的影响
组别 动物数 /只 肠推进率 /%
正常对照组 10 59. 12 ± 5. 67
模型组 10 72. 22 ± 3. 27△
阳性对照组 10 61. 51 ± 6. 51*
总膏组 10 62. 82 ± 7. 20*
石油醚组 10 70. 70 ± 4. 72
乙酸乙酯组 10 61. 81 ± 6. 43*
正丁醇组 10 62. 83 ± 9. 25*
水浸膏组 10 69. 78 ± 5. 73
注:与正常对照组比较,△P < 0. 05;与模型对照组比较,* P
< 0. 05。
3. 1. 2 对小鼠胸腺系数和脾脏系数的影响 模型组小鼠自
行恢复一周后,胸腺指数和脾脏指数略有恢复,但显著低
于正常对照组 (P < 0. 05) ;与模型组相比,各给药组胸腺
指数和脾脏指数都有升高的趋势,而乙醇提取总浸膏组、
乙酸乙酯组、正丁醇组增加较为明显 (P < 0. 05)。结果表
明,造模后小鼠胸腺指数、脾脏指数降低;乙醇提取总浸
膏组、乙酸乙酯组、正丁醇组可以明显增加胸腺指数和脾
脏指数。见表 2。
表 2 虎尾轮根对大黄致小鼠脾虚模型肠胸腺
指数和脾脏指数的影响
组别 动物数 /只
胸腺指数
/mg /g
脾脏指数
/mg /g
正常对照组 10 3. 12 ± 0. 41 3. 65 ± 0. 35
模型组 10 1. 95 ± 0. 23△ 2. 70 ± 0. 29△
归脾丸组 10 3. 02 ± 0. 26* 3. 58 ± 0. 46*
总膏组 10 3. 07 ± 0. 19* 3. 50 ± 0. 39*
石油醚组 10 2. 03 ± 0. 31 2. 94 ± 0. 43
乙酸乙酯组 10 2. 98 ± 0. 28* 3. 65 ± 0. 21*
正丁醇组 10 2. 93 ± 0. 42* 3. 41 ± 0. 19*
水浸膏组 10 2. 21 ± 0. 41 2. 96 ± 0. 26
注:与正常对照组比较,△P <0. 05;与模型对照组比较,* P <0. 05。
3. 2 对饮食失节型脾虚模型的影响 小鼠给予喂食精炼猪
油和卷心菜后,第 3天开始出现泄泻,为黄色溏软便;继续
喂食,第 5天开始出现反应迟钝,行动迟缓,形体消瘦,被
毛稀疏、散乱等症状。按“2. 3. 2”下方法给药,给药 3d
后,各给药组小鼠饮食量逐渐增加,体重略增,大便趋于正
常,给药结束后大便成型。而模型组小鼠自行恢复,状况参
差不齐,恢复程度和速度弱于给药组。结果见表 3。
表 3 虎尾轮对饮食失节型脾虚小鼠体质量的影响 (x ± s)
组别 动物数 /只 造模前 / g 造模后 / g 给药后 / g
正常对照组 10 21. 4 ± 1. 3 23. 1 ± 2. 0 25. 5 ± 2. 1
模型组 10 21. 1 ± 1. 4 21. 7 ± 1. 9 21. 9 ± 1. 6
归脾丸组 10 20. 8 ± 1. 5 21. 5 ± 2. 7 22. 7 ± 1. 7
总膏组 10 21. 0 ± 1. 5 21. 9 ± 1. 5 22. 9 ± 2. 1
石油醚组 10 21. 1 ± 0. 9 22. 0 ± 2. 3 22. 7 ± 3. 1
乙酸乙酯组 10 20. 9 ± 1. 0 21. 7 ± 3. 1 24. 0 ± 1. 8*
正丁醇组 10 21. 0 ± 1. 3 22. 0 ± 2. 7 24. 4 ± 2. 5*
水浸膏组 10 20. 9 ± 1. 1 21. 6 ± 1. 6 23. 1 ± 1. 7
注:与模型对照组比较,* P < 0. 05。
4 讨论
目前,造脾虚模型的方法各异,本文采用大黄苦寒泻
下法和饮食失节法复制脾虚模型。大黄苦寒泻下法方法简
单,易于操作,用大黄水煎液灌胃,动物出现便溏、形体
消瘦、毛色枯槁等症状与临床脾虚症状相同,说明实验建
立的脾虚模型成功。胸腺和脾脏是人体重要的免疫器官,
胸腺指数和脾脏指数能反映二者的发育和功能状况,间接
反映了机体的免疫水平[8],实验中以肠墨汁推进率、胸腺
指数和脾脏指数为考察指标。结果表明,虎尾轮根乙醇提
取总浸膏组、乙酸乙酯组、水饱和正丁醇组给药后能明显
降低小鼠肠推进率,提高胸腺指数和脾脏指数。将小鼠喂
食精炼猪油和卷心菜,复制饮食失节型脾虚模型,实验动
物出现反应迟钝、行动迟缓、形体消瘦、被毛稀疏、散乱
等症状,说明实验建立的脾虚模型成功;乙酸乙酯和水饱
和正丁醇组给药后小鼠体质量增加较明显,大便成型,具
有改善脾虚症状的功能。
实验结果表明,虎尾轮根提取物可增加脾虚小鼠体质
量,提高胸腺和脾脏指数,改善小鼠脾虚症状,具有健脾固
胃的功效,而乙酸乙酯和水饱和正丁醇部位效果更优。实验
中,虎尾轮根浸膏得率为 7. 3%,萃取后,各提取液的得率
分别为石油醚层为 0. 25%、乙酸乙酯层为 0. 4%、水饱和正
丁醇层为 0. 8%、水层为 3. 5%。虎尾轮根含有黄酮类、皂苷
类成分,极性较大,有效物质主要存在于正丁醇层和乙酸乙
酯层,为虎尾轮药用价值的研究奠定实验基础。
参考文献
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(收稿日期:2015. 10. 08)
·81· 中国民族民间医药 2016年 1月第 25卷第 1期 Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy,2016,Vol. 25,No. 1