全 文 ：收稿日期:2014 － 06 － 09;修回日期:2014 － 09 － 15
基金项目:安徽省教育厅自然科学项目(KJ2011B081)
作者简介:陈红梅，硕士，讲师，研究方向为植物生物化学，E-mail:hongmeichen2000@ 163． com。
doi∶10． 3969 / j. issn. 2095 － 1736． 2015. 02. 048
茯苓皮多糖和三萜类物质提取及其抗氧化活性研究
陈红梅
(安庆师范学院 生命科学学院，安徽 安庆 246011)
摘 要 采用超声辅助提取法分别从茯苓皮中提取多糖和三萜类物质。考察提取溶剂、超声功率、液料比、提取温
度、提取时间等对茯苓皮多糖和三萜类物质的影响。结果表明，选用乙醇提取多糖，选用乙酸乙酯浸提三萜类物质，
最佳提取条件为:超声功率 450 W，液料比为 45 mL /g，提取温度 80℃，提取时间 35 min。通过对 DPPH自由基清除
作用、还原力、羟基自由基清除作用的测定，评价茯苓皮中多糖和三萜类物质的抗氧化活性。结果表明，抗氧化能力
与质量浓度存在量效关系。在质量浓度达到 0. 4 mg /mL时，茯苓皮多糖和三萜类物质提取液对 DPPH 和羟基自由
基的清除能力均高于 VC;茯苓皮三萜类物质提取液还原力与 VC相当。茯苓皮提取物作为一种天然的抗氧化剂具
有良好的应用前景。
关键词 茯苓;多糖;三萜;抗氧化活性
中图分类号 Ｒ284． 2 文献标识码 A 文章编号 2095 － 1736(2015)02 － 0048 － 05
Study on extraction technology and antioxidative activity of
polysaccharides and triterpenoids from peel of Poria cocos
CHEN Hong-mei
(School of Life Science，Anqing Teachers College，Anqing 246011，China)
Abstract Microwave assisted extracting conditions of polysaccharides and triterpenoids from peel of Poria cocos were studied． The in-
fluence of extraction solvent，solvent-material ratio，ultrasonic power，temperature，extraction time was evaluated by single factor ex-
periments． The results showed that the polysaccharides were obtained by ethanol，while the triterpenoids was obtained by ethyl acetate．
The optimal conditions were as follows． Ultrasonic power 450 W;solvent-material ratio，45 mL /g;temperature，80℃;and extraction
time，35 min． The antioxidant activity was evaluated based on DPPH radical scavenging capacity，reducing power and hydroxyl free
radical scavenging capacity． The ability of antioxidative activity was increased with the inerease concentrations of polysaccharides and
triterpenoids． When extracted at the concentration of 0. 4 mg /mL，polysaccharides and triterpenoids revealed relatively better DPPH
radical scavenging capacity and hydroxyl free radical scavenging capacity than VC． Ｒeducing power of riterpenoids was comparable to
those of VC ． Therefore，the peel of Poria cocos is effective as novel natural antioxidants．
Keywords Poria cocos;polysaccharides;triterpenoids;antioxidative activity
茯苓，大多埋于地下，腐生或寄生于松科植物马尾
松或赤松根部，为担子菌纲多孔菌科茯苓属［Poria co-
cos (Schw．)Wolf］，俗称松苓、茯兔、松柏玉等，是一种
药食两用的真菌。茯苓在中国主要有三大产区，分别
是安徽、云南和福建。茯苓为传统中药，具有利水渗
湿、健脾和胃、养心安神、利尿、增强机体免疫等功
能［1 － 2］，在古代就被称为“四时神药”，成为多种方剂的
配伍组方。茯苓富含多种有效成分，包括茯苓多糖、三
萜类、月桂酸、麦角甾醇、腺嘌呤及胆碱等活性物质，具
有很高的药用及营养价值［3］。现代研究表明，茯苓具
有抗诱变、增强机体免疫、促进细胞分裂、抗炎抑菌、补
体激活等药理活性［4 － 5］。其中，茯苓多糖和三萜类物
质是最重要的有效成分。
茯苓多糖主要成分为 β －茯苓聚糖，是 β －(1，3)
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－ D －葡萄糖聚合体，β － 茯苓聚糖本身没有生物活
性，只有支链切断后才表现出生物活性。茯苓多糖具
有降血糖、增强机体免疫力、抗肿瘤、预防衰老等作用，
具有广泛的应用前景［6］。三萜类物质广泛存在于自然
界，不同产地的茯苓，三萜类物质成分也不尽相同。三
萜类物质具有广泛的生物活性，具有利尿、抗肿瘤、抗
炎、抗菌、增强免疫、抗生育等活性［7］。
茯苓菌核的外皮即为茯苓皮，在茯苓加工过程中
常被作为下脚料而被丢弃，本研究对茯苓皮中的多糖
和三萜类物质的含量进行测定，同时对茯苓皮多糖和
三萜类物质提取物的还原力、羟基自由基清除率、DP-
PH自由基清除率进行测定，综合评价其抗氧化活性。
据此，旨在为茯苓的综合利用提供理论依据，也为其应
用于天然抗氧化剂的开发提供研究基础。
1 材料与方法
1. 1 材料与仪器
茯苓皮洗净于烘箱中 60℃烘干，粉碎，过 60 目筛
备用。
齐墩果酸标准品购自 Sigma 公司，1，1 －二苯基苦
基苯肼(DPPH) 购自Sigma公司，无水乙醇、石油醚、乙
酸乙酯、香草醛、抗坏血酸等均为分析纯。
1. 2 仪器与设备
FW-100 高速粉碎机( 上海楚定分析仪器有限公
司) ;FA2004A型电子天平( 上海精天电子仪器有限公
司) ;HH-6 型数显恒温水浴锅( 常州国华电器有限公
司) ;UV-2000 型紫外 －可见分光光度计( 上海尤尼柯
公司) ;ＲE-52A 型旋转蒸发仪( 上海亚荣生化仪器
厂)。
1. 3 实验方法
1. 3. 1 葡萄糖标准曲线的制作
准确称取干燥至恒重的葡萄糖标准品 10. 0 mg，加
适量蒸馏水溶解后转入 100mL 容量瓶中，定容，得到
质量浓度为 0. 1 mg /mL 的标准溶液。准确量取 0. 0、
0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7 和 0. 8 mL葡萄糖标准
溶液于试管中，分别加入蒸馏水将体积补充至 1 mL，
再加入 2 mL 5%的苯酚溶液和 5 mL 浓硫酸溶液，混
匀，于室温放置 20min，在波长 490 nm处分别测定吸光
度值。以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘
制标准曲线，得回归方程为 y = 0. 1377x － 0. 1497，Ｒ2
= 0. 9992。
1. 3. 2 齐墩果酸标准曲线的制作
准确称取干燥至恒重的齐墩果酸标准品 20. 0 mg，
取适量无水乙醇溶解后转入 100mL 容量瓶中，定容，
得到质量浓度为 0. 2 mg /mL 的标准溶液。准确量取
0、0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6 和 0. 7 mL齐墩果酸溶液
于试管中，水浴挥干溶剂，分别加入香草醛 －冰乙酸和
高氯酸，置于 65℃恒温水浴中加热 15 min，取出用流动
冷水冷却，再分别加入 5 mL 冰乙酸，混匀，在波长 550
nm处测定吸光度值。以齐墩果酸质量为横坐标，吸光
度值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为 y =
0. 1717x － 0. 2231，Ｒ2 = 0. 9975。
1. 3. 3 茯苓皮中多糖的提取及含量测定［8］
准确称取茯苓皮粉末各 5. 0 g，置于烧瓶中，加入
一定量的石油醚浸泡，过滤，滤渣分别用蒸馏水和乙醇
溶液于超声波清洗器中反复抽提一段时间，减压浓缩，
再分别加入 3 倍体积的无水乙醇，静置过夜收集沉淀，
沉淀用蒸馏水溶解并定容至 50 mL 容量瓶中，待用。
取此样品溶液，按照 1. 3. 1 的方法显色，在波长 490 nm
处测定吸光度值，根据回归方程计算得出样品中多糖
的含量。
1. 3. 4 茯苓皮中三萜类物质的提取及含量测定［9］
准确称取茯苓皮粉末各 5. 0 g，置于烧瓶中，分别
加入乙醇溶液、乙酸乙酯和石油醚溶液，在超声波清洗
器中回流提取一段时间，分别抽滤，再置于旋转蒸发仪
上减压浓缩回收溶剂至近干，得到黑色浸膏，加入乙醇
溶解并定容至 50 mL容量瓶中，待测。取此样品溶液，
按照 1. 3. 2 的方法显色，在波长 550 nm处测定吸光度
值，根据回归方程计算得出样品中三萜类物质的含量。
1. 3. 5 单因素试验
准确称取茯苓皮粉末 5. 0 g，分别考察不同提取溶
剂、超声功率、液料比、提取温度、提取时间对茯苓皮多
糖和三萜类物质得率的影响。
1. 3. 6 茯苓皮提取物抗氧化活性测定
1)DPPH 分别吸取 0. 5mL 质量浓度为 0. 05、
0. 1、0. 2、0. 3 和 0. 4 mg /mL 的样品溶液同 0. 15 mmol /
L的 DPPH乙醇溶液 2. 5 mL混合，充分摇匀，在室温下
于暗室中反应 1 h后在 517 nm波长处测定吸光度值，
以未加入样品的 DPPH乙醇溶液为空白。同时，以 VC
和 BHT作阳性对照。按式(1) 计算DPPH自由基的清
除率。
DPPH自由基清除率 /% = (1 －
D(517 nm)1
D(517 nm)0
)× 100
(1)
式中:D(517 nm)0为空白溶液吸光度测定值;D(517 nm)1
为样品溶液吸光度测定值。
2) 还原力 分别吸取1. 0mL 质量浓度为 0. 05、
0. 1、0. 2、0. 3 和 0. 4 mg /mL 的样品溶液同 pH 值 6. 6
的磷酸盐缓冲溶液 2 mL和 1%铁氰化钾溶液 2 mL 混
合，充分摇匀，置于 55℃恒温水浴锅中保温 25 min，迅
速冷却，加入三氯乙酸 2 mL，充分摇匀，于 4500 r /min
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下离心 10 min。取上清液 2 mL同 0. 2% FeCl3溶液 0. 5
mL和蒸馏水 1 mL混合，充分摇匀后静置 10 min，在波
长 700 nm处测定其吸光度值，以蒸馏水为空白。另以
VC作阳性对照。吸光度值可以评价样品的还原力，吸
光度值越大，则样品的还原力越强［10］。
3) 羟基自由基 分别吸取1. 0 mL 质量浓度为
0. 05、0. 1、0. 2、0. 3 和 0. 4 mg /mL 的样品溶液于试管
中，依次往其中加入 5 mmol /L 水杨酸溶液 1. 0 mL、5
mmol /L FeSO4溶液 1. 0 mL、蒸馏水 2. 0 mL，充分混匀
后再加入 5 mmol /L的 H2O2溶液 1. 0 mL，置于 37℃水
浴中保温 30 min，加入 0. 15 mol /L EDTANa2溶液 0. 5
mL终止反应，测定其在 510 nm处的吸光度值，以蒸馏
水为空白。VC作阳性对照。按式(2) 计算羟基自由基
(·OH) 的清除率。
羟基自由基清除率 /% = (1 －
D(510 nm)2 － D(510 nm)1
D(510 nm)0
)
× 100 (2)
式中:D(510 nm)0为空白溶液吸光度测定值;D(510 nm)1
为不加 H2O2 的黄酮溶液吸光度测定值;D(510 nm)2为加
入黄酮溶液后的吸光度测定值。
2 结果与讨论
2. 1 单因素试验
2. 1. 1 提取溶剂对茯苓皮中多糖、三萜类物质的得率
的影响
选用蒸馏水和乙醇分别提取茯苓皮多糖，结果如
表 1 所示。用乙醇作为提取溶剂，多糖得率达到
12. 5%;蒸馏水提取液中多糖得率为8. 7%。乙醇提取
液中多糖得率高于蒸馏水提取液中多糖得率，且差异
极显著(P ＜ 0. 01)。选用乙醇作为提取溶剂浸提茯苓
皮多糖。
表 1 茯苓皮不同溶剂提取物多糖得率
Table 1 Contents of polysaccharides from different solvent extracts
提取溶剂 多糖得率(%)
蒸馏水
乙醇
8. 7 ± 0. 3aA
12. 5 ± 1. 1bB
注:表中数据用平均值±标准差表示。
表 2 茯苓皮不同溶剂提取物三萜含量
Table 2 Contents of triterpenoids from different solvent extracts
提取溶剂 三萜含量(%)
乙醇
乙酸乙酯
石油醚
15. 5 ± 0. 5cB
19. 9 ± 0. 8aA
18. 6 ± 0. 5bA
注:表中数据用平均值±标准差表示。
选用乙醇、乙酸乙酯和石油醚分别提取茯苓皮中
三萜类物质，结果如表 2 所示。乙酸乙酯提取液和石
油醚提取液中三萜类物质得率均高于乙醇提取液三萜
类物质得率，且差异极显著(P ＜ 0. 01) ，其中乙酸乙酯
提取液中三萜类物质得率又较石油醚提取液中得率
高，差异显著(P ＜ 0. 05) ，含量达到19. 9%。选用乙酸
乙酯作为提取溶剂浸提茯苓皮中三萜类物质。
2. 1. 2 超声功率对茯苓皮多糖、三萜类物质的影响
在不同的超声功率(300、350、400、450、500、550 和
600 W) 下，分别按液料比20 mL /g，提取温度 50℃，提
取时间 30 min进行提取，结果如图 1 所示。从图 1 可
知，随着超声功率的增加，茯苓皮多糖得率也随之上
升，当功率达到 450 W 时，此时继续增加超声功率，多
糖得率仍在上升，但上升趋势较缓慢。而当功率达到
450 W，继续增加超声功率，此时茯苓皮三萜类物质得
率反而呈下降趋势。选择超声功率在 450 W 较为合
适。
图 1 超声功率对茯苓皮多糖、三萜类物质的影响
Fig 1 Effect of ultrasonic power on the yield of
polysaccharides and triterpenoids
2. 1. 3 液料比对茯苓皮多糖、三萜类物质的影响
在超声功率 450 W，以不同的液料比(15、25、35、
45、55、65 和 75 mL /g) ，分别按提取温度50℃，提取时
间 30 min进行提取，结果如图 2 所示。从图 2 可知，随
着液料比的增加，茯苓皮多糖得率呈上升趋势，当液料
比超过 45 mL /g，此时多糖得率呈下降趋势;而随着液
料比的增加，茯苓皮中三萜类物质呈上升趋势，但当液
料比超过 50 mL /g，此时三萜类物质呈缓慢增长趋势。
考虑到得率及后期处理，以液料比为 45 mL /g为宜。
图 2 液料比对茯苓皮多糖、三萜类物质的影响
Fig 2 Effect of liquid-material ratio on the yield of
polysaccharides and triterpenoids
2. 1. 4 提取温度对对茯苓皮多糖、三萜类物质的影响
在超声功率 450W，液料比 45mL /g，分别按不同的
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提取温度(40、50、60、70、80 和 90℃) ，提取时间30 min
进行提取，结果如图 3 所示。从图 3 可知，随着提取温
度的升高，茯苓皮多糖得率呈不断上升趋势，只是当温
度达到 80℃后，继续升高温度，多糖得率增长缓慢; 随
着温度的升高，三萜类物质得率也不断增加，但当温度
超过 80℃后，三萜类物质得率反而下降。提取温度可
以设为 80℃。
图 3 提取温度对茯苓皮多糖、三萜类物质的影响
Fig 3 Effect of extraction temperature on the yield of
polysaccharides and triterpenoids
2. 1. 5 提取时间对茯苓皮多糖、三萜类物质的影响
在超声功率 450 W，液料比 45 mL /g，提取温度
80℃，分别按不同的提取时间(15、25、35、45、55 和 65
min) 进行提取，结果如图4 所示。从图 4 可知，随着提
取时间的延长，茯苓皮多糖和三萜类物质得率均呈先
上升后降低的趋势。提取时间在 45 min 时，多糖得率
达到最大;提取时间在35 min 时，三萜类物质得率达
到最大。考虑到得率及能耗，可以选择提取时间 35
min。
图 4 提取时间对茯苓皮多糖、三萜类物质的影响
Fig 4 Effect of extraction time on the yield of
polysaccharides and triterpenoids
2. 2 茯苓皮提取物抗氧化活性测定
2. 2. 1 DPPH自由基清除率
DPPH的醇溶液呈紫色，DPPH 是一种稳定的含氮
自由基，结构中含有孤对电子，可以与自由基清除剂提
供的电子配对结合，使 DPPH溶液褪色，根据吸光度值
的大小可以评价抗氧化剂的抗氧化性［11 － 12］。由图 5
可知，茯苓皮多糖提取液和三萜类物质提取液对 DPPH
自由基有一定的清除作用，并且当提取液质量浓度由
0. 1 mg /mL增加至 0. 5 mg /mL 时，多糖和三萜类物质
对 DPPH自由基的清除率也随之升高。随着对照品
BHT和 VC质量浓度的升高，其对 DPPH的清除率逐渐
增大。在质量浓度较低时，多糖和三萜类物质提取液
对 DPPH的清除率不如 VC; 而当三萜类物质提取液质
量浓度达到 0. 3 mg /mL 后，其对 DPPH 的清除率已经
超过 VC;当多糖提取液质量浓度达到0. 4 mg /mL 后，
其对 DPPH的清除率与 VC相当，超过 BHT对 DPPH的
清除率。
图 5 茯苓皮多糖、三萜类物质提取液
对 DPPH自由基的清除作用
Fig 5 Scavenging activity of polysaccharides and
triterpenoids on the DPPH free radical
2. 2. 2 还原力测定
由图 6 可知，随着茯苓皮多糖和三萜类物质提取
液质量浓度的升高，它们的还原力也在增加。对照品
VC的还原力也随着其质量浓度的升高而增加。茯苓皮
三萜类物质提取液的还原力与 VC整体相当，当其质量
浓度达到 0. 5 mg /mL时，甚至稍高于 VC。而茯苓皮多
糖提取液，其还原力不如三萜类物质提取液和 VC。
图 6 茯苓皮多糖、三萜类物质提取液的还原力
Fig 6 Total reduction of polysaccharides and triterpenoids
2. 2. 3 羟基自由基清除率
由图 7 可知，茯苓皮多糖提取液和三萜类物质提
取液均具有一定的清除羟基自由基的作用，并且当提
取液质量浓度由 0. 1 mg /mL 增加至 0. 5 mg /mL 时，多
糖和三萜类物质对羟基自由基的清除率也在升高。随
着对照品 VC质量浓度的升高，其对羟基自由基的清除
率也在增加。在质量浓度较低时，茯苓皮多糖提取液
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和三萜类物质提取液对羟基自由基的清除率与对照品
VC相当，而当质量浓度升高到 0. 4 mg /mL 时，多糖提
取液和三萜类物质提取液对羟基自由基的清除能力均
大于对照品 VC的清除能力，其中多糖提取液对羟基自
由基的清除能力又稍高于三萜类物质。
图 7 茯苓皮多糖、三萜类物质提取液
对羟基自由基的清除作用
Fig 7 Scavenging activity of polysaccharides and
triterpenoids on the hydroxyl free radical
3 结论
茯苓作为传统药材，其下脚料茯苓皮也具有一定
的药理作用，尤其以消肿利水为长［13］。茯苓皮中有多
糖和三萜类等物质的存在。多糖类物质和三萜类化合
物近年来研究较多，二者均是重要的天然抗氧化物质。
选用乙醇作为提取溶剂，从茯苓皮中提取多糖，选用乙
酸乙酯浸提三萜类物质，最佳提取条件为: 超声功率
450 W，液料比为 45 mL /g，提取温度 80℃，提取时间 35
min。
抗氧化实验表明，茯苓皮多糖提取液和三萜类物质
均表现出较强的抗氧化活性。在一定范围内，茯苓皮多
糖和三萜类物质提取液的抗氧化活性随着质量浓度的
升高而增加。质量浓度较高时，多糖和三萜类物质提取
液对 DPPH的清除率超过 VC和 BHT。茯苓皮三萜类物
质提取液的还原力和 VC相当，稍高于多糖提取液的还原
力。在质量浓度较高时，茯苓皮多糖和三萜类物质提取
液对羟基自由基的清除能力均大于对照品 VC。茯苓皮
提取物的抗氧化能力总体来说要优于 VC。
生物氧化是机体进行能量代谢和物质代谢必不可
少的环节，生物体代谢过程中产生的自由基对机体会
造成损伤，甚至会引起组织病变，引起人们对抗氧化物
质的关注，天然抗氧化剂的开发具有良好的应用前
景［14 － 15］。对茯苓皮多糖和三萜类物质的抗氧化作用
进行研究，DPPH自由基的清除能力、还原力和羟基自
由基的清除能力是评价抗氧化性的重要参数［16］。很
多疾病的发生都与羟基自由基有着相当大的关系。
DPPH自由基因为操作迅速、简便，目前也广泛用于评
价抗氧化活性。还原力与抗氧化能力密不可分，还原
力愈强意味着其抗氧化能力愈强。羟基自由基是一种
活泼的自由基，具有较强的活性和毒性，可与组织细胞
中的一些生物大分子发生反应，从而导致机体损
伤［17 － 19］。羟基自由基是一种相对来说较难清除的自
由基。深入研究茯苓皮提取物抗氧化作用对天然抗氧
化剂的开发具有重要的应用价值。
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第 32 卷第 2 期
2015 年 4 月
生 物 学 杂 志
JOUＲNAL OF BIOLOGY
Vol. 32 No. 2
Apr，2015
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