全 文 ：参考文献
〔1〕黄波，姜武民，吉祥波 . 复方醋酸地塞米松乳膏含量测定方法的
改进〔J〕. 实用药物与临床，2011，14(4):311-312.
〔2〕黄巧玲，王维，谢爱丽 . 高效液相色谱法测定复方醋酸地塞米松
搽剂中醋酸地塞米松的含量〔J〕. 医药导报，2008，27(7):848-
849.
〔3〕李如标，王梅娟 . 高效液相色谱法测定复方醋酸地塞米松搽剂中
2 组分的含量〔J〕. 中国新药与临床杂志，2011，30(8):623-624.
〔4〕国家药典委员会编 . 中华人民共和国药典 . 二部〔S〕. 北京:化学
工业出版社，2005，593.
HPLC法同时检测金银花露中 6 种防腐剂含量
张 瑾，丁 晴，栾 洁(江苏省无锡药品检验所 无锡 214021)
摘要:目的 建立了金银花露中 6 种防腐剂的含量测定方法。方法 采用 HPLC法，以 0. 025mol·L －1磷酸二氢钠溶液(磷酸调 pH 3. 7)-甲醇
为流动相梯度洗脱，分别在波长 228nm、258nm处测定 6 种防腐剂的含量。结果 9 个生产厂家的 19 批金银花露中，有 7 个生产厂家的 16 批样
品检出苯甲酸，山梨酸，对羟基苯甲酸乙酯的一种或两种。2 个生产厂家的 3 批样品未检测出上述 6 种防腐剂。结论 该方法简便、准确、重现
性好，可用于中药液体制剂中常见防腐剂的含量测定。
关键词:HPLC;金银花露;防腐剂
中图分类号:Ｒ927. 2 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2013)-09-0080-03
作者简介:张 瑾，女(1984. 5 －)。毕业于南京中医药大学。职称:
药师。从 事 药 物 分 析 专 业。联 系 电 话:18261520797，E-mail:
zhangjin1332@ 163. com
Determination of six types of preservatives in Distilled liquid of honeysuck-
le by HPLC
ZHANG Jin，DING Qin，LUAN Jie(Jiangsu Wuxi Drug verification，Wuxi 214021，China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE To establish a method to determine six types of preservatives in distilled liquid of hon-
eysuckle. METHODS Using HPLC with the gradient elution of 0. 025mol·L －1 Phosphoric acid sodium solution to
the hydrogen (Phosphoric acid. key ph3)－ Methyl alcohol detected the content of Six types of preservatives at 228nm
or 258nm. ＲESULTS One or two of benzoic acid，sorbic acid and ethyl p-hydroxybenzoate were determined in 16
samples from 7 pharmaceutical factories，and none in 3 samples from the other two pharmaceutical facto-
ries. CONCLUSION The method is simple，accurate and repeatable for determination of the common preservatives
in Liquid herbal medicine.
KEY WOＲDS:HPLC;Distilled liquid of honeysuckle;Preservatives
金银花露是金银花(忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica
Thunb. 的干燥花蕾)经水蒸气蒸馏而得的芳香露液，具有清
热解毒、凉散风热的功效，是治疗儿童夏季中暑、风热感冒等
的良药。金银花露提取工艺简单，制剂为水溶液，故容易在运
输贮存中或开服后出现长霉，变质等现象。很多厂家在生产
金银花露过程中适当的添加了防腐剂来保证质量，但外标签
和说明书中常不提及。因此，我们采用 HPLC 法同时筛查 9
个厂家生产的 19 个批次金银花露中 6 种常见防腐剂的含量，
为金银花露的质量控制、用药安全提供参考。
1 仪器、试药与样品
Agilent 1200 高效液相色谱仪系统，Mettler XS-205 电子天
平。
苯甲酸(批号 100419-200301)、对羟基苯甲酸丁酯(批号
110792-2000503)为中国药品生物制品检定所提供;对羟基苯
甲酸甲酯(批号 90819)、对羟基苯甲酸乙酯(批号 90806)、对
羟基苯甲酸丙酯(批号 90827)为 Labor Dr. Ehrenstorfer 提供;
山梨酸(批号 LB67875)为 SUPEL CO提供
甲醇为色谱纯，磷酸二氢钠、磷酸为分析纯，水为纯化水。
金银花露来自 9 个厂家 19 个批号(见表 1)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Lichrospher C18 (4. 6 × 250mm，
5μm);流动相:以 0. 025mol·L －1磷酸二氢钠溶液(磷酸调 pH
3. 7)(A)-甲醇(B)为梯度洗脱(见表 2);检测波长:苯甲酸
228nm，山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟
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海峡药学 2013 年 第 25 卷 第 9 期
基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯 258nm;流速:1. 0mL·
min －1;柱温:30℃;进样量:10μL。
表 1 金银花露样品
样品编号 生产厂家 批号
1 湖北某厂家 A 1101112
2 湖北某厂家 A 1103191
3 湖北某厂家 A 110408
4 湖北某厂家 B 20110313
5 湖北某厂家 C 10093051
6 湖北某厂家 C 11023014
7 湖北某厂家 C 11042011
8 湖北某厂家 D 100615
9 湖北某厂家 D 110403
10 湖北某厂家 E 100601
11 上海某厂家 F 100711-1
12 湖北某厂家 F 100725-2
13 湖北某厂家 F 110211-1
14 四川某厂家 G 100703
15 湖北某厂家 G 100704
16 湖北某厂家 H 20110318
17 湖北某厂家 H 20110402
18 湖北某厂家 I 110101
19 湖北某厂家 I 110203
表 2 流动相梯度洗脱表
t(min) A(%) B(%)
0 70 30
5 70 30
15 30 70
20 15 85
22 70 30
25 70 30
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取苯甲酸、山梨酸、对羟基
苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基
苯甲酸丁酯对照品各 10mg，分别加 50% 甲醇制成 1mg·
mL －1的溶液，作为对照品母液。
2. 3 供试品溶液的制备 精密吸取金银花露适量，加 50%
甲醇稀释，过滤，滤液作为供试品溶液。
2. 4 测定方法 精密吸取 10μL，注入液相色谱仪，在上述色
谱条件下，6 种对照品完全分离，且金银花露自身成分对检测
无干扰(见图 1、2)。通过对所有样品进行液相色谱行为的筛
查，共检测出有苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸乙酯三种防腐
剂存在，故对这三种防腐剂进行方法学研究。
图 1 对照品溶液色谱图
图 2 阴性样品色谱图
2. 5 方法学研究
2. 5. 1 线性关系考察:分别精密吸取苯甲酸对照品母液
1. 5mL、山梨酸对照品母液 0. 6mL、对羟基苯甲酸乙酯对照品
母液 1. 0mL于同一 50mL量瓶中，加 50%甲醇定容至刻度，作
为线性溶液 1，然后逐级稀释至不同浓度的对照品溶液，作为
线性溶液 2、3、4、5、6。分别进样 10μL，记录苯甲酸、山梨酸、
对羟基苯甲酸乙酯的峰面积，以对照品的浓度为横坐标，峰面
积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。得苯甲酸回归方程为 y
= 45160x + 13. 169，r = 0. 9999，表明苯甲酸在 0. 591 ～ 29. 6μg
·mL －1范围内呈良好的线性关系;山梨酸回归方程为 y =
115876X + 13. 532，r = 0. 9999，表明山梨酸在 0. 237 ～ 11. 8μg
·mL －1范围内呈良好的线性关系;对羟基苯甲酸乙酯回归方
程为 y = 51523x + 10. 067，r = 0. 9999，表明对羟基苯甲酸乙酯
在 0. 041 ～ 20. 4μg·mL －1范围内呈良好的线性关系。
2. 5. 2 精密度试验:精密吸取对照品线性溶液 3(苯甲酸
8. 87μg·mL －1、山梨酸 3. 55μg·mL －1，对羟基苯甲酸乙酯
6. 13μg·mL －1)，在上述色谱条件下连续进样 6 次，苯甲酸、
山梨酸、对羟基苯甲酸乙酯的峰面积平均值为 410. 30、
421. 94、323. 28，ＲSD为 0. 25%、0. 07%、0. 06%。结果表明仪
器精密度良好。
2. 5. 3 重复性试验:取 18 号样品适量，共 6 份，用 50%甲醇
稀释后，在上述色谱条件下进行测定，结果山梨酸的平均含量
为 0. 164%，ＲSD为 1. 10%，表明实验重复性较好。
2. 5. 4 稳定性试验:取 1 号样品适量，用 50%甲醇稀释后，在
上述色谱条件下分别在 0、2、4、6、8、10h 进行测定，结果苯甲
酸的平均含量 0. 074%，ＲSD为 0. 30%，表明样品在 10h内稳
定。
2. 5. 5 加样回收率试验:精密吸取已知含量的 3 号样品取样
量的一半，共 6 份，分别加入苯甲酸对照品 0. 0827mg 和对羟
基苯甲酸乙酯 0. 0674mg，用 50%甲醇稀释后，按上述色谱条
件进行测定。计算加样回收率，结果(见表 3、4)。
表 3 加样回收率试验-苯甲酸
取样量
(mL)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
2. 5 0. 0825 0. 0827 0. 159 92. 50
2. 5 0. 0825 0. 0827 0. 163 97. 34
2. 5 0. 0825 0. 0827 0. 162 96. 13
2. 5 0. 0825 0. 0827 0. 162 96. 13 95. 93 1. 86
2. 5 0. 0825 0. 0827 0. 163 97. 34
2. 5 0. 0825 0. 0827 0. 162 96. 13
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Strait Pharmaceutical Journal Vol 25 No. 9 2013
表 4 加样回收率试验-对羟基苯甲酸乙酯
取样量
(mL)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
2. 5 0. 0675 0. 0674 0. 132 95. 70
2. 5 0. 0675 0. 0674 0. 133 97. 18
2. 5 0. 0675 0. 0674 0. 133 97. 18
2. 5 0. 0675 0. 0674 0. 133 97. 18 96. 93 0. 62
2. 5 0. 0675 0. 0674 0. 133 97. 18
2. 5 0. 0675 0. 0674 0. 133 97. 18
精密吸取已知含量的 18 号样品取样量的一半，共 6 份，
分别加入山梨酸对照品 0. 095mg，用 50%甲醇稀释后，按上述
色谱条件进行测定。计算回收率，结果(见表 5)。
表 5 加样回收率试验-山梨酸
取样量
(mL)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
0. 05 0. 081 0. 095 0. 172 95. 79
0. 05 0. 081 0. 095 0. 176 100. 00
0. 05 0. 081 0. 095 0. 178 102. 11
0. 05 0. 081 0. 095 0. 179 103. 16 101. 06 2. 80
0. 05 0. 081 0. 095 0. 178 102. 11
0. 05 0. 081 0. 095 0. 179 103. 16
2. 6 样品测定 在上述色谱条件下，对 9 个厂家生产的共
19 个批次的金银花露进行测定，结果(见表 6)。
表 6 样品中防腐剂测定结果
样品编号 苯甲酸(%)
对羟基苯甲酸乙酯
(%)
山梨酸
(%)
1 0. 077 － －
2 0. 076 － －
3 0. 003 0. 003 －
4 0. 041 － －
5 0. 068 － －
6 0. 070 － －
7 0. 075 － －
8 － － －
9 － － －
10 － － －
11 0. 035 － －
12 0. 037 － －
13 0. 039 － －
14 0. 075 － －
15 0. 077 － －
16 0. 003 － －
17 0. 003 － －
18 － － 0. 162
19 － － 0. 139
3 结果与讨论
9 个厂家生产的共 19 个批次的金银花露中，共 7 个厂家
生产的 16 个批次被检测出含有防腐剂苯甲酸、山梨酸、对羟
基苯甲酸乙酯的一种或两种。苯甲酸的含量为 0. 003% ～
0. 077%;对羟基苯甲酸乙酯的含量为 0. 003%;山梨酸的含
量为 0. 139%和 0. 162%。
生产批号为 100615、110403 和 100601 的金银花露中未
检测出上述 6 种防腐剂。经与生产厂家核实，湖北某厂家 D
在生产金银花露过程中没有添加防腐剂，其采用灌装后经高
温灭菌来保证产品质量。湖北某厂家 E 生产的批号为
100601的金银花露，在外标签中标示含有苯甲酸钠、尼泊金
乙酯(对羟基苯甲酸乙酯)，但本实验中却未检测出，按标准
检验微生物限度也不合格。
《中国药典》一部附录明确中药制剂中山梨酸和苯甲酸
的用量不得超过 0. 3%，对羟基苯甲酸酯类的用量不得超过
0. 05%。实验结果表明，无论是苯甲酸、山梨酸、还是对羟基
苯甲酸乙酯的添加量均符合要求。目前虽无标准规定金银花
露中可添加矫味剂、防腐剂的种类与用量，生产厂家也基本在
药品标签、说明书中不提及，仅 3 个厂家标签说明书中注明添
加的防腐剂种类。因此，为保证金银花露的质量稳定及用药
安全，建议在金银花露标签或说明书中注明添加剂或防腐剂
的使用情况。
参考文献
〔1〕鞠福龙，李春娟，李东刚 . 气相色谱-质谱联用法同时检测调味品
中 7 种防腐剂〔J〕. 中国调味品，2009，10(34):79-84.
〔2〕王萍，柳玉红 . 我国化妆品用防腐剂及分析方法的研究进展〔J〕.
环境与健康杂志，2007，24(7):557-559.
〔3〕王建辉，胡家庆，张欣荣，等 . 反相高效液相色谱法测定化妆品中
几种防腐剂〔J〕. 日用化学工业，2009，39(2):138-140.
〔4〕戴翔翎，凌亚，潘青华 . 高效液相色谱法测定丁香中防腐剂苯甲
酸钠含量〔J〕. 药物分析杂志，2005，25(12):1502-1503.
〔5〕汪辉，曹小彦，陈利国，等 . 高效液相色谱法同时测定蜜饯中五种
常见食品添加剂〔J〕. 分析实验室，2007，26(11):119-121.
〔6〕国家药典委员会 . 中国药典〔S〕. 一部 . 2005，附录ⅠH，ⅠJ.
〔7〕李秀婷 . HPLC法测定糖浆剂、合剂中的防腐剂〔J〕. 海峡药学，
2004，16(4):68-69.
〔8〕刘青，万一千，吴宏中，等 . 液相色谱法测定中药合剂、糖浆剂中
苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类防腐剂〔J〕. 中国卫生检验杂
志，2002，12(3):288-289.
〔9〕武婷，王超，王星，等 . 反相高效液相色谱法测定化妆品中 24 种防
腐剂〔J〕. 分析化学研究报告，2007，35(10):1439-1443.
〔10〕汪辉，曹小彦，李林，等 . 反相高效液相色谱法对果蔬汁饮料中
14 种常见食品添加剂的快速测定〔J〕. 分析化学研究报告，
2009，28(10):1194-1197.
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