全 文 ：岩黄连总碱提取物对小鼠免疫性肝损伤的改善作用
毕明刚 1＊ , 周　娟 2 , 许　扬1 , 孙　虹 1 , 季宇彬 2
(1.中国医学科学院药用植物研究所 , 北京　100094;2.哈尔滨商业大学 , 黑龙江 哈尔滨　150076)
摘要:目的　探讨岩黄连总碱提取物(CTFTAE)对
小鼠免疫性肝损伤的改善作用及其可能机制。方法
小鼠尾静脉 iv给予卡介苗和脂多糖制备免疫性肝
损伤 小 鼠 模型 。 注射 卡 介 苗 当 天 ip给予
CTFTAE0.26, 0.78和 2.34mg·kg-1 ,每天 1次 ,共
12 d。末次给药后尾静脉 iv给予脂多糖(7.5 μg),
16 h后检测小鼠血清谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨
酶(GOT)活性;HE染色 ,光镜下观察肝组织病理变
化;ELISA法检测血清干扰素 γ(IFN-γ)和白细胞介
素 4(IL-4)的含量 。 [ 3H] TdR掺入法测定 CTFTAE
体外对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响。结果　模
型组小鼠血清 GPT和 GOT活性较正常对照组明显
升高;CTFTAE0.26, 0.78和 2.34 mg·kg-1剂量组
血清 GPT活性较模型组明显降低 , GOT活性无明显
变化。模型组可见明显的肝细胞溶解坏死 , 而
CTFTAE0.78和 2.34 mg·L-1组肝细胞变性 、坏死
及炎症细胞浸润均明显减轻 。模型组小鼠血清
IFN-γ和 IL-4含量升高 , IL-4升高较明显 , IFN-γ/IL-
4比值降低;CTFTAE0.26, 0.78和 2.34mg·kg-1组
IL-4含量降低 , IFN-γ/IL-4 比值升高。 CTFTAE
15 ～ 1500mg·L-1体外单独应用可增强小鼠脾脏淋
巴细胞增殖反应 ,亦可增强刀豆蛋白 A诱导的脾淋
巴细胞增殖反应 。结论　CTFTAE对免疫性肝损伤
具有改善作用 ,其机制可能与其调节辅助性 T细胞
(Th)1/Th2平衡有关 。
关键词:岩黄连;生物碱;免疫性肝损伤;干扰素 γ;
白细胞介素 4
中图分类号:R285.5, R967
文献标识码:A
文 章 编 号:1000-3002(2009)01-0039-06
　
　　收稿日期:2008-06-25　接受日期:2008-09-27
　　作者简介:毕明刚 ,男(1970-),黑龙江省双鸭山市人 ,
副研究员 , 主要从事中药神经药理和免疫药理学研究。
　　＊联系作者　E-mail:mgbi@implad.ac.cn　Tel:(010)
62894867
DOI:10.3867/j.isn.1000-3002.2009.01.008
　　感染乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus, HBV)后 ,机
体的免疫反应决定着乙肝的发生 、发展与转归。正常
情况下 ,大多数免疫功能正常的成年个体 ,感染 HBV
后可通过天然免疫及适应性免疫应答的协调作用清
除病毒 ,并产生抗 HBV抗体。但 5% ～ 10%HBV感
染患者或自幼感染 HBV的人群不能有效地清除
HBV,导致病毒的持续感染及病毒在肝细胞内的复
制[ 1-3] 。故机体的免疫应答反应是感染 HBV后发生
肝脏损伤的内在因素[ 4] 。目前认为 ,机体对 HBV各
种抗原的完全或不完全的免疫耐受 ,使病毒不易被清
除 ,是造成 HBV感染慢性化的主要原因[ 5-6] 。
岩黄连(CorydalisthalictrifoliaFranch., CTF)亦
名石生黄堇[ 7] ,为紫堇科紫堇属多年生草本植物的
全草 ,产于贵州岩山上 。CTF性凉 ,味微苦 ,可清热
解毒 ,利湿 ,止痛止血 ,用于治疗火眼 、翳子 、痔疮出
血 、红痢和急性腹痛等[ 8] 。临床上也可用于肝炎的
治疗 [ 9-11] ,但其抗肝炎作用及其机制尚未见报道。
本研究根据乙型肝炎慢性化及肝细胞损伤的病理机
制 ,从免疫调节途径观察 CTF总生物碱提取物(CTF
totalalkaloidsextract, CTFTAE)对免疫性肝损伤的改
善作用及其机制。
1　材料与方法
1.1　动物 、药品 、试剂和仪器
ICR小鼠 , ♂,体重 18 ～ 22 g,购自北京维通利
华实验动物技术有限公司 , 动物许可证号:SCXK
(京)2002-0003,于室温 18 ～ 26℃,相对湿度 40% ～
70%的 SPF级动物房内饲养。
CTFTAE提取:岩黄连 10 kg用 60%乙醇回流提
取 3次 ,每次 2 h,过滤 ,合并滤液 ,减压回收 ,得乙醇
粗提物。将粗提物用适量的水溶解 ,上大孔吸附树脂
柱 ,用不同浓度的乙醇进行梯度洗脱 ,分别收集洗脱
液。将 50%乙醇洗脱液减压回收 ,得 CTFTAE。采用
·39·
中国药理学与毒理学杂志
ChinJPharmacolToxicol　　
2009年 2月;
2009　　Feb;　
23(1):39-44
23(1):39-44
紫外 -可见光检测法测定 CTFTAE中总生物碱含量为
52.0%。用生理盐水配制成 1.0g·L-1的母液 , 0.22
μm滤膜过滤除菌 ,分装 , 4℃保存备用。
联苯双酯(bifendate)滴丸 ,北京协和药厂 ,国药
准字 H11020980;RPMI-1640培养液 ,美国 Gibco公
司;卡介苗(baciluscalmete-guerin, BCG)冻干粉 ,北
京生物制品研究所;氚标胸腺嘧啶脱氧核苷([ 3H]
TdR),中国科学院原子能研究所;刀豆蛋白 A(con-
canavalinA, ConA), 脂多糖 (lipopolysaccharides,
LPS), Sigma公司;谷丙转氨酶 (glutamic-pyruvic
transaminase, GPT)和谷草转氨酶(glutamic-oxaloace-
tictransaminase, GOT)活性测定试剂盒 ,中生北控生
物科技股份有限公司;小鼠血清干扰素 γ(interferon-
γ, IFN-γ)和白细胞介素 4(interleukin-4, IL-4 )
ELISA试剂盒 ,美国 RapidBioLab。
日立(Hitachi)7060型全自动生化分析仪 ,日本
日立株式会社;MicroBetaTrilux1450微量液体闪烁
计数仪 ,美国 PerkinElmer公司;超净工作台 ,北京
半导体设备一厂;CO2培养箱 ,日本三洋公司;Multi-
skanAscent酶标仪 , 美国 ThermoElectron公司;
DEM-Ш型自动酶标洗板机 ,北京拓普分析仪器有
限责任公司 。
1.2　免疫性肝损伤小鼠模型的制备及分组
小鼠随机分成 6组 ,设正常对照组 、模型组 、联
苯双酯 (200 mg·kg-1 , ig)对照组和 CTFTAE
(0.26, 0.78和 2.34mg·kg-1 , ip)组 ,每组 8只 。除
正常对照组外 ,其余各组参考文献方法用 BCG和
LPS造成免疫性肝损伤 [ 2, 12] 。每只小鼠尾静脉 iv给
予 0.2 mLBCG约 7.5×105活菌 。各给药组在给予
BCG当天开始给药 ,正常对照组和模型组 ip给予等
体积生理盐水 ,每天 1次 ,共 12 d。各组小鼠在给予
BCG后 12div给予 LPS7.5 μg,禁食不禁水 , 16 h
后摘眼球取血 , 600×g离心 15 min,取血清。
1.3　血清 GPT和 GOT活性检测
分别采用 GPT和 GOT测定试剂盒用全自动生
化分析仪测定血清 GPT和 GOT活性 。
1.4　肝组织病理学观察
处死小鼠同时取小鼠肝左大叶 , 10%甲醛固定 ,
常规石蜡包埋 ,切片 , HE染色 ,依次经脱水 、透明和中
性树胶封片 ,光镜下观察肝组织病理变化 [ 3] 。
1.5　血清 IFN-γ和 IL-4浓度测定
按照试剂盒说明书采用双抗体夹心 ELISA法
测定血清 IFN-γ和 IL-4浓度。 IFN-γ和 IL-4浓度用
ng·L-1表示 。
1.6　小鼠脾淋巴细胞增殖反应测定
无菌制备小鼠脾细胞 , 用含 20%胎牛血清
RPMI-1640培养液调整细胞密度为 1010 L-1 ,取 100
μL细胞悬液与 50 μLConA(终浓度 2.0 mg·L-1)、
50 μL不同浓度 CTFTAE加入 96孔培养板内 ,对照
孔加等量 RPMI-1640培养液 , CTFTAE的终浓度分
别为 1.5, 15, 150和 1500 mg·L-1 ,每个浓度设 3个
复孔 ,置 37℃, 5%CO2孵温箱中孵育 56 h,每孔加
入 0.74kBq[ 3H] TdR(40 μL),继续培养至72h,以
多道细胞收集仪收集细胞至纤维滤膜上 ,干燥后将
滤膜置于闪烁液内 ,于液体闪烁计数仪测定每分钟
闪烁计数值。
1.7　统计学分析
结果数据以 x±s表示 ,组间比较采用 SPSS12.0
软件进行计量资料正态性检验 ,单因素方差分析
(one-way-ANOVA)和 Dunnett检验 。
2　结果
2.1　CTFTAE对免疫性肝损伤小鼠血清 GPT和
GOT活性的影响
表 1可见 ,模型组小鼠血清 GPT和 GOT活性较
Tab1.　EfectofCorydalisthalictrifoliaFranch.
totalalkaloidsextract(CTFTAE)onserumactivi-
tiesofGPTandGOTinmicewithimmunehepatic
injuryinducedbyBCGandLPS
Group Dose/mg·kg-1
GPT　
/U·L-1　
GOT　
/U·L-1　
Normal 32±8 148±17
Model 157±66＊＊ 290±70＊＊
Bifendate 200 75±20## 252±44
CTFTAE 　0.26 92±35# 249±46
　0.78 81±30# 237±30
　2.34 86±27# 245±29
Themousemodelwithimmunehepaticinjurywaspreparedwith
bacilusCalmete-Guerin(BCG)andlipopolysaccharides(LPS,
7.5 μg, at12dafterBCG).AfterBCGinjection, CTFTAE(ip)
andbifendate(ig)weregivenoncedailyfor12 d, respectively.
Theserumactivitiesofglutamic-pyruvictransaminase(GPT)and
glutamic-oxaloacetictransaminase(GOT)weredetermined16 h
afterLPSinjection.Normalandmodelgroupswereinjected(ip)
salinesolution. x±s, n=8.＊＊P<0.01, comparedwithnormal
group;#P<0.05, ##P<0.01, comparedwithmodelgroup.
·40· ChinJPharmacolToxicol　2009　Feb;23(1)
正常对照组明显升高;联苯双酯和 CTFTAE各剂量
组血清 GPT活性较模型组明显降低 , GOT活性均无
明显变化。
2.2　CTFTAE对免疫性肝损伤小鼠肝脏组织病理
变化的影响
如图 1所示 ,模型组可见明显的肝细胞溶解坏
死 ,主要分布于肝小叶下静脉周围。小部分肝小叶
只有范围较小的点状坏死 ,大部分肝小叶有范围较
大的带状或灶状坏死 。肝细胞坏死灶内 、肝窦内及
汇管区可见大量炎症细胞浸润 , 伴充血和水肿 。
CTFTAE2.34 mg·kg-1组与模型组比较 ,可见肝组
织病理变化趋于好转 ,肝细胞变性 、坏死及炎症细胞
浸润均明显减轻 , 并有新生细胞出现;CTFTAE
0.78mg·kg-1组和联苯双酯组亦可见上述病理变
化减轻;而 CTFTAE0.26 mg·kg-1组无明显上述改
善。
2.3　CTFTAE对免疫性肝损伤小鼠血清 IFN-γ和
IL-4含量的影响
由表 2可见 ,模型组小鼠血清 IFN-γ含量较正
常对照组升高;与模型组比较 ,联苯双酯对 IFN-γ含
量无明显影响 , CTFTAE0.26, 0.78和 2.34mg·kg-1
组血清 IFN-γ含量均明显降低。模型组小鼠血清
IL-4含量较正常对照组升高更为明显;与模型组比
较 ,联苯双酯和 CTFTAE0.26, 0.78和2.34mg·kg-1
组血清 IL-4含量均降低 。模型组 IFN-γ/IL-4值较
正常对照组明显降低 ,联苯双酯和 CTFTAE各剂量
组 IFN-γ/IL-4比值均较模型组明显增加 , CTFTAE
2.34 mg·kg-1剂量组增加更为明显 。
Fig1.EffectofCTFTAEonhepatichistopathologicalchangesofmicewithimmunehepaticinjury(HE
staining, ×100).SeeTab1 forthetreatments.A:normal;B:model;C:bifendate200mg·kg-1;D:CTFTAE0.26 mg·kg-1;
E:CTFTAE0.78 mg·kg-1;F:CTFTAE2.34 mg·kg-1.
Tab2.　EffectofCTFTAEonserumcontentsofinterferon-γ(IFN-γ)andinterleukin-4(IL-4)inmicewith
immunehepaticinjuryinducedbyBCGandLPS
Group Dose/mg·kg-1 IFN-γ/ng·L-1 IL-4/ng·L-1 IFN-γ∶IL-4
Normal 44.9±7.1 9.4±1.9 5.1±1.4
Model 55.7±5.9＊＊ 25.9±5.0＊＊ 2.2±0.3＊＊
Bifendate 200 52.1±7.3 20.5±3.9# 2.6±0.5#
CTFTAE 0.26 48.8±5.5# 19.6±3.9# 2.6±0.6#
0.78 43.9±6.2## 17.2±2.0## 2.7±0.7#
2.34 46.3±7.5# 14.9±3.1## 3.2±0.6##
SeeTab1 forthetreatments. x±s, n=8.＊＊P<0.01, comparedwithnormalgroup;#P<0.05, ##P<0.01, comparedwithmodelgroup.
·41·中国药理学与毒理学杂志　　2009年 2月;23(1)
2.4　CTFTAE体外对正常小鼠脾淋巴细胞增殖反
应的影响
CTFTAE15 ～ 1500 mg·L-1均可增强脾脏淋巴
细胞增殖反应;与 ConA合用时亦可增强 ConA诱
导的脾淋巴细胞增殖反应(表 3)。
Tab3.　EffectofCTFTAEonsplenocyteprolifer-
ationinducedbyconcanavalinA(ConA)inmice
CTFTAE
/mg·L-1
[ 3H] TdRincorporation/cpm
WithoutConA　 WithConA　　
0 2254±41 4124±34
1.5 2325±16 4009±18
15 2629±26＊＊ 5376±344＊＊
150 2610±23＊＊ 5874±231＊＊
1500 2626±23＊＊ 5279±348＊＊
Splenocytes(106 perwell)wereincubatedwithCTFTAEaccom-
paniedwithorwithoutConA 2.0 mg·L-1 for72 h. x±s,
n=3.＊＊ P<0.01, comparedwithcorespondingcontrol(0
mg·L-1)group.
3　讨论
BCG与 LPS联合诱导的免疫性肝损伤 ,接近人
类慢性肝病的病理过程[ 13] ,在一定程度上可反映病
毒性肝炎肝细胞损伤机制。其损伤机制为 BCG首
先激活致敏 T淋巴细胞 ,尤其是致敏肝内枯否细胞
和巨噬细胞 ,并大量聚集于肝脏 。当注射 LPS后进
一步激活处于致敏状态的巨噬细胞使其释放大量细
胞毒性因子 ,如一氧化氮 [ 14] 、肿瘤坏死因子 、白细胞
介素 、自由基和白三烯等造成肝细胞损伤 。这种损
伤以弥漫性肝细胞炎症和坏死 、肉芽肿形成和易于
慢性化为特征 ,与临床慢性病毒性肝炎肝组织学特
征相似 。因此 , BCG和 LPS尾静脉联合注射诱导的
免疫性肝损伤模型 ,是目前研究病毒性肝炎免疫性
肝损伤机制较好的模型。
本研究结果表明 ,模型组血清 GPT和 GOT活性
较正常对照组明显升高 ,同时肝脏组织可见明显的
肝细胞溶解坏死 ,坏死灶内 、肝窦内及汇管区可见大
量炎症细胞浸润 ,并伴充血和水肿等病理改变 ,表明
免疫性肝损伤小鼠模型制备成功。 CTFTAE0.26,
0.78和 2.34 mg·kg-1剂量组血清 GPT活性较模型
组明显降低 , 0.78和 2.34mg·kg-1剂量组肝组织病
理变化减轻 ,肝细胞变性 、坏死及炎症细胞浸润均明
显减轻 ,并有新生细胞出现 ,提示 CTFTAE对免疫性
肝损伤具有一定的改善作用 。
已有研究表明 ,机体免疫状态是 HBV感染后病
情发展方向的决定因素 ,而辅助性 T细胞(helperT
cels, Th)应答类型与机体的免疫状态密切相
关[ 15] 。 IFN-γ和 IL-4分别是 Th1和 Th2类细胞因
子 , IFN-γ和 IL-4水平可间接反映 Th1和 Th2细胞
功能 。正常情况下 , Th1 /Th2处于动态平衡 , Th1/
Th2失衡则可造成不同病理状态 。Th1/Th2失衡是
制约机体有效清除病毒和病毒感染细胞的主要因素
之一 [ 16] 。以恢复 Th1 /Th2细胞平衡为目标的治疗
策略已经成为治疗某些慢性炎症性疾病和自身免疫
性疾病的一种新方法 [ 17 -18] 。已经证实 , HBV感染
诱导的不是单一的 Th1或 Th2改变 ,而是 Th1/Th2
失衡 [ 19] 。急性 HBV感染自限患者 ,针对循环病毒
的特异性 T细胞 ,普遍分泌的细胞因子类型为 Th1
型;而在感染转变为慢性病变的患者 ,细胞因子产生
少 ,大多为 Th2型 ,与病毒持续存在和疾病慢性化相
关[ 20] 。本研究结果表明 ,模型组血清 IFN-γ和 IL-4
含量较正常对照组升高 , IL-4升高更为明显 , IFN-γ/
IL-4比值降低 ,提示免疫性肝损伤小鼠 Th1 /Th2平
衡向 Th2方向漂移 , 这与临床 HBV患者表现一
致[ 21-22] 。 CTFTAE0.26, 0.78和 2.34mg·kg-1剂量
组血清 IFN-γ和 IL-4含量较模型组明显降低 , IL-4
降低更为明显 ,使二者比值降低 ,提示 CTFTAE对免
疫性肝损伤的改善作用可能与其调节 Th1/Th2平
衡有关。
宿主对 HBV抗原的免疫耐受很大程度上是细
胞免疫功能不足或缺陷引起的 ,临床研究也证实在
乙肝患者机体中存在着细胞免疫功能低下[ 23] 。
HBV一旦感染机体 , T淋巴细胞是清除细胞内病毒
最主要的效应细胞 。T细胞受抗原或丝裂原刺激后
分化增殖 ,产生特异性免疫应答过程 ,以抵抗细胞内
病毒 。本研究结果表明 , CTFTAE体外可增强脾脏
淋巴细胞增殖反应 ,并增强 T细胞丝裂原 ConA诱
导的脾 T淋巴细胞增殖反应 ,这进一步提示CTFTAE
可促进 T细胞增殖 ,有利于清除病毒 。
4　参考文献:
[ 1] 　MeulemanP, LibbrechtL, WielandS, DeVosR,
HabibN, KramvisA, etal.Immunesuppression
uncoversendogenouscytopathicefectsofthehepatitisB
virus[ J] .Virology, 2006, 80(6):2797-2807.
·42· ChinJPharmacolToxicol　2009　Feb;23(1)
[ 2] 　BlumbergBS. The curiosities ofhepatitisBvirus:
prevention, sexratio, anddemography[ J] .ProcAm
ThoracSoc, 2006, 3(1):14-20.
[ 3] 　FulerMJ, KhanolkarA, TeboAE, ZajacAJ.Mainte-
nance, loss, andresurgenceofTcellresponsesduring
acute, protracted, andchronicviralinfections[ J] .J
Immunol, 2004, 172(7):4204-4214.
[ 4] 　HuiCK, LauGK.ImmunesystemandhepatitisBvirus
infection[ J] .JClinVirol, 2005, 34(Suppl1):S44-
S48.
[ 5] 　KaoJH, ChenPJ, LaiMY, ChenDS.Genotypesand
clinicalphenotypesofhepatitisBvirusinpatientswith
chronichepatitisBvirusinfection[ J] .JClinMicrobiol,
2002, 40(4):1207-1209.
[ 6] 　KobayashiS, NishihiraJ, WatanabeS, TodoS.Pre-
ventionoflethalacutehepaticfailurebyantimacrophage
migrationinhibitoryfactorantibodyinmicetreatedwith
bacilleCalmette-Guerinandlipopolysaccharide[ J] .
Hepatology, 1999, 29(6):1752-1759.
[ 7] 　XiaJZ.IdentificationofakindoffalseCoptischinensis
Franch.[ J] .PrimaryJChinMaterMed(基层中药杂
志), 2001, 15(5):36.
[ 8] 　XiaJZ. Comparison ofthin layerchromatography
betweenCorydalisthalictrifoliaFranch.and Coptis
chinensisFranch.[ J] .PrimaryJChinMaterMed(基
层中药杂志), 2002, 16(1):36.
[ 9] 　RenZX. Analysisoftherapeuticeffecton33 cases
ofviralhepatitiswithCorydalisthalictrifoliaFranch.
[ J] .ClinFocus(临床荟萃), 2003, 18(2):94-95.
[ 10] 　LiuH, LvZ.Clinicalobservationofchronichepatitis
treatmentwithCorydalisthalictrifoliaFranch.[ J] .Chin
JSynthMed(中华综合医学杂志), 2005, 6(20):
138-139.
[ 11] 　XuCF.Analysisoftherapeuticeffecton120 casesof
chronichepatitisBwithYanhuanglianinjection[ J] .J
ClinInternMed(临床内科杂志), 2004, 21(6):424.
[ 12] 　XuSY, BianRL, ChenX.MethodologyofPharmaco-
logicalExperiment(药理实验方法学)[ M] .3 rded.
Beijing:People′sHealthPublishingHouse, 2005:
1348-1350.
[ 13] 　KawamuraK, BaharR, NatsumeW, SakiyamaS,
TagawaM.Secretionofinterleukin-10 from murine
coloncarcinomacelssuppressessystemicantitumorim-
munityandimpairsprotectiveimmunityinducedagainst
thetumors[ J] .CancerGeneTher, 2002, 9(1):109 -
115.
[ 14] 　HeremansH, DilenC, GroenenM, MathysP, Biliau
A.Roleofinterferon-gammaandnitricoxideinpulmo-
naryedemaanddeathinducedbylipopolysaccharide
[ J] .AmJRespirCritCareMed, 2000, 161(1):110-
117.
[ 15] 　FerrariC, PennaA, BertoletiA, ValliA, AntoniAD,
GiubertiT, etal.Celularimmuneresponsetohepatitis
Bvirus-encodedantigensinacuteandchronichepatitis
Bvirusinfection[ J] .JImmunol, 1990, 145(10):
3442-3449.
[ 16] 　YaoXS.StudydevelopmentofTh1 andTh2 cells[ J] .
ForeignMedSci:Immunol(国外医学免疫学分册),
2002, 25(6):290-293.
[ 17] 　 PrescottSL, DunstanJA. Immunedysregulationin
allergicrespiratorydisease:theroleofTregulatorycels
[ J] .PulmPharmacolTher, 2005, 18(3):217-228.
[ 18] 　BrunetLR, HuntJ, RookGA.Dangersoftherapeutic
manipulationoftheTh-Th2 balance[ J] .TrendsImmu-
nol, 2002, 23(3):127-128.
[ 19] 　LiL, GuCH. Relationship betweenthebalanceof
TH1/TH2cellsandviralhepatitis[ J] .ImmunolJ(免
疫学杂志), 2001, 17(3):235-237, 239.
[ 20] 　OsnaN, SilonovaG, VilgertN, HaginaE, KuseV,
GiedraitisV, etal.ChronichepatitisC:T-helper1/T-
helper2 imbalancecouldcauseviruspersistencein
peripheralblood[ J] .ScandJClinLabInvest, 1997,
57(8):703-710.
[ 21] 　LiuJ, ShengJF.StudyonTh1/Th2 cytokinesinserum
ofchronichepatitisBpatients[ J] .IntJEpidemiolIn-
fectDis(国际流行病学传染病学杂志), 2006, 33
(1):15-18.
[ 22] 　ZhaoYR, ZhengJ, ZhangSL.StudyofTh1/Th2 cell
disturbanceinchronicHBVinfection[ J] .JFourthMil
MedUniv(第四军医大学学报), 2005, 25(5):468 -
470.
[ 23] 　HuWW, ZangGQ.Researchadvancemntofimmuno-
pathogenesismechanism inhepatitisB[ J] .IntJ
EpidemiolInfectDis(国际流行病学传染病学杂志),
2007, 34(4):270-273.
·43·中国药理学与毒理学杂志　　2009年 2月;23(1)
ImprovingefectoftotalalkaloidsextractfromCorydalisthalictrifolia
Franch.onimmunehepaticinjuryinmice
BIMing-Gang1＊ , ZHOUJuan2 , XUYang1 , SUNHong1 , JIYu-Bin2
(1.InstituteofMedicinalPlantDevelopment, ChineseAcademyofMedicalSciences, Beijing　100094, China;
2.HarbinUniversityofCommerce, Harbin　150076, China)
Abstract:AIM　Toinvestigatetheimproving
efectofCorydalisthalictrifoliaFranch.total
alkaloidsextract(CTFTAE)onimmunehepatic
injuryinmiceanditspossiblemechanism.
METHODS　Themousemodelwithimmune
hepaticinjurywaspreparedbyinjectingbacil-
lusCalmete-Guerin(BCG)andlipopolysac-
charides(LPS)throughtailveins.Onthesame
daywhenBCGinjected, CTFTAE(0.26, 0.78
and2.34 mg·kg-1 , respectively)wasipgiv-
en, oncedaily, for12d.ThenLPS(7.5 μg)
wereinjectedthroughtailveinsonthelastday
ofCTFTAEtreatment.After16 h, theactivi-
tiesofglutamic-pyruvictransaminase(GPT)
andglutamic-oxaloacetictransaminase(GOT)
weredeterminedinserum, andthepathological
changesinlivertissuewereobservedunder
lightmicroscope.Thecontentsofinterferon-γ
(IFN-γ)andinterleukin-4(IL-4)inserum
weredetectedbyELISA.Inaddition, theefect
ofCTFTAEonsplenocyteproliferationinvitro
wasobservedby[ 3H] TdRincorporationassay.
RESULTS　TheactivitiesofGPTandGOTin
serumwereobviouslyincreasedinmodelgroup
thanthatinnormalcontrolgroup.Compared
withmodelgroup, GPTactivityobviouslyde-
creasedinCTFTAE0.26, 0.78and2.34mg·
kg-1groups, butGOTactivityhadnosignifi-
cantchange.Itwasobservedthatsomeliver
celsobviouslydissolvedandnecrotizedinmod-
elgroup, andCTFTAE 0.78 and2.34 mg·
kg-1 aleviatedthehepaticceldegeneration,
necrosisandinflammatorycellinfiltration.The
serumcontentsofINF-γandIL-4 increasedin
modelgroupcomparedwithnormalgroup, and
IL-4 contentincreasedmoresignificantly, and
theIFN-γ/IL-4 declined. CTFTAE 0.26,
0.78and2.34 mg·kg-1 reducedthecontentof
IL-4, andelevatedtheratioofIFN-γ/IL-4.
Furthermore, CTFTAE 15 -1500 mg· L-1
couldincreasesplenocyteproliferationinvitro
bothusedaloneandcombinedwithconcanaval-
inA.CONCLUSION　CTFTAEcanaleviate
theimmunehepaticinjury, whichmayberelat-
edwithitsregulationofthebalancebetween
helperTcells(Th)1 andTh2.
Keywords:CorydalisthalictrifoliaFranch.;
alkaloids;immunehepaticinjury;interferon-
γ;interleukin-4
　
　　＊Correspondingauthor.
(本文编辑　齐春会)
·44· ChinJPharmacolToxicol　2009　Feb;23(1)