全 文 ：第 32卷第 2期
2010年 3月
南　京　工　业　大　学　学　报　(自 然 科 学 版)
JOURNALOFNANJINGUNIVERSITYOFTECHNOLOGY(NaturalScienceEdition)
Vol.32No.2
Mar.2010
doi:10.3969/j.issn.1671-7627.2010.02.020
HPLC-MS/MS法测定岩黄连提取物中
脱氢卡维丁的含量
王　娟 ,杜　宇 ,任　真 ,何学军 ,乔红群
(南京工业大学 药学院 ,江苏 南京 210009)
收稿日期:2009-09-08
作者简介:王　娟(1984—),女 ,山东济南人 ,硕士 ,主要研究方向为药物分析;乔红群(联系人),副教授 , E-mail:qiaohongqun@sina.com.
摘　要:采用高效液相色谱电喷雾离子化质谱法分离并测定岩黄连提取物中脱氢卡维丁的含量.色谱采用 XTerra
MSC18柱(100mm×2.1mm, 5μm), 以 0.1%甲酸水溶液 -甲醇为流动相 , 梯度洗脱 ,流速为 0.2mL/min.质谱采用
三重四级杆的质谱仪 ,电喷雾离子源 ,正离子扫描方式 , 以多反应离子监测(MRM)模式进行定量检测.结果表明 ,
脱氢卡维丁在 0.2～ 200ng/mL(r=0.999 5)范围内呈良好线性关系 , 平均加样回收率为 99.29%, 相对标准偏差
(RSD)为 2.4%.
关键词:HPLC-MS/MS;岩黄连;提取物;脱氢卡维丁
中图分类号:R917　　　文献标志码:A　　　文章编号:1671-7627(2010)02-0094-04
Determinationofdehydrocavidineinextractionsof
CorydalissaxicolaBuntingbyHPLC-MS/MS
WANGJuan, DUYu, RENZhen, HEXue-jun, QIAOHong-qun
(ColegeofPharmaceuticalSciences, NanjingUniversityofTechnology, Nanjing210009, China)
Abstract:Toestablishahighperformanceliquidchromatography-massspectrometry/massspectrometry
(HPLC-MS/MS)methodforthecontentdeterminationofdehydrocavidineintheextractionsofCoryd-
alissaxicolaBunting.HPLCwasperformedontheXTerraMSC18 column(100 mm×2.1 mm, 5μm)
withthe0.1% formate-acidsolution-methanolasthemobilephase.Theflowratewas0.2mL/minwith
gradientelution.Themassspectrometrydetectionwasperformedontheeletronspraytandemmassspec-
truminthepositivemodeandoperatedinpositive-ionizationmode, andmultiplereactionmonitorwas
usedtodetectthegranisetronconcentration.Theresultindicatedthatdehydrocavidinehadalinearrela-
tionshipwithintherangeof0.2 ～ 200 ng/mL(r=0.999 5).Theaveragerecoverywas99.29% and
RSDwas2.4%.
Keywords:HPLC-MS/MS;CorydalissaxicolaBunting;extraction;dehydrocavidine
　　岩黄连又名石生黄堇 ,紫堇科紫堇属多年草本
植物 [ 1] ,具有清热 、抗菌 、消炎 、镇痛和提高免疫力
等作用[ 2] .岩黄连的有效成分为总生物碱 , 包括卡
维丁 、消旋岩黄连碱 、岩黄连碱 、四氢巴马丁等 [ 3] ,
主要活性成分为脱氢卡维丁 ,它对金黄色葡萄球菌 、
乙型溶血性链球菌 、白喉杆菌有抑制作用 , 对耐青
霉素的白色和金黄色葡萄球菌亦有抑制作用 , 并有
一定的镇静 、止痛作用 [ 4] .
由于岩黄连中部分生物碱性质相近 ,相对分子
质量相差不大 , 不容易分离 ,其含量测定多采用
HPLC-UV法 [ 5] ,该方法主要用来测定总生物碱的
含量 ,操作烦琐 ,专属性不强.笔者建立高效液相色
谱 -质谱(HPLC-MS/MS)法测定岩黄连中岩黄连碱
含量 ,该法可以快速 、灵敏、高效地测定岩黄连主要活
性成分脱氢卡维丁的纯度 ,为岩黄连质量控制提供依
据 ,也为以后的药代动力学提供血药浓度的检测方法.
1　材料与方法
1.1　仪器
2695型高效液相色谱仪(HPLC), Waters公司;
MicromassQuatroMicroAPI型三重四级杆质谱仪
(MS), ESI源 , Waters公司;MassLynx4.1工作站;
F3JN7743型纯水仪 , Milipore公司.
1.2　药品和试剂
脱氢卡维丁对照品 ,中国药品生物制品检定所;
拉呋替丁 ,质量分数 99.6%,成都宇洋高科技发展
有限责任公司;岩黄连提取物 ,湖北香连药业有限责
任公司;甲醇为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为
分析纯.
1.3　色谱条件
色谱方法参考文献 [ 6] .在流动相选择时比较
以下几种体系:甲醇 -水 、乙腈 -水 、乙腈 -水(含
磷酸二氢钾和十二烷基硫酸钠)、甲醇 -0.1%甲
酸 、乙腈 -0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液以及不同
浓度的磷酸二氢钾水溶液 ,最终流动相定为甲醇 -
0.1%甲酸水溶液.该流动相对柱温的变动较为敏
感 ,柱温的波动对保留时间有明显影响 ,在实验过程
中需注意保持稳定的柱温.
色谱柱为 XTerraMSC18柱(100mm×2.1mm,
5μm);以甲醇 -0.1%甲酸水溶液为流动相 ,梯度
洗脱条件见表 1,流速 0.2mL/min,柱温 20℃,进样
量 20μL.理论塔板数按脱氢卡维丁计算应不低
于3 000.
表 1　流动相梯度洗脱比例
Table1　Proportionofmobilephasegradientelution
时间 /min φ(甲酸水溶液)/% φ(甲醇)/%
0 ～ 1 80 20
≥1 ～ 6 40 60
≥6 ～ 10 80 20
1.4　质谱条件
电喷雾电离源(ESI)适合于分析中等极性到强
极性的化合物分子 ,大气压化学电离源(APCI)则适
合于弱极性或中等极性小分子的分析.根据脱氢卡
维丁的化学性质 ,笔者采用了 ESI电离方式.ESI源
正离子模式适合于分析碱性试样 ,特别是试样结构
中含有仲氨或叔氨时 ,可采用乙酸或甲酸对试样酸
化后进行分析;而负离子模式适合于分析酸性试样 ,
可用氨水或三乙胺对试样进行碱化后分析.脱氢卡
维丁呈碱性 ,所以选用正离子模式 ,即 ESI+扫描方
式.毛细管电压 3.0kV;锥孔气体电压 42V;源温
120℃;去溶剂气体温度350℃;碰撞气压30V.
1.5　对照品溶液和内标溶液的制备
称取脱氢卡维丁对照品约 10mg,置于 100mL
容量瓶中 ,用甲醇溶解并定容 ,制成脱氢卡维丁储
备液 ,临用时以流动相稀释至所需浓度.另称取拉
呋替丁约 10mg,置于 100mL容量瓶中 ,甲醇溶解
并定容 ,制成内标储备液 ,临用时以流动相稀释至
所需浓度.
1.6　供试品溶液的制备
精密称取岩黄连提取物10mg,置于 100mL容量
瓶中 ,以甲醇溶解超声处理 20min,定容摇匀 ,过滤
(0.45μm),取滤液作为供试品溶液.
2　结果与分析
2.1　试样和内标物质谱扫描图
在建立的色谱 -质谱条件下采用多反应离子监
测(MRM)进行离子方式监控 ,用于检测的离子脱氢
卡维丁 m/z[ M+H] +:350.3※334.3,拉呋替丁 m/
z[ M+H] +:432.1※351.3 ,结果见图 1、图 2.
2.2　试样和内标物的色谱行为
在建立的色谱 、质谱条件下 ,以对照品和供试品
溶液分别进行测定 ,色谱 -质谱图见图 3.
2.3　线性关系考察
精取脱氢卡维丁对照品储备液 ,流动相稀释成
含脱氢卡维丁 0.2、1、5、25、50、100、200ng/mL的系
列溶液 , 按上述色 、质谱条件进行测定 , 进样量
20μL.以脱氢卡维丁对照品与内标的峰面积的比值
(Y)为纵坐标 ,对照品质量浓度(ρ)为横坐标进行线
性回归 ,求得回归方程 Y=0.035ρ-0.031 5(r=
0.999 5).结果表明 , 脱氢卡维丁浓度在 0.2 ～
200ng/mL范围内线性关系良好.
2.4　进样精密度实验
取脱氢卡维丁50ng/mL对照品溶液 ,按上述色 、
质谱条件 ,重复进样 6次 ,测定其峰面积 ,计算其相
对标准偏差(RSD)为 1.0%.
95　第 2期 王　娟等:HPLC-MS/MS法测定岩黄连提取物中脱氢卡维丁的含量
图 1　脱氢卡维丁对照品质谱图
Fig.1　Dehydrocavidinecontrastingmassspectra
图 2　拉呋替丁全扫描质谱图
Fig.2　Lafutidinefulscanmassspectra
图 3　脱氢卡维丁色谱 -质谱图
Fig.3　Dehydrocavidinechromatogram-massspectra
2.5　溶液稳定性实验
取同一种供试品溶液 ,于 0、0.5、1、2、5、8、24h
分别进样 20μL,以供试品与内标峰面积的比值考
察溶液稳定性 ,其 RSD为 1.4%.结果表明 ,供试品
溶液在 24h内稳定.
2.6　重复性实验
分别取同一批岩黄连提取物试样 6份 ,按 2.4
节方法制备供试品溶液 ,按上述色 、质谱条件测定并
96 南　京　工　业　大　学　学　报　(自 然 科 学 版) 第 32卷　
用内标标准曲线法分别计算质量分数.测得脱氢卡
维丁平均质量分数为 7.52%, RSD=1.1%.结果表
明 ,该方法重复性较好.
2.7　加样回收率实验
称取 9份脱氢卡维丁质量分数为 7.50%的岩
黄连提取物约 1.35g,分别加入相当于试样中脱氢
卡维丁质量分数 80%、100%、 120%的对照品 ,甲
醇溶解 ,流动相稀释后 ,按上述色 、质谱条件进行
测定.将其代入回归方程 ,计算加样回收率 , 结果
见表 2.
表 2　脱氢卡维丁加样回收率实验(n=9)
Table2　Dehydrocavidineresultofrecoverytest(n=9)
w/% m(岩黄连)/g m1 /mg m2 /mg m测 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD/%
1.350 1 10.06 8.05 17.88 97.71
80 1.345 8 10.03 8.02 17.75 97.01
1.361 0 10.14 8.11 18.11 98.62
1.343 5 10.01 10.01 19.89 98.70
100 1.348 2 10.04 10.04 20.47 103.99 99.29 24
1.356 1 10.10 10.10 20.32 101.19
1.349 6 10.05 12.06 22.15 100.40
120 1.352 5 10.08 12.10 21.78 96.03
1.355 7 10.10 12.12 22.23 100.10
　　　　　　注:w为外加的相当于岩黄连试样中脱氢卡维丁的质量分数;m
1
为所取岩黄连试样中脱氢卡维丁的
质量;m2为外加脱氢卡维丁的质量;m测 为色谱 、质谱测得的脱氢夫维丁质量.
2.8　含量的测定
取岩黄连提取物 ,按 2.4节方法制备供试品溶
液 ,按上述色 、质谱条件进行分析.以内标法标准曲
线法计算供试品中脱氢卡维丁的平均质量分数为
7.45%, RSD为 1.3%.
3　结　论
本次实验建立的高效液相色谱电喷雾离子化质
谱法 ,符合分析方法学的要求 ,适用于测定岩黄连提
取物中脱氢卡维丁的含量.
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