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2007年第 4期
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实验技术
3　讨论
在黄连的鉴别 ,以氯仿 -甲醇 -氨水 (15∶4∶1)在同一硅
胶 G板上展开 , 出现的斑点模糊 , 效果不好。按照药典 2005
版 ,以苯 -乙酸乙酯 -甲醇 -异丙醇 -水 (12∶6∶3∶3∶1)为展
开剂 [ 2] ,上行展开 , 分离速度很慢 ,郁金颗粒几乎不能分离出
盐酸小檗碱;而选择以正丁醇 -冰醋酸 -水 (7∶1∶2)为展开
剂 [ 3] ,与盐酸小檗碱出现斑点的位置有较大的距离 , 可能是
郁金颗粒中其他成分干扰了郁金颗粒中盐酸小檗碱的展行。
选用乙酸乙酯 -丁酮 -甲酸 -水(10∶6∶1∶1)为展开剂 ,展开
速度较快 ,上行 12cm ,与盐酸小檗碱在同一位置出现相同的
斑点 ,与对照药材也出现相同的斑点 ,在 365nm紫外灯下 , 出
现明显的荧光斑点。
在大黄鉴别时 , 参照药典的方法, 以石油醚 (30 - 60 ℃)
-甲酸乙酯 -甲酸(15∶5∶1)为展开剂 [ 4] ,在同一含羧甲基纤
维素钠硅胶 H板上展开 ,分离效果不佳 ,置于氨蒸气中显示红
色斑点 , 不清晰。选用苯 -乙酸乙酯 -甲醇(7. 5∶2. 4∶0. 1)为
展开剂 [ 5] ,以含羧甲基纤维素钠硅胶 H板上展开 , 分离效果不
佳。参照其他有关资料 , 以石油醚(30 - 60 ℃) -甲酸乙
酯 -甲酸 (15∶5∶1)的溶液为展开剂 , 以硅胶 G板展开 , 晾
干 ,置于紫外灯(365 nm)下视检 , 在相同位置出现的斑点不
清晰 ,分离效果不好。采用含羧甲基纤维素钠的同一硅胶 H
薄层板上 ,以环己烷 -乙酸乙酯 -甲酸 (30∶10∶0. 5)为展开
剂展开 ,展距 10 cm ,分离效果佳 ,重现性好 ,阴性对照无干扰。
在黄芩的鉴别中 , 选用乙酸乙酯 -丁酮 -甲酸 -水
(5∶3∶1∶1)为展开剂 [ 6] , 郁金配方颗粒中的黄色物质对其展
开有影响 ,分离现象不明显 , 显影模糊。 改变流动相的比例
为乙酸乙酯 -丁酮 -甲酸 -水 (27∶8∶1. 5∶3. 0)后 , 分离明
显 ,喷以 2%的三氯化铁乙醇溶液后 , 显色清晰。
该方法可以作为郁金颗粒的质量鉴别控制方法。
参考文献:
[ 1] 中国兽药典委员会. 中华人民共和国兽药典 (2005年
版 ,二部)[ S] .北京:中国农业出版社 , 2006, 452.
[ 2] 中国兽药典委员会. 中华人民共和国兽药典 (2005年
版 ,二部)[ S] .北京:中国农业出版社 , 2006, 314.
[ 3] 黄有霖 ,潘　馨. 成方中黄连 、黄柏的薄层鉴别的研究
[ J] .海峡药学 , 2003, 15(2):36 - 37.
[ 4] 王晓玲. 大黄及其制剂的薄层色谱鉴别 [ J] . 中成药 ,
2004, 26(9):19 -20.
[ 5] 袁晓芳.黄连上清片中大黄的薄层色谱鉴别法 [ J] .江苏
药学与临床研究 , 2004, 12(3):37.
[ 6] 吴庆霞 ,王慧琛. 薄层色谱法对儿童清肺丸中麻黄 、黄
芩的鉴别 [ J] . 天津药学 , 2004, 16(2):20 - 21.
草石蚕水苏糖的乙醇提取方法研究
向志刚 ,张　梅 ,黄传维 ,胥红卫
(重庆新禹投资集团 ,重庆　409000)
　　中图分类号:S859.7　 　　　　　　文献标识码:A　　文章编号:1000 -6354(2007)04 - 0043 -02
　　水苏糖(S tachyo se)属于棉子糖属半乳糖苷类非还原性
功能性低聚糖。提取水苏糖的主要工业原料为草石蚕 (Ch i-
nese artichoke),又名宝塔菜 、地牯牛 、甘露子 、地瘤等 , 在我国
重庆 、江苏 、河北等地都有种植 。草石蚕块茎螺旋状 , 含约
12% ～ 15%以水苏糖为主的低聚糖 [ 1] 。水苏糖提取国内外
研究较少。从植物原料中提取糖类常用的方法有热水浸提
法 、酸浸提法 、碱浸提法 、酶法等。由于许多糖提取原料细胞
粗大 ,壁厚 , 用水提法糖类难以从胞内扩散出来 , 需要多次浸
提 ,提取温度较高 , 或将植物材料研磨较细 ,操作时间长 , 得
率低。用乙醇溶液作为提取剂 ,不仅选择性好 、渗透性强 、浸
出率高 、安全 , 而且减少了蛋白质的溶出 , 减少了后续操作 ,
加速有效成分的释放 , 提取工艺简便 , 提取率和生产效率提
高 [ 1 , 2] 。
1　原料与试剂
1. 1　原料
新鲜草石蚕 , 产自重庆市黔江区 , 将其洗净后 , 晾晒 1
收稿日期:2007 -03 - 05
基金项目:重庆市发改委重大产业化关键技术开发项目 [ (渝发改计
(2006)844号 ]资助
作者简介:向志刚(1964 - ),男 ,经济师 ,研究方向:产业经济发展。
周后 ,在 2 - 4℃冷藏箱中贮存 3个月。
1. 2　试剂
乙腈 、水苏糖和标准品 ,苯酚 、氢氧化钙磷酸 、活性炭粉
等。
1. 3　试验仪器
Agilen t 1100高效液相色谱仪 , UV - 4801H 型紫外可见
分光光度计;XM TB数显恒温水浴锅;JB90一 B型强力电动
搅拌机;UEOS一 503外压式中空纤维超滤器;示差折光率
检测器 , Ag ilent Zorbax Ec lipse XDB -C18色谱柱 (4. 6 mm ×
250 mm , 5 m)。
2　实验方法
2. 1 　水苏糖的 HPLC分析
2. 1. 1 　色谱条件　称取水苏糖标准品 , 用双蒸馏水溶解 ,
定容转移至 25 m l容量瓶中 , 稀释至刻度 , 摇匀 , 通过 0. 45
μm微孔膜过滤后 , 用微量进样器直接进样 , 进样量 25
μl, 柱温 30 ℃, 流动相为双蒸馏水 , 流速为 1 m l /m in, 用示差
折光率检测器检测。
2. 1. 2　水苏糖标准曲线的绘制 [ 6] 　分别制配 1. 00、2.00、
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实验技术
4. 00、 8. 00、 16. 00、 24. 00 mg /m l的 6个浓度标准溶液 , 并用
HPLC测定各浓度下水苏糖的峰面积 ,峰面积对浓度绘制标准
曲线(见图 1),得回归方程:y=0. 726x+1.228, r=0. 992 21。
图 1　水苏糖峰面积对浓度标准曲线
2. 2　水苏糖提取和样品水苏糖含量的测定 [ 4, 5]
称取草石蚕鲜基 10 g,置于保温反应器中 , 设计提取温
度 、乙醇浓度 、物料溶剂比 、提取时间 4个因素交叉影响的
正交试验 L(34), 提取后静置 5 m in后 , 倾出上清液 ,测定体
积为 V 1。按本文 2. 1. 1方法将上清液注入高效液相色谱
仪中 , 测定峰面积 , 外标法计算 , 即得样品水苏糖浓度
(C
1
)。反应器中再加入一定量的 70%乙醇至 160 m l, 10
次提取后 , 合并提取液 , 测得体积 V , 浓度为 C。 则水苏糖
得率 η按下式计算:η= C1 V 1 /V C ×100%。试验设
3个重复。
3　结果与分析
结果见表 1、表 2。从表 1、表 2可以看出 , 物料溶剂比
(D)P =0. 002 4, 是最显著的因素 , 对水苏糖得率影响最大 ,
物料溶剂比越大 ,水苏糖得率越高 , 物料溶剂比为 1∶16时 ,
水苏糖得率都在较高水平 , 平均为 70. 9%;其次提取温度
(A)P =0. 012,是显著的因素 ,对水苏糖得率影响较大 ,提取
温度越高 ,水苏糖浸出率逐渐升高 , 但研究还发现当温度过
高时其它可溶性多糖溶出较多 。再次 D(提取时间)因素的
P =0. 045, 对水苏糖得率也有重要影响 , 随着提取时间的增
加 ,水苏糖得率逐渐升高;而 C(溶剂浓度 )因素的 P =0.
514,对水苏糖得率影响较小。
表 1　正交试验设计和结果
实验号
A B C D
提取温度
/℃
提取时间
/m in
酒精浓度
/%
物料溶剂比
/m g m l- 1
水苏糖
得率 /%
1 30 30 60 1∶8 38. 8
2 30 50 70 1∶12 57. 9
3 30 70 80 1∶16 70. 1
4 50 30 70 1∶16 70. 4
5 50 50 80 1∶8 44. 2
6 50 70 60 1∶12 52. 7
7 70 30 80 1∶12 63. 4
8 70 50 60 1∶16 74. 4
9 70 70 70 1∶8 46. 7
表 2　方差分析
项目 自由度 　离差平方和 F值 P >F
模型 8 289. 21 13. 84 0. 002 8
误差 9 108. 65
总计 17 299. 76
A 2 121. 45 16. 87 0. 012
B 2 168. 74 14. 58 0. 045
C 2 24. 84 1. 24 0. 514
D 2 1 154. 35 40. 48 0. 002 4
4　结论
以草石蚕鲜基为原料 ,用乙醇 -水提取水苏糖的最佳工艺
条件为:提取温度为 50℃,溶剂体积分数为 70%,物料溶剂比为
1∶16,提取时间为 30 m in,该条件下水苏糖提取率为 70. 4%。
参考文献:
[ 1] 粱丽心.水苏糖的提取及初步精制工艺的研究 [ J] .中国
食品添加剂 , 2005(6):25 - 28.
[ 2] 詹少春 , 梁立新 , 邹　芳 , 等 . 用乙醇 -水从双液相棉
粕中提取棉子糖的研究 [ J] . 南京工业大学学报 ,
2006, 28(1):46 - 49.
[ 3] 龚　韬 ,李光慧. H PLC测定双歧因子口服液中水苏糖的
含量 [ J] .中国中药杂志 , 1999(6):23 -26.
[ 4] 郝林华 ,陈靠山 , 李光友. 牛蒡菊糖及其制备方法的研
究 [ J] . 中国海洋大学学报 , 2004, 34(3):423 -428.
[ 5] 王谢忠,胡庭俊 ,李晓明 ,等.蕨麻多糖的提取 、含量测定和
理化性质研究 [ J] .中兽医医药杂志 , 2006, 25(2):34 - 35.
临 床 集 锦
牛传染性角膜结膜炎的诊治
　　2005年 10月 15日 ,新疆兵团农八师 122团某牛场从江
苏苏州引进澳大利亚后备牛 100头 , 10月 17日先后出现以
结膜充血 、羞明流泪 、眼睑肿胀 、角膜溃疡为特征的疾病。发
病 75例 ,后采用中西医结合治疗 ,全部治愈。
1　临床症状
有 60头牛双眼或单眼患病 , 后发展到 75头。 初期流泪
羞明 ,眼睑肿胀;后期角膜凸起 ,周围充血 、水肿 ,结膜和瞬膜
红肿;或在角膜上发现白色或灰色小点 、眼角周围有粘脓性
分泌物。病情严重者 , 角膜增厚 、溃疡 , 形成角膜翳或失明。
2　诊治
根据典型症状确诊为牛传染性角膜结膜炎。将病牛隔
离饲养。病情较轻者用长效土霉素 、地塞米松 、生理盐水以
1∶1∶1配成眼药水滴眼 , 4次 /天 , 一般 2 - 3天即可痊愈。重
症者用防风 30 g,荆芥 30 g,黄连 30 g,黄芩 30 g,煅石决明 60 g,
草决明 60 g,青葙子 60 g,龙胆草 15 g,蝉蜕 15 g,没药 24 g,甘
草 12 g。水煎服。热毒盛者加金银花 、连翘 、菊花 、蒲公英。
(新疆农八师 122团畜牧服务中心　832062　尹　懋)