全 文 ：书沙枣叶化学成分的ＨＰＬＣ分析
　收稿日期：２０１２－０３－１６
　项目来源：榆林市科技局科研计划项目“榆林市优良绿化植物的引进、繁殖技术研究与示范”（项目编号：Ｎｙｇｇ２００８１４）。
　作者简介：王晓荣（１９６８－ ），女，陕西佳县人，教授，硕士，主要从事观赏植物及花卉学的教学及科研工作。
王晓荣１，魏朔南２，李薇薇３
（１．榆林学院，陕西 榆林　７１９０００；２．西北大学，陕西 西安　７１００００；３．第四军医大学，陕西 西安　７１００００）
摘　要：通过对沙枣叶子 ＨＰＬＣ色谱条件的选择和优化，确定了沙枣叶 ＨＰＬＣ分析条件：流动相比例为
乙腈∶水（７∶９３ｖ／ｖ）；流速：０．３ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长２４０ｎｍ；柱温：３５℃；进样量为１０ｕｌ；分析时间为８０ｍｉｎ。
对主要色谱峰的保留时间和峰面积等色谱参数进行分析，结果表明各相关指标符合 ＨＰＬＣ指纹图谱的评价
标准。为沙枣叶子的指纹图谱研究提供了参考，进一步为沙枣的种质资源合理开发利用提供理论依据。该
法操作简单，重复性好，可行性高。
关键词：沙枣叶片；ＨＰＬＣ；指纹图谱
　　沙枣（Ｆｌａｅａｇｎｕｓ　ａｎｇｕｓｔｉｆｏｈａ　Ｌ）是胡颓子
科胡颓子属的落叶小乔木或灌木，高４－１５ｍ，喜
光，叶和幼枝披银白色表皮毛，背面较密，叶矩圆
状披针形至狭披针形，先端尖或钝，基部宽楔
形［１］，两面均有白色鳞片，下面较密成银白色，侧
脉不显著。叶柄长８－１０ｃｍ，枝有棘刺。沙枣叶
片中含有各种营养成分，具有较高的经济价值。
据测定，叶片含蛋白质４．０％、脂肪２．４％、糖
１５．７％，脂肪和糖的含量高于苜蓿［２］。而在其干
叶中含蛋白质１５．７％，粗脂肪６．５％，无氮浸出物
１７．４％，另外还含有黄酮成分。因此，沙枣叶子晒
干粉碎后常作为粗饲料喂猪，也可圈养羊、驼、兔
子等。由于小沙枣叶即使枯黄也不易脱落，牲畜
只能采食到树下部部分枝叶，而大部分叶子牲畜
无法采食。大沙枣叶枯黄即脱落于地，因落叶时
间过于集中，牲畜一时利用不完造成浪费。此外，
枯黄后自然脱落的沙枣叶，营养价值较青绿的大
为降低［４］。
近年来有关沙枣的研究主要集中在营养成分
和提取以及产品的开发利用方面，刘晔玮等人
（２００６）对沙枣叶中黄酮含量测定方法进行了研
究，刘清等人（２００６）用原子吸收光谱法测定了沙
枣叶中矿物元素，得出：沙枣叶中铁、锌、锰、铜含
量在不同生长时期差异明显，其他几种元素含量
均丰富，并且微波消化的效果优于湿法消化［５］。
而有关沙枣叶 ＨＰＬＣ指纹图谱研究却未见报道。
本实验对沙枣的叶子的 ＨＰＬＣ分析条件参数进
行了选择优化，以期为沙枣的指纹图谱研究提供
参考；进一步为沙枣的种质资源评价提供理
论依据。
１　材料、仪器与试剂
１．１　试验材料
沙枣叶子采自榆林市。
１．２　仪器
日本岛津 ＬＣ－１０ＡＴｖｐ高效液相色谱仪，
ＳＰＤ－１０Ａｖｐ检测器，Ｃｌａｓｓ－ ＶＰ工作站，紫外
分光光度计（ＰＥＲＫＩＮＥＬＭＥＲ），色谱柱Ｄｉａｍｏｎ－
ｓｉｌ　Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ，５μｍ）、ＳＥＮＣＯＲ系列旋
转蒸发仪，ＳＨＢ－Ⅲ循环水多用真空泵，ＫＨ－
２００ＫＤＥ型高功率数控超声波清洗器，ＴＢ－１１４
型电子分析天平，Ｍｉｌｉｐｏｒｅ超纯水仪，ＺＮ－０２小
型高速粉碎机。
１．３　试剂
乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）均购于天津化
学试剂厂，水为超纯净水，其它试剂均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　样品溶液的制备
精确称取粉碎好的沙枣叶样品４０ｇ，将其放
人干燥洁净的烧杯中，加人５０％乙醇溶液１００
ｍｌ，于常温（２５℃）下浸泡３０ｍｉｎ；用超声波提取
３０ｍｉｎ；取出超声液离心，４　０００ｒ，１０ｍｉｎ；将离心
后的上清液过滤，加石油醚于滤液中（石油醚：滤
液１∶２，Ｖ／Ｖ）萃取１ｈ，弃掉上层，取萃取液下层
于旋转蒸发仪６０℃蒸干后用甲醇溶解后定容至
５０ｍｌ容量瓶中，过 ０．２２ｕｍ 的滤膜后进行
ＨＰＬＣ分析。流程图见图１。
·６６· 陕　西　农　业　科　学 ２０１３（１）
书图１　样品制作流程
２．２　色谱条件的建立
经分别对流动相体系、流动相体系比例、流
速、检测波长、柱温等进行选择和优化，确定色谱
条件为：流动相为乙腈∶水（５∶９５ｖ／ｖ）；流速：
０．３ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长２４０ｎｍ；柱温：３５℃；进样
量为１０ｕｌ。
２．３　空白试验
取“溶液的制备”项下所用甲醇为空白溶液，
按上述色谱条件进样分析（结果见图２）。结果表
明：保留时间位于０－１０ｍｉｎ为空白溶剂峰。
图２　空白试验
２．４　方法学考察
２．４．１稳定性试验　取同一供试品溶液，分别在
０ｈ、１ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、１２ｈ进行检测，考察色谱峰
相对保留时间的一致性，各主要色谱峰相对保留
时间和相对峰面积的 ＲＳＤ均小于３％，符合规
定，表明供试品稳定性良好。
２．４．２　精密度试验　取同一供试品溶液，连续进
样６次，各主要共有峰相对保留时间的ＲＳＤ均小
于１．５％，符合规定，表明供试品进样精密度
良好。
２．４．３　重复性试验　取同一供试品溶液，按“溶
液制备”制备５份供试品，平行测定，各色谱峰相
对保留时间的ＲＳＤ均小于３％，表明本法测定的
重现性良好。
２．５　叶子 ＨＰＬＣ分析
（１）按 “样品溶液的制备”方法制备供试品溶
液，按２．２项下色谱条件进行 ＨＰＬＣ分析，结果
见图３。
　　（２）指纹图谱参数考察。对主要色谱峰的保
留时间、峰面积等指纹图谱参数进行了分析（见表
１），结果表明，各相关指标符合指纹图谱评价
标准。
图３　色谱分析结果
３　讨论与结论
（１）刘晔玮等人研究了沙枣叶中总黄酮最佳
提取条件为乙醇浓度为７０％，固液比（ｇ／ｍｌ）为
１∶４０，提取两次，每次２０ｍｉｎ。平均回收率为
９８．８％，ＲＳＤ为１．３４％［３］。实验表明，沙枣叶子
中水溶性成分的最佳提取工艺为５０％乙醇、超声
６０ｍｉｎ、６０℃旋转蒸发温度。
（２）中药是依靠其所含有的多种化学成分发
挥综合的医疗作用，这是与化学合成药最根本的
区别，现在已逐渐得到人们的认同。因此凭借某
一种化学成分定性和定量的传统中药质量评价方
法的有效性和专属性逐渐受到质疑。因为任何单
·７６·王晓荣等：沙枣叶化学成分的 ＨＰＬＣ分析
书一的活性成分或指标成分都难以有效的评价中药
的真伪优劣。如果所检测的指标成分（活性成分）
是多种中药的共性成分，则更降低了鉴别的准确
性和专属性。随着客观需要和现代认识论的影
响，人们逐渐考虑利用现代先进分析技术分析不
同药材的整体特征以提高鉴别的准确性，近年来
备受关注的指纹图谱的概念即植根于此。ＨＰＬＣ
指纹图谱是可量化的鉴别手段，是当前符合中药
特色的评价中药真实性、稳定性和一致性的质量
控制模式之一。
表１　沙枣叶 ＨＰＬＣ色谱峰的主要参数
峰号
ｎ
（次）
相对保留时间
（ｍｉｎ）
相对峰面积
Ｓ
平均相对保留时间
（ｍｉｎ）
平均相对峰
面积积分值
１
１　 ８．９０６　 ３９８　９０１．７
２　 ８．９１０　 ３９８　９０２．０
３　 ８．９２１　 ３９８　９０１．８
８．９１２３　 ３９８　９０１．８３
２
１　 １０．２０３　 １１２　５８２．６
２　 １０．２１２　 １１２　５８２．９
３　 １０．２０９　 １１２　５８３．５
１０．２０８　 １１２　５８３．００
３
１　 １１．７２８　 ３５７　７９９．４
２　 １１．７９８　 ３５７　７９８．９
３　 １１．８００　 ３５７　７９９．３
１１．７７５３　 ３５７　７９９．２０
４
１　 １６．６３０　 ２２　５５６．２
２　 １６．６５８　 ２２　５５５．７
３　 １６．７１９　 ２２　５５６．０
１６．６６９　 ２２　５５５．９７
５
１　 １７．９５８　 ２１　８４２．７
２　 １７．９１０　 ２１　８４３．６
３　 １７．８９９　 ２１　８４３．０
１７．５８９　 ２１　８４３．１０
６
１　 ２３．５１０　 １７２　３８１．９
２　 ２３．４０１　 １７２　３８０．２
３　 ２３．９１１　 １７２　３８０．８
２３．６０７３　 １７２　３８０．９７
７
１　 ２５．４２７　 １１５　６９１．５
２　 ２５．５００　 １１５　６９２．０
３　 ２５．４５９　 １１５　６９１．３
２５．４６２０　 １１５　６９１．６０
８
１　 ６２．７９１　 １８７　６４７．４
２　 ６２．８０７　 １８７　６４６．８
３　 ６２．７５４　 １８７　６４７．９
６２．７５６　 １８７　６４７．３３
　　实验通过流动相及其比例、流速、检测波长等
实验的系统研究，所建立的沙枣叶子 ＨＰＬＣ研究
方法稳定性、精密度、重复性实验的 ＲＳＤ 均在
０．０５％－０．３７％，根据沙枣叶子 ＨＰＬＣ液相色谱
图及各色谱峰参数考察可见，该方法所得８个色
谱峰稳定性较好、吸收性较强、特征较明显，各参
数均符合指纹图谱评价标准，具有操作简单，准确
度、灵敏度高，精密度好，易于采用。为沙枣叶指
纹图谱的进一步研究提供了理论依据。
参 考 文 献：
［１］　辛艳伟．沙枣的开发和利用［Ｊ］．安徽农业科学，
２００７，３５（２）：３９９－４００；４０２．
［２］　于玮玮．阎国荣．沙枣的资源及研究现状［Ｊ］．天津农
学院学报，２００９，１６（２）：４６－４９．
［３］　刘晔玮．王勤．宋海等．沙枣叶中总黄酮的含量测定
方法研究［Ｊ］．现代中药研究与实践，２００６，２０（１）：
４２－４４．
［４］　聂小兰．沙枣的研究现状及展望［Ｊ］．北方园艺，
２００７，（４）：６７－６９．
［５］　刘清．黄海涛．刘琼等．原子吸收光谱法测定沙枣叶
中矿物元素［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２００６，１６（１０）：
１　１６３－１　２００．
·８６· 陕　西　农　业　科　学 ２０１３（１）