全 文 ：　　　　 天然产物研究与开发　 　　　　　
2003　Vo1.15　No.3 NATU RAL PRODUCT RESEARCH AND DEVELOPMENT　 　　　　　　　　　　
　
　
　
　
　　收稿日期:2002-08-30　　　修回日期:2002-10-21
HPLC 法测定岩青兰地上全草与不同部位中柚皮
素-7-O-葡萄糖苷及北美圣草素-7-O-葡萄糖苷的含量
任冬梅　娄红祥　马　斌　季　梅
(山东大学药学院　济南　250012)
摘　要　建立 HPLC 法测定岩青兰中柚皮素-7-O-葡萄糖苷及北美圣草素-7-O-葡萄糖苷的含量的方法 ,
考察岩青兰地上全草与不同部位中两种二氢黄酮类成分的含量。采用 Phenomenex C18柱 ,甲醇-乙腈-水
(32∶8∶60)为流动相 ,流速 1 ml/min , 紫外检测器 284 nm 波长进行检测。测得岩青兰叶中两种二氢黄酮
含量最高 ,茎中含量极低 , 根中未测到。建立的方法分析简便 、灵敏 、准确。
关键词　HPLC;岩青兰;柚皮素-7-O-葡萄糖苷;北美圣草素-7-O-葡萄糖苷
　　岩青兰(Dracocephalum rupestra)是唇形科青
兰属植物 ,主要含黄酮类化合物 ,其中二氢黄酮含量
较高[ 1 , 2] ;总黄酮经药效学试验 ,具有较好的抗血小
板聚集作用 ,可显著增加冠脉流量 ,提高小鼠耐缺氧
能力 ,作为治疗心脑血管系统疾病的新药开发具有
较好的前途。本文以两种二氢黄酮类化合物柚皮素
-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-8-O-葡萄糖苷为质量
指标 ,建立了HPLC 检测方法 ,该法简便 ,稳定性和
重现性好 ,可用于药材质量控制。同时 ,测定了药材
不同部位中两种二氢黄酮类化合物的含量 ,为探明
药材的药用部位提供理论依据 。
1　仪器与试剂
1.1　仪器　美国 HP 公司 1100高效液相色谱仪 ,
配有自动进样器;二极管列检测器;HPChem station
化学工作站。
1.2　试剂　柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-
O-葡萄糖苷(自制 ,经 HPLC 检测纯度>98%),甲
醇和乙腈为色谱纯(天津产);水为二次重蒸水;其余
试剂均为分析纯;岩青兰药材 2001年 10月采自山
西省榆次地区太行山脉 ,本院生药学教研室李允尧
教授鉴定 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件:色谱柱 , Phenomenex C18(250 mm
×4.6 mm , 5μ);流动相:甲醇-乙腈-水(32∶8∶60),
流速 1 ml/min;检测波长:284 nm;柱温:室温;进样
量:10 μl。结果见图 1。
2.2　线性关系考察:精密称定柚皮素-7-O-葡萄糖
苷对照品5.1 mg ,北美圣草素-7-O-葡萄糖苷对照品
4.8 mg ,定容于 10 ml流动相中 ,吸取上述溶液 3
ml ,流动相稀释至 10 m l ,得到含柚皮素-7-O-葡萄糖
苷 153μg/ml ,北美圣草素-7-O-葡萄糖苷 144 μg/ml
的对照品溶液 。吸取对照品溶液 1 ,2 , 4 , 6 ,8 ,10 ,12
μl分别进行测定 ,以进样量(μl)为横坐标 X ,峰面积
积分值为纵坐标 Y , 进行线性回归得回归方程
Y 北美圣草素-7-O葡萄糖苷 =-16.217 +253.318X(γ=
0.99991), 线 性 范 围 0.144 ～ 1.728 μg;
Y 柚皮素-7-O-葡萄糖苷 = 3.073 + 355.787X (γ =
0.99999),线性范围 0.153 ～ 1.836 μg 。
2.3　样品测定:干燥的岩青兰地上全草 、根 、茎 、叶 、
花分别粉碎 ,过 40目筛 ,分别精密称定 0.5 g 于 100
ml锥形瓶中 ,加入约50 ml甲醇超声提取1小时 ,过
滤 ,滤液定容于 100 ml容量瓶中 ,微孔滤膜过滤作
为供试溶液。将对照品溶液分别进样 ,上述色谱条
件测定 ,外标法计算 ,结果见表 1。
表 1　岩青兰全草及各部位中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和
北美圣草素-7-O-葡萄糖苷的含量(%)
Table 1　The content o f naringenin-7-O-glucoside and e-
riodictyol-7-O-glucoside in Dracocephalum ru-
pestra and its different parts
全草
Aerial parts
根
Roots
茎
S tems
叶
Leaves
花
Flow ers
柚皮素-7-O-葡萄糖苷 0.61 - - 0.87 0.11
Naringenin-7-O-glucoside
北美圣草素-7-O-葡萄糖苷 1.46 - - 2.36 0.19
Eriodictyol-7-O-glucoside
229
DOI :10.16333/j.1001-6880.2003.03.015
图 1　样品 HPLC 图
Fig.1　The chromatorgams of samples
a:对照品 Standard samples　b:根 Roots　c:茎 Stems　d:叶 Leaves　e:花 Flow ers　f:全草 Aerial part s
E:北美圣草素-7-O-葡萄糖苷 Eriodictyol-7-O-glucoside　N:柚皮素-7-O-葡萄糖苷 Naringenin-7-O-glucoside
2.4　精密度实验:吸取对照品溶液 10 μl ,连续重复
进行 5次 ,记录峰面积 ,柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北
美圣草素-7-O-葡萄糖苷的平均 RSD(%)0.39 和
0.51 。
2.5　重现性实验:称取同一批次药材粉末 5份 ,按
样品测定项下方法进行操作 ,计算含量 ,柚皮素-7-
O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷的平均
RSD(%)分别为 0.23和 0.41 ,表明方法重现性良
好。
2.6　回收率试验:精密称取适量已知含量的岩青兰
样品 ,加入一定量柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草
素-7-O-葡萄糖苷 ,按样品测定项下方法进行操作 ,
柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷
的平均回收率分别为 100.87%和 101.34%, RSD
分别为 2.09%和 3.34%。
3　讨论
3.1　检测波长的选择:柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北
美圣草素-7-O-葡萄糖苷为二氢黄酮类化合物 ,测定
其紫外图谱 ,最大吸收波长均为 284 nm ,故选择 284
nm为检测波长 。
3.2　含量测定结果表明 ,岩青兰根中未检测到柚皮
素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷 ,茎中
含量极低(测得峰面积远远低于线性范围 ,故未给出
具体含量),花的含量也远远低于叶 ,提示可在岩青
兰抽茎 、开花之前采集地上部分较好 ,我们曾经测过
8月初(尚未开花)采集的药材中两种二氢黄酮的含
量 ,结果柚皮素-7-O-葡萄糖苷含量为 1.19%,北美
圣草素-7-O-葡萄苷含量为 2.83%,比本文中测得含
量几乎高出一倍。最佳采收季节有待于收集不同生
长期的药材后作进一步考察 。
参考文献
1　 江苏新医学院.中药大辞典(上册).上海:上海人民出版
社 , 1977.1347
2　 任冬梅 , 袁久荣.岩青兰化学成分的研究.中草药 , 1997 ,
28(2):74 ～ 76
230　　　　　　　　　 天然产物研究与开发 2003　Vo1.15　No.3
DETERMINATION OF NARINGENIN-7-O-GLUCOSIDE AND
ERIODICTYOL-7-O-GLUCOSIDE IN DRACOCEPHALUM RUPESTRA
AND ITS DIFFERENT PARTS BY HPLC
REN Dong-mei ,LOU Hong-xiang ,MA Bin , JI Mei
(School of Pharmacy , Shandong University , Jinan　250012 , China)
Abstract　To develop a method to determine the amount of naringenin-7-O-glucoside and eriodictyol-7-O-g luco-
side in Dracocephalum rupestra and in its different parts.The chromatog raphic conditions w ere phenomenex C18
column ,methanol-acetoni trile-water(32∶8∶60)was used as the mobile phase , flow rate w as 1.0 ml/min , and de-
tected at a w aveleng th of 284 nm.The amount of naringenin-7-O-glucoside and eriodictyol-7-O-glucoside was
maximum in leaves ,while minimum in stems.The methods w as proved to be simple , accurate and provided a reli-
able basis fo r the quality evaluation of this plant medicine.
Key words　HPLC;Dracocephalum rupestra;eriodictyol-7-O-glucoside;naringenin-7-O-glucoside
(上接第 228页)
部分共有峰的峰形描述:
峰 2在分离条件好时 ,在其左右的 2小峰可达
到基线分离 ,否则可形成两小的肩峰;峰 6与峰 7在
分离条件好时 ,可达到基线分离 ,条件差时 ,未能作
到完全基线分离;峰 1左侧 2/3处偶见一小肩峰。
参考文献
1　 屠鹏飞.中药材指纹图谱的建立及技术要求实例解说.
中国药品标准 , 2000 , 1(4):22
2　 中华人民共和国药典.2000 年版 , 化学工业出版社 ,
2000.57 ～ 58
STUDYON HPLC FINGERPRINT ABOUT RADIX SALVIAE
MILTIORRHIZAE CULTIVATED IN ZHONGJIANG
WANG Shu-lin1 ,MU Xiao-dong2 , YAN Dan3 ,HAN Yu-mei1 ,GUO Ping2
(1.Medical School of Sichuan 　614201 , China;2.The Medicament Branch of General Armed Police T ighting
Team Hospital in Sichuan 　610072 , China;3.Chengdu University of T.C.M .　610072 , China)
Abstract　To establish a HPLC fingerprint of Radix Salv iae Milt iorrhizae cultivated in Sichuan.HPLC was
used to develop f ingerprint of Radix Salv iae Miltiorrhizae fat-soluble constituent.Fingerprint of 10 Radix
Salv iae Milt iorrhizae species w ere performed to meet the cri terion of fingerprint of chinese crude drug finger-
print.This fingerprint is expect to be one of the quality control standards of Zhongjiang Radix Salviae Milt ior-
rhizae.
Key words　Radix Salviae Milt iorrhizae;HPLC;fingerprint
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2003　Vo1.15　No.3 任冬梅等:HPLC 法测定岩青兰地上全草与不同部位中柚皮素-7-O-葡萄糖苷及北美圣草素-7-O-葡萄糖苷的含量