全 文 ：2009年 5月第 5期　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　
苎麻叶酚酸组分抗炎作用及其机理研究■
天然产物开发与利用湖北省重点实验室 三峡大学化学与生命科学院(宜昌 443002)
张宏岐　邹　坤＊　汪均金植　刘　闯　薛冰洁
关键词:苎麻;抗炎作用;白介素 1;前列腺素 E2;环氧化酶 2
中图分类号:R29　文献标识码:B　文章编号:1006-6810(2009)05-0029-03
　　苎麻(BoehmerianiveaL.)为荨麻科苎麻属多年生宿根
性植物 , 苎麻根 、叶药用 , 在我国 16世纪就有记载。我国民
间用煎剂治疗感冒发烧 , 麻疹高热 , 尿路感染 , 肾炎水肿 , 孕
妇腹痛 , 胎动不安 , 先兆流产 , 以及外科上用于跌打损伤 , 骨
折 , 疮肿痈毒等均有一定疗效 〔1〕。 70年代以来 , 我国医学
上对苎麻根化学成分和药理作用曾进行过研究 〔2〕。本实验
在实验室前期对苎麻抗炎活性部位筛选的基础上 , 对其酚
酸组份抗炎作用及机制作了进一步的研究。
1　仪器与材料
1.1　药品:苎麻叶酚酸组份由天然物研究与利用湖北省重
点实验室提取 , 扶他林(北京诺华制药有限公司)。
1.2　试剂:胰蛋白酶(华美生物工程公司);RPIMMedium
1640(InvitrogenCorporation), 脂多糖(Sigma), 花生四烯酸
(Sigma), IL-1β 酶免试剂盒(AdliteramDiagnosticLabora-
tories), Goatanti-COX2(中杉金桥), 兔抗山羊 IgG/TRITC
(中杉金桥)。
1.3　仪器:酶联免疫检测仪(GeniosTecan);荧光酶联免疫
检测仪(ThermoElectronCorporationMultiskanSpectrum);超
净工作台 (苏州净化设备厂);微型台式高速离心机
(5415D)(德国 Eppendof公司);CO2培养箱(日本三洋公
司);LD4-2A离心机(北京医用离心机厂);96孔板(美国
Cornning公司);XDS-1B倒置显微镜(重庆光光仪器厂)。
1.4　动物:KM小鼠 , 雄性 ,体重 20±2g, 由华中科技大学同
济医学院实验动物学部提供 , 许可证号:SCXR(鄂)2004-
0007。
1.5　细胞培养:人单核细胞 THP-1购自中国协和医科大
学 ,培养基为含双抗(100U· mL-1青霉素 , 100μg· mL-1链霉
素)及 100mL·L-1胎牛血清的 RPMI-1640培养液, 于 37℃,
　■基金项目:水利部水土保持植物开发研究中心科技专项
(SDH20088080, SDH20088190);湖北省自然科学基金创新群体计
划(项目编号:2007ABC008)。
　　作者简介:张宏岐(1983-),男(汉族),现为三峡大学药理学
专业 2007级在读硕士生 ,主要从事天然药物的活性研究
　＊通信作者简介:邹坤(1962-),男(汉族),湖北京山人 , 三峡
大学教授 , 主要从事天然产物研究与利用。 Tel:(0717)6397478,
Fax:(0717)6397478, E-mail:kzou@ctgu.edu.cn
50ML· L-1CO2培养箱中培养。 取处于指数生长期的细胞
用于实验。
2　方法与结果
2.1　药物对小鼠急性软组织损伤的影响 〔3〕:取 KM小鼠 40
只 ,随机分成 5组 ,分别为空白组 、模型组 、扶他林组 、苎麻
叶酚酸组分和非酚酸组分 , 每组 8只 , 除空白组外 , 均造模
处理。将 KM小鼠后足置于木质台面上 , 足掌向上 , 用长
30cm的圆筒置于足掌面。然后用 50g砝码从圆筒顶端自然
落下 ,打击小鼠足部 , 连续 3次 , 造成足部软组织损伤。造
模后每天患处涂抹相应药物 4次 ,分别在上午 8点 、11点 ,
下午 2点 、5点 ,其中模型组涂抹基质。
连续给药 3天 , 末次给药后半小时 , 颈椎脱臼处死小
鼠 ,于相同部位剪下左右后肢 ,称重 , 计算肿胀率 [ (右足重
-左足重)/左足重 ×100%] 。 结果见表 1。同时充分剪
碎 ,于 5ml生理盐水中浸泡 1h, 3000r· min-1离心 5min, 取
上清液 ,于 -20℃保存备用。
表 1　药物对小鼠急性软组织损伤的影响( x±s, n=8)
组别 剂量(mg· kg-1 肿胀率
空白　　　　　　 / 0.52±1.78＊＊
模型　　　　　　 / 24.31±6.17
扶他林　　　　　 15 7.82±2.14＊＊
苎麻叶酚酸组分　 10 8.16±2.75＊＊
苎麻叶非酚酸组分 30 17.17±4.06＊
　　与模型组比＊P<0.05, ＊＊P<0.01
　　结果表明苎麻叶酚酸组分具有良好的抗急性软组织损
伤作用 ,是苎麻叶抗急性软组织损伤的主要有效组分 , 以下
主要对酚酸组分抗炎机制进一步进步研究。
2.2　ELISA检测小鼠炎性组织中 IL-1β:将 -20℃保存的
组织液放至室温按 IL-1β 酶免试剂盒说明书测定 OD值。
IL-1β 酶免试剂盒提供的标准品浓度分别为 0、 25、 50、
100、200、 400、800pg· ml-1 , 按试剂盒说明书在 450nm波长
处测定标准品的 OD值 ,以吸光度 OD值为纵坐标(Y), 相应
的 IL-1β标准品浓度为横坐标(X),做的相应标准曲线。结
果表明 , IL-1β 含量在 0 ～ 800pg· ml-1浓度间线性关系良
好。线性回归方程为:Y=0.085+0.002x, r=0.9996, n=7。
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DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.2009.05.040
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组织液 IL-1β 含量根据其 OD值由标准曲线换算出相应的
浓度 ,结果见表 2。
表 2　药物对小鼠急性软组织损伤组织中
IL-1β含量的影响( x±s, n=8)
组别 剂量(mg· kg-1)
IL-1β含量
(pg· ml-1)
空白　　　　　　　　　 24.72±6.70＊＊
模型　　　　　　　　　 64.09±6.39　
扶他林　　　　　　　　 15 35.83±9.65＊＊
苎麻叶酚酸组分高剂量组 40 30.54±8.14＊＊
苎麻叶酚酸组分高剂量组 20 46.54±5.88＊＊
苎麻叶酚酸组分高剂量组 10 55.42±5.65＊
　　与模型组比＊P<0.05, ＊＊P<0.01
　　结果表明与模型组比较 ,苎麻叶酚酸组份高中低 3个
剂量组均可显著降低炎性组织中 IL-1β 的含量(P<0.
01)。高剂量组(40mg· kg-1)与扶他林(15mg· kg-1)比
较 , 其活性相当。
2.3　对 COX2 表达的影响:取对数生长期的单核细胞 , 以
105个· ml-1细胞浓度接种于 48孔板中 , 每孔 200μl,培养
24h后加药。按下列步骤操作测定荧光强度。 ①加入不同
浓度梯度的药液后继续培养 24h。 ②LPS刺激。终浓度为
800ng/ml, 刺激 6h。 ③弃上清 , 细胞用 PBS洗细胞 2次 , 于
37℃烤箱烤干 3分钟。 ④用预冷的多聚甲醛固定 5分钟。
⑤每孔加入 0.5%TritonX-100, 振荡 15秒 , 放于 0℃冰箱
20min。 ⑥每孔加入 100μl15%牛奶和 100μl1%的白蛋白 ,
振荡 15秒 , 冰浴 20min。 ⑦每孔加入 50μl1:200稀释的
Goatanti-COX2 , 4℃过夜 。时间到后 PBS洗 3次。 ⑧加入
适当稀释的兔抗山羊 IgG/TRITC(1:100), 37℃孵育 1h。时
间到后 PBS冲洗 3次。 ⑨稍干后 , 于荧光酶联免疫检测仪
下测定荧光强度,激发波长 535nm,测定波长 590nm。结果见表
3。
表 3　药物对单核细胞COX2表达的影响( x±s, n=3)
组别 剂量(mg· kg-1) 荧光强度
空白　　　　　　　　　 11757+614＊＊
模型　　　　　　　　　 50699+1764
扶他林　　　　　　　　 15 16810+863＊＊
苎麻叶酚酸组分高剂量组 40 17516+1125＊＊
苎麻叶酚酸组分高剂量组 20 23291+1827＊＊
苎麻叶酚酸组分高剂量组 10 32991+1946＊＊
　　与模型组比＊＊P<0.01
　　结果如表 3所示 , 与模型组比较 , 苎麻叶酚酸组分对
LPS刺激引起的 THP-1 COX2酶活性升高有抑制作用(P
<0.01)。高剂量组(40mg· kg-1)与扶他林(15mg· kg-1)
比较 ,其作用相当。
2.4　PGE2含量测定:取对数生长期的单核细胞 , 以 105个
· ml-1细胞浓度接种于 48孔板中 , 每孔 200μl, 培养 24h
后 ,加入不同浓度梯度的药液 100μl, 加药后继续培养 24h。
每孔加 10μg· ml-1 LPS15μl, 终浓度为 800ng· ml-1 , 刺激
6h。加入花生四烯酸 , 培养 30分钟 , 取细胞培养上清液
100μl, 加 0.5mol· L-1 KOH-甲醇溶液 200μl, 50℃水浴异
构化 20min,加甲醇 1ml,于 278nm波长处测定 OD值。以光
密度值表示 PGE2的含量。结果见表 4。
表 4　药物对单核细胞PGE2含量的影响( x±s, n=3)
组别 剂量(mg· kg-1) OD
空白　　　　　　 0.630±0.031＊＊
模型　　　　　　　　　 0.880±0.041
扶他林　　　　　　　　 15 0.750±0.044＊＊
苎麻叶酚酸组分高剂量组 40 0.769±0.052＊＊
苎麻叶酚酸组分高剂量组 20 0.771±0.021＊＊
苎麻叶酚酸组分高剂量组 10 0.814±0.007＊
　　与模型组比＊P<0.05, ＊＊P<0.01
　　结果显示 , LPS刺激可显著促进 THP-1细胞中 PGE2
的合成 , 而苎麻叶酚酸组高 、中剂量对 LPS刺激引起的
PGE2合成有明显的抑制作用(P<0.01), 高剂量组(40mg
· kg)与扶他林(15mg· kg-1)比较 ,其活性相当。
3　讨　论
炎症是机体清除异物和自身伤亡细胞的一种防御反
应 ,机体损伤 、感染和自身免疫性疾病等都不同程度地伴有
急慢性炎症过程。炎症过程中释放的细胞因子以网络化作
用方式发挥着整体效应 〔4〕。其中 , IL-1β 是一种敏感和特
异的急性期炎性指标 ,主要由活化的巨噬细胞产生 , 许多其
他类型的细胞 , 包括内皮细胞 、平滑肌细胞 、成纤维细胞也
能产生 IL-1β 〔5〕。在炎症过程中 , IL-1β 通过与配体的结
合介导白细胞在内皮表面滚动 , 在白细胞与内皮细胞的粘
黏过程中居起始地位。前列腺素(PGE2)是重要的炎症介
质 ,具有广泛的生理及病理作用 , 包括强烈的扩血管作用 、
敏化痛觉神经末梢 ,可显著增强疼痛的强度与持续时间 ,还
可引起炎症性发热。 COX2几乎存在于所有细胞 , 但在静止
细胞中表达极少 〔6〕。当受到 LPS、炎症细胞因子等刺激时 ,
COX2会诱导性地高表达 , 是炎症过程中一个重要的诱导
酶。
LPS是革兰氏阴性细菌产生的内毒素 , 作为生物体的
外源性刺激剂 , LPS通过刺激单核细胞 、巨噬细胞等分泌多
种细胞因子和炎症介质 〔7〕 ,是产生全身性炎症反应综合征
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和脓毒血症的主要介质 〔8〕。因此 , 本研究采用 LPS刺激体
外培养的人单核细胞分泌 COX2 , PGE2作为体外模型 , 能够
很好地模拟体内炎症介质的分泌过程 , 用于非特异性抗炎
药物的筛选和抗炎药物作用机理的研究。
苎麻叶酚酸组分具有抗炎 、镇痛 、改善微循环和血液流
变学等多种作用 , 对急性软组织损伤具有良好的修复作用。
降低 COX2的表达 ,减少 IL-1β、PGE2等炎性介质释放 , 从
而控制炎症反应;改善微循环和血液流变学 , 降低毛细血管
通透性 , 加强损伤处丢失和渗出细胞的吸收 , 使血液凝聚状
态减轻 ,瘀血减少,促进局部血液循环,是其主要的作用机制。
参考文献
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2009年 2月 20日收稿
Anti-inflammatoryefectsandmechanismoframieleaves
ZhangHong-qi, ZouKun＊ , WangJun-zhi, LiuChuang, XueBinjie
ChemistryandLifeScience, ChinaThreeGorgesUniversity, Yichang, Hubei443002)
Abstract:Objective:Toinvestigatetheanti-inflammatoryefectsandmechanismofactivesectionsofBoehmeria
niveaL.leaves.Methods:Theanti-inflammatoryactionsofactivesectionsfromBoehmerianiveaL.leaveswere
studiedusingmodelsoffeet-acutesoft-tissueinjurybyweightdroppingwithmice.ThecontentsofIL-1β inmices
pawweremeasured.EfectsofBoehmerianivealeavesextractswerebservedonlipopolysaccharide(LPS)-induced
PGE2 andCOX2 producedinTHP-1 celsbycelculture.Results:Thephenolicacidsinethylacetateextract
showedtheremarkableinhibitoryactiononthemicetipswel, andreducedthecontentsofIL-β inthemouseIn-
flammatorytissue, andinhibitedproductionofPGE2 andexpressionofCOX2 inTHP-1cels.Conclusion:Thephe-
nolicacidsinextractsfromBoehmerialeavesshowedmarkedanti-inflammatoryefects.Itsfunctionmayberelated
totheinhibitionofthesynthesisofIL、COX2 、PGE2.
Keywords:Ramie;anti-inflammatory;IL-1β;PGE2;COX2
蒙药三子汤体内抗菌实验研究
内蒙古民族大学医学院(通辽 028000)　张冬丽　王　田＊　包常华
摘　要:目的:研究蒙药三子汤对感染小鼠的体内保护作用。方法:三子汤组灌胃给药 3d,小鼠腹腔分别注射 MLD的金黄色
葡萄球菌和铜绿假单胞菌菌液造成感染 ,继续给药至 7d, 观察 7d内各组小鼠的死亡率。结果:三子汤使感染金黄色葡萄球
菌 、铜绿假单胞菌的小鼠死亡率低(P<0.01)。结论:三子汤对金黄色葡萄球菌 、铜绿假单胞菌感染小鼠均具有保护作用。
关键词:三子汤;抗菌;实验研究
中图分类号:R291.2　文献标识码:B　文章编号:1006-6810(2009)05-0031-02
　　三子汤由诃子 、栀子 、川楝子组成 ,具有酸 、苦 、甘 、涩 、
　＊内蒙古开鲁县公安局交通警察大队(028400)
辛等 5种味的方剂 , 其性味与功能相互协调 , 性凉 , 功能清
血热 ,分离正血与恶血 , 主治新旧血热症 , 血症引起的眼红 ,
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