全 文 ：有了更进一步的了解 ,为以后的研究工作提供了依据。
本研究首次全面考察了哈蟆油薄层色谱条件 , 确立了快速 、
直观 、操作简便的鉴别哈蟆油药材自身的薄层色谱条件 , 为更好
地控制哈蟆油的质量提供了依据。同时为进一步研究哈蟆油的
薄层色谱指纹图谱以及同其它的色谱光谱联用技术提供了前提
条件。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 [ S].北京:化学工业出版社 , 2005:179.
[ 2 ] 　陈　宁.薄层色谱技术新进展 [ J] .广东公安科技 , 2000, (2):12.
收稿日期:2008-08-27;　修订日期:2008-10-14
基金项目:美国波特兰市俄勒岗州健康科学大学资助项目
作者简介:梁永红(1964-),女(壮族),广西容县人 ,现任广西医科大学药
学院副教授 ,学士学位 ,主要从事天然产物化学成分与活性研究工作.
岩黄连生物总碱对四氯化碳所致
小鼠急性肝损伤的保护作用
梁永红 1 , 贾　杰1 , PeterS.Spencer2 , 毛宇昂1 , 覃崇举 3
(1.广西医科大学药学院 ,广西 南宁　530021;
2.美国波特兰市俄勒岗州健康科学大学职业与环境毒理学研究中心;
3.广西河丰药业有限公司 ,广西 东兰　547400)
摘要:目的 研究岩黄连生物总碱对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用 ,探讨其疗效机制。方法 岩黄连生物总碱
予小鼠连续灌胃给药 10d,用 CCl4造成小鼠急性肝损伤 , 测定小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含
量 , 以及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量 , 观察光镜下小鼠肝组织的病理变化 。结果 岩黄连生
物总碱高 、中 、低各剂量组均能抑制小鼠腹腔注射 CCl4引起的急性肝损伤所致的 ALT和 AST的升高 , 同时能升高肝组织
中 SOD的含量 ,并能降低 MDA的含量;减轻肝组织坏死程度。结论 岩黄连生物总碱对四氯化碳所致的小鼠急性肝损伤
具有保护作用 , 其保护机制可能与其抗脂质过氧化有关。
关键词:岩黄连生物总碱;　急性肝损伤;　四氯化碳
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)12-2922-02
ProtectiveEffectofCorydalissaxicolaAlkaloids(CSA)onCCl4 -inducedAcuteLiver
InjuryinMice
LIANGYong-hong1 , JIAJie1 , PeterS.Spencer2 , MAOYu-ang1 , QINChong-ju3
(1.GuangxiMedicalUniversity, Nanning530021, China;2.CenterforResearchonOccupational＆ Environ-
mentalToxicologyOregonHealth＆ScienceUniversityPortland, Oregon, USA;3.GuangxiHefengPharmaceuti-
calCo.Ltd., Donglan, 547400, China)
Abstract:ObjectiveToinvestigatetheprotectiveefectofCorydalissaxicolaalkaloids(CSA)onCCl4 -inducedacuteliverin-
juryinmice.MethodsAfterintragastricadministrationofCSAfor10days, theratsweregivenCCl
4
toinduceacuteliverinjury.
TheserumlevelsofALT, AST, SOD, andMDAinliverweredetected.PathologicalchangesweredetectedbyHE.ResultsCSA
couldsignificantlydecreasetheacitivitiesofALT, ASTandMDA.ThelevelofSODwasincreased.CSAcouldalsoprotectthe
liverfrompathologicalinjuryinducedbyCCl4.ConclusionCSAcanprotectliverfromacutehepatictoxicityinducecdbyCCl4.
Keywords:CSA;　Acuteliverinjury;　CCl4
　　岩黄连 CorydalissaxicolaBunting系罂粟科紫堇属植物石生
黄堇的全草 , 分布于全国各地 , 西南部盛产 ,主要分布于贵州 、云
南 、四川 、西藏 、广西等地 [ 1] 。成分分析表明 , 该植物所含的化合
物主要为生物碱 , 尚未有其他类化合物的报道 [ 2] 。 据记载 , 该植
物具有抗肿瘤 、增强免疫功能 、止痛镇静 、抗菌 、抗肝炎病毒等作
用 [ 3] 。
本研究采用 CCl4小鼠急性肝损伤模型 ,运用酶活力测定 ,抗
脂质过氧化物测定以及形态学观察等方法 ,研究岩黄连生物总碱
(Corydalissaxicolaalkaloids, CSA)对小鼠急性肝损伤的保护作用
并探讨其保护机制。
1　材料
1.1　药物 广西药材岩黄连全草 95 %乙醇提取 , 采用旋转蒸发
浓缩得根浸膏 ,酸水转溶 , 碱化 ,氯仿提取后浓缩最后得到总生物
碱 , 配制成所需各浓度。
1.2　试剂 联苯双酯滴丸(北京协和药厂);四氯化碳(重庆川江
化学试剂厂);长生纯正花生油;ALT, AST, MDA, SOD试剂盒(南
京建成生物工程研究所)。
1.3　动物 昆明种小鼠 ,体重(20±2)g, 雌雄兼用 , 广西医科大
学医学动物实验中心提供。
2　方法
2.1　模型建立 [ 4 , 5] 取昆明种小鼠 60只 , 随机分为 6组 , 即空白
对照组 、联苯双酯组 、CCl4模型组及 CSA高 、中 、低剂量组。联苯
双酯组灌胃给予联苯双酯混悬液 150mg· kg-1;CSA三个剂量组
·2922·
时珍国医国药 2008年第 19卷第 12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.12
分别灌胃给予 CSA100, 75, 50 mg· kg-1。空白对照组和 CCl4模
型组给予同等量的蒸馏水。连续 10d后除空白对照组外其余各
组均腹腔注射 0.5% CCl4油溶剂 0.1 ml· 10 g-1(此即 CCl4的
给药方式 , 为一次性给药造成急性肝损)。禁食 24 h后摘眼球取
血 , 静置 30 min, 3 000 r· min-1离心 10 min后分离血清 , 待测血
清中 AST及 ALT含量。取肝组织 , 用生理盐水洗去残血并用滤
纸滤干 , 剪成小块。称取 100 mg, 加预冷生理盐水 0.9 ml, 制成
10%匀浆 ,待测肝组织 SOD和 MDA的含量。取肝大叶相同部位
的一小块肝组织固定于 10%福尔马林 ,做病理切片检查。
2.2　生化检测 分离得到的各组小鼠血清 , 按照试剂盒说明测定
ALT和 AST的活力。 10%肝组织匀浆 4℃ 3 500 r· min-1离心 10
min后取上清液 ,按照试剂盒说明测定 SOD和 MDA的含量。
2.3　形态学观察 所取小鼠肝组织用 10%福尔马林固定 , 制备
肝组织切片 , HE染色 ,普通光镜下观察肝组织病理结构改变。
2.4　统计方法 数据处理采用 x±s表示 , 各组样本均数间的比
较采用单因素方差分析(onewayANOVA)。
3　结果
3.1　对血清中 ALT和 AST含量的影响 CCl4模型组与空白对照
组比较 , 血清 ALT及 AST均明显增高(P<0.01)。与 CCl
4
模型
组比较 , CSA高 、中 、低剂量组均可明显降低肝损伤小鼠血清 ALT
及 AST活力。
表 1　岩黄连生物总碱对小鼠急性肝损伤血清中 ALT, AST含量的影响
U· L-1
组别 ALT AST
空白对照 38.84±5.37 71.95±20.35
CCl4 模型 312.54±6.22△ 350.10±16.32△
联苯双酯 217.12±14.67＊＊ 211.15±21.20＊＊
CSA高剂量 218.70±15.39＊＊ 224.63±14.31＊＊
CSA中剂量 257.74±28.39＊＊ 272.52±14.76＊＊
CSA低剂量 285.85±12.02＊ 309.73±10.38＊
　　与空白对照组比较 , △P<0.01;与模型组比较 , ＊＊P<0.01, ＊P<
0.05;n=10
3.2　对肝组织中 MDA和 SOD含量的影响 CCl4模型组与空白
对照组比较 , 肝组织中 MDA含量明显增高 , SOD含量明显降低
(P<0.01)。与 CCl4 模型组比较 , CSA高 、中 、低剂量组均能明
显降低肝损伤小鼠肝组织中 MDA含量并能增高 SOD的含量。
表 2　岩黄连生物总碱对小鼠急性肝损伤肝组织中 MDA、SOD含量的影响
组别 MDA/nmol· mgprot-1 SOD/U· mgprot-1
空白对照 3.53±1.08 142.71±47.33
CCl4 模型 6.54±2.14△ 121.70±47.04△
联苯双酯 4.52±1.67＊＊ 147.83±42.87＊＊
CSA高剂量 4.61±1.85＊＊ 138.06±33.65＊＊
CSA中剂量 5.13±1.78＊＊ 133.66±32.87＊＊
CSA低剂量 5.22±1.84＊ 127.74±36.03＊
　　与空白对照组比较 , △P<0.01;与模型组比较 , ＊＊P<0.01, ＊P<
0.05;n=10
3.3　对四氯化碳肝损伤小鼠肝脏病理组织的影响 空白对照组
小鼠肝脏外观呈红褐色 ,质地软而富有弹性;在光镜下可以观察
到肝小叶结构完整 ,细胞排列整齐 , 大小均匀 , 分界清楚 , 肝细胞
索以中央静脉为中心呈放射状排列 ,肝窦清晰。模型组小鼠肝脏
外观体积增大 , 质脆 , 边缘钝而厚 , 表面呈黄褐色;镜下可见肝小
叶结构破坏 ,肝细胞普遍浊肿 ,出现以中央静脉为中心的局灶性
肝细胞变性 、坏死和炎细胞浸润。 CSA高 、中 、低剂量组及联苯双
酯组小鼠较模型组肝损伤程度明显减轻 , 镜下可见 CSA高剂量
组和联苯双酯组肝小叶结构基本完整 , 细胞排列较整齐 , 只有少
量的炎细胞浸润 ,较模型组有明显改善。 CSA中 、低剂量组较模
型组也有所改善 ,但是不如高剂量组效果好。
4　讨论
CCl4是一种毒性很强的化学物质 ,进入机体后 ,在肝脏内经
肝细胞色素 P450激活 , 生成三氯甲基自由基(CCl
3
· )和氯自由
基(Cl· ), 导致肝微粒体的脂质过氧化。 由于脂质过氧化反应
增强而抗氧化能力降低导致自由基增多 , 进而攻击脂质细胞膜 ,
引起肝细胞脂质过氧化性损伤 ,使肝细胞变性坏死 , 细胞内 ALT,
AST大量释放 [ 6 , 7] 。
自由基可引发多价不饱和脂肪酸过氧化而生成过氧化脂质
(LPO),其最终产物 MDA可使蛋白质 、核酸及脂类发生交联 , 致
生物膜发生变性 ,细胞突变 、衰老或死亡。 MDA不仅是反映脂质
过氧化的敏感指标 ,还可间接反映出细胞损伤的程度。 SOD是超
氧阴离子自由基的清除剂 ,可抑制由自由基启动的脂质过氧化反
应。实验结果表明 , CSA能降低急性肝损伤小鼠肝组织中的
MDA含量 , 升高 SOD含量。提示 CSA可能通过抗脂质过氧化 ,
保护酶活性而提高肝细胞膜的稳定性 , 使肝细胞变性和坏死减
轻 , 减少炎症细胞浸润。
本实验结果证明 , CSA能显著降低 CCl
4
引起的急性肝损伤
后血清中 ALT和 AST的水平 , 明显减轻肝细胞的变性坏死和炎
性浸润等病理改变 ,同时还明显降低肝组织 MDA的含量 , 并且有
效提高了 SOD的活力。这些结果提示 , CSA对 CCl4所致小鼠急
性肝损伤的保护作用 , 可能与其提高肝细胞抗氧化能力 , 对抗
CCl
4
引起的膜脂质过氧化 , 促进肝细胞的再生和修复有关。 更
深入的作用机制有待进一步研究。
参考文献:
[ 1 ] 　蒋水元 , 胡兴华 , 赵瑞峰.岩黄连引种栽培研究 [ J] .广西植物 ,
2002, 22(5):469.
[ 2 ] 　韦记清 ,蒋水元 ,蒋运水 ,等.药用植物岩黄连研究概述 [ J] .广西科
学院学报 , 2006, 22(2):108.
[ 3 ] 　孙宁玲 ,陆国才 ,袁伯俊 ,等.岩黄连研究进展 [ J] .中药新药与临床
药理 , 2006, 17(1):78.
[ 4 ] 　陈奇.中药药理研究方法学 [ M] .北京:人民卫生出版社 , 1993:
724.
[ 5 ] 　徐叔云 ,卞如濂 ,陈修.药理实验方法学 , 第 3版 [ M] .北京:人民卫
生出版社 , 2002:1346.
[ 6 ] 　巫协宁.急性肝损伤的细胞学机制 [ J] .国外医学·消化系统分册 ,
1998, 18:14.
[ 7 ] 　卢林耿 ,王中民 ,张永群 ,等.对四氯化碳所致大鼠肝脏损伤机制的
研究 [ J] .中西医结合肝病杂志 , 1996, 6(2):24.
·2923·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.12 时珍国医国药 2008年第 19卷第 12期