全 文 ：文章编号:1005-376X(2004)05-0272-04 【论　　著】
水苏冲剂免疫调节作用的研究
杨静 ,梁耀锋 ,李蔚
(西安德施普生物制品有限责任公司 ,陕西 西安　710061)
　　【摘要】　目的　研究以水苏糖为主要功能组分的水苏冲剂的免疫调节作用。方法　通过实验鼠进行免疫调
节实验 ,观察该微生态调节剂的作用。结果　细胞免疫功能测定:小白鼠迟发型变态反应(DTH)结果为阳性;ConA
诱导小白鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT)结果为阳性。体液免疫功能测定:(1)抗体生成细胞检测(PFC)结果为阳性 ,
(2)血清溶血素测定结果为阳性。单核-巨噬细胞功能测定:小白鼠碳粒廊清试验结果为阴性;小白鼠腹腔巨噬细胞
吞噬鸡红细胞试验结果为阴性。脏/体比值测定结果为阴性。结论　该次实验观察到“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠
细胞免疫和体液免疫功能试验结果均为阳性 ,故证明“水苏牌水苏冲剂”具有免疫调节作用。
【关键词】　低聚糖;水苏糖;免疫调节;水苏冲剂
【中图分类号】R378.992　　　　【文献标识码】A
Study on the immunologic enhancement of health food made by stachyose
YANG Jing ,LIANG Yao-feng ,LI Wei
(SPAN DESHIPU BIO-INDUSTRY CO., LTD , Xi an 710061 , China)
　　【Abstrsact】　Objective　To study the immunologic enhancement of health food made by stachyose.Method　We adopted
animal experiment to investigate the immunologic enhancement of the health food on mouse.Reult　The cellular immunity test in-
dicated that the result of DTH andMTT were positive.The humoral immunity test indicated that the result of PFC and blood serum
hemolysin test were positive too.Conclusion　Because the result of the cellular immunity test and the humoral immunity test were
positive.we could come to a conclusion that the health food made by stachyose had enhancing immune function.
【Key words】　Ligosaccharide;Stachyose;Enhancing immune function
　　低聚糖是由 2 ～ 10个单糖通过糖苷键连接形成
的直链或支链的低度聚合糖。实验证明 ,功能性低
聚糖具有促进双歧杆菌增殖 , 改善肠内环境的功
能[ 1] 。水苏糖作为功能性低聚糖的一种 ,是优良的
双歧杆菌增殖因子 ,具有多种保键功能 ,但其对免疫
系统的作用尚未见报道。水苏冲剂是由天然植物提
取高纯度水苏糖制成 ,为了观察其对免疫系统的作
用 ,笔者通过动物实验 ,得出以下结果。
1　材料与方法
1.1　样品　“水苏牌水苏冲剂”中水苏糖(含水苏
糖 、棉子糖)含量不少于 76%,由西安德施普生物制
品有限责任公司提供。人体推荐量为每人每天 6.0
g[ 0.1 g/kg·d] 。用蒸馏水配制各剂量浓度。
1.2　实验动物　由第四军医大学实验动物中心提
供 ,健康成年二级昆明种雌性小白鼠 200只(医动字
08-013号),体重 18 ～ 22 g 。
1.3　实验方法　按上述剂量各组每天灌胃 1次 ,
【收稿日期】2004-05-19
【作者简介】杨静(1978-), 女 ,助理工程师 , 从事食品 、保健食品及药
品的研究开发;梁耀锋 ,通讯作者
连续30 d后对动物进行各项免疫指标测定。
1.3.1　小白鼠迟发型变态反应(DTH)测定　灌胃
第 26天给小白鼠腹腔注射 2%绵羊红细胞(SRBC)
0.2ml/只 ,于免疫后第 4天 ,于小白鼠左后足跖部
皮下注射 2%SRBC(20 UL/只),进行攻击 。并于攻
击前和攻击后 24 、48 h 分别测量小白鼠左后足跖同
一部位厚度 ,计算攻击前 、后的差值 ,结果进行方差
分析。
1.3.2　ConA 诱导小白鼠脾淋巴细胞转化试验
(MTT)测定　对各组小白鼠无菌取脾 ,制脾细胞悬
液 ,用 RPMT 1640 完全培养液调整脾细胞浓度为 2
×106 个/ml ,按照程序中 MTT 法 ,进行淋巴细胞增
殖反应 ,最后在 752-C 紫外可见分光光度计 570 nm
波长处 ,测其吸光度值(A),计算 ConA+与 ConA-各
孔的吸光度值差 ,结果进行方差分析 。
1.3.3　小白鼠碳粒廓清试验　按顺序给各组小白
鼠尾静脉注射墨汁(4倍稀释)0.1 ml/(10g.bw)。小
白鼠均于注射墨汁后 2min及 10min ,分别准时内眦
采血20 μl ,并迅速加入到 2 ml 0.1%碳酸钠溶液摇
匀 。以 752-C紫外可见分光光度计 600 nm 波长处
测其吸光度值(A)。同时取小白鼠肝 、脾称重 ,按公
272 Chinese Journal of Microecology , October 2004 , Vol.16 No.5
DOI :10.13381/j.cnki.cjm.2004.05.006
式计算吞噬指数(a),结果进行方差分析。
1.3.4　小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验　
于末次给予受试物后 ,各组小白鼠均腹腔注射 20%
鸡红细胞悬液 1 ml/只 ,间隔 30 min处死小白鼠 ,腹
腔注入生理盐水 2 ml/只 ,振摇 1 min后取腹腔洗液
制片 ,37 ℃温育 30 min ,漂洗 、固定 ,染色镜检 。计
数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和巨噬细胞吞噬鸡红
细胞数 ,以吞噬率和吞噬指数进行方差分析。
1.3.5　抗体生成细胞检测(PFC)　于灌胃第 25 天
给小白鼠腹腔注射 2%SRBC 0.2 ml/只 ,于免疫后
第5天处死 ,解剖取脾制细胞悬液 ,用 RPMI 1640完
全培养液调整细胞浓度为 5×106 个/ml ,按程序方
法制备琼脂糖玻片 ,在二氧化碳培养箱中温育(37
℃、5%CO2)1.5 h后加补体 ,再温育 1.5 h。计数每
张琼脂薄层板上形成的溶血空斑数 ,结果进行方差
分析。
1.3.6　血清溶血素测定　于灌胃第 25天给小白鼠
腹腔注射2%SRBC(0.2 ml/只),于免疫后第 5天摘
眼球取血 ,分离血清并在微量血凝板上进行血清溶
血素测定。37 ℃孵育3 h后 ,统计血球凝集度 ,计算
相应抗体积数 ,结果进行方差分析。
1.3.7　脏/体比值测定　解剖各组小白鼠取胸腺 、
脾脏称重 ,计算胸腺/体重比值及脾脏/体重比值 ,结
果进行统计分析(t检验)。
2　结果
2.1　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠体重的影响　见
表 1 ～ 5。
2.2　小白鼠迟发型变态反应(DTH)
表 1　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠体重的影响(DTH)
组别
[ g/(kg·bw)]
动物数
(只)
始重
(g)
中期重
(g)
终重
(g)
增重
(g)
3.00 10 20.0±1.2 26.8±1.6 32.3±1.8 12.3±1.4
1.50 10 20.1±1.0 26.8±1.8 32.6±2.1 12.5±2.4
0.75 10 20.3±1.0 26.5±1.3 31.9±2.1 11.6±2.2
溶剂对照 10 20.4±1.1 28.5±2.1 32.1±2.3 11.7±2.5
　注:经 t 检验 ,各剂量组体重增重与溶剂对照组间差异均无显著性(P>0.05)
表2　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠体重的影响(MTT)
组别
[ g/(kg.bw)]
动物数
(只)
始重
(g)
中期重
(g)
终重
(g)
增重
(g)
3.00 10 20.0±1.2 28.9±1.9 32.1±2.1 12.1±2.4
1.50 10 20.0±1.2 29.8±2.2 32.4±2.5 12.4±2.1
0.75 10 20.0±1.2 29.0±2.2 34.6±3.0 11.6±3.0溶剂对照 10 19.9±1.2 29.0±3.1 31.9±3.5 12.0±3.2
　注:经 t 检验 ,各剂量组体重增重与溶剂对照组间差异均无显著性(P>0.05)
表 3　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠体重的影响(PFC)
组别
[ g/(kg·bw)]
动物数
(只)
始重
(g)
中期重
(g)
终重
(g)
增重
(g)
3.00 10 19.9±1.4 27.1±2.6 32.4±1.6 12.5±2.0
1.50 10 20.0±1.5 27.2±2.3 31.3±2.9 11.3±3.0
0.75 10 20.0±1.5 27.1±1.7 30.9±2.1 10.9±2.4溶剂对照 10 20.0±1.5 27.3±1.9 31.6±1.3 11.6±1.4
　注:经 t 检验 ,各剂量组体重增重与溶剂对照组间差异均无显著性(P>0.05)
表 4　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠体重的影响(碳粒廓清)
组别
[ g/(kg.bw)]
动物数
(只)
始重
(g)
中期重
(g)
终重
(g)
增重
(g)
3.00 10 18.2±0.4 30.3±2.3 32.8±3.1 14.6±3.2
1.50 10 18.7±1.1 31.0±2.2 33.4±1.9 14.7±2.1
0.75 10 18.7±1.1 30.5±2.0 33.0±1.5 14.3±1.7溶剂对照 10 18.6±0.8 30.8±2.2 33.1±2.6 14.5±2.8
　注:经 t 检验 ,各剂量组体重增重与溶剂对照组间差异均无显著性(P>0.05)
　　中剂量组用 SRBC 攻击前后(间隔 24 h),足跖厚
度差值与对照组间差异有显著性(P <0.05),高 、低
剂量组小白鼠差值与对照组差异无显著性(P >
0.05)。
2.3　ConA诱导小白鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT)
273中国微生态学杂志　2004 年 10月第 16 卷第 5期
表 5　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠体重的影响(吞噬鸡红细胞试验)
组别
[ g/(kg·bw)]
动物数
(只)
始重
(g)
中期重
(g)
终重
(g)
增重
(g)
3.00 10 21.0±1.1 26.9±2.5 30.3±1.8 9.3±2.1
1.50 10 21.0±1.1 27.1±2.7 30.7±2.5 9.7±2.5
0.75 10 20.9±1.2 26.0±2.1 29.9±2.0 9.0±2.7溶剂对照 10 21.0±12 25.6±2.2 31.1±3.8 10.1±4.3
　注:经 t 检验 ,各剂量组体重增重与溶剂对照组间差异均无显著性(P>0.05)
表 6　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠 DTH 反应结果(24 h)
组别[ g/(kg·bw)] 动物数(只) 足跖厚度差值(mm)(x±s) q 值 P 值
3.00 10 0.0606±0.0131 1.554 >0.05
1.50 10 0.0744±0.0052 2.241 <0.05
0.75 10 0.0723±0.0057 1.660 >0.05溶剂对照 10 0.0663±0.0061
　注:F=5.951 , P<0.01
　　各剂量组小白鼠 ConA+与 ConA- A 差值均高于
对照组 ,其中高剂量组小白鼠 ConA+与 ConA- A 差
值与对照组间差异有高度显著性(P <0.01),中 、低
剂量组与对照组间差异均无显著性(P>0.05)。
表 7　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠 DTH 反应结果(48 h)
组别
[ g/(kg·bw)]
动物数
(只)
足跖厚度差值(mm)
(x±s) F 值 P 值
3.00 10 0.0425±0.0104
1.50 10 0.0455±0.0076 0.0918 >0.05
0.75 10 0.0400±0.0048溶剂对照 10 0.0431±0.0055
　注:各剂量组用 SRBC攻击前后(间隔 48 h)足跖厚度差值与对照组间差异无显著性(P>0.05)
表 8　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT)结果
组别
[ g/(kg·bw)]
动物数
(只)
足跖厚度差值(mm)
(x±s) F 值 P 值
3.00 10 0.1166±0.0390 3.159 <0.01
1.50 10 0.0863±0.0460 1.300 >0.05
0.75 10 0.0840±0.0350 1.159 >0.05溶剂对照 10 0.0651±0.0237
　注:F =3.350 , P <0.05
2.4　小白鼠碳粒廓清试验　见表 9。
2.5　小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验　见表
10。
2.6　抗体生成细胞检测(PFC)　见表 11。
表 9　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠碳粒廓清试验结果
组别
[ g/(kg·bw)]
动物数
(只) 吞噬指数 F 值 P 值
3.00 10 4.7814±0.7004
1.50 10 4.4619±0.3850 0.7988 >0.05
0.75 10 4.4421±0.9245溶剂对照 10 4.3851±0.3296
　注:高 、中和低剂量组小白鼠碳粒廓清吞噬指数均略高于对照组 , 但其差异均无显著性(P>0.05)
表 10　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验结果
组别
[ g/(kg·bw)]
动物数
(只)
计数巨噬
细胞数
吞噬率(%)
x±s F 值 P 值
吞噬指数
x±s F 值 P 值
3.00 10 100×10 43.80±9.02 0.81±0.15
1.50 10 100×10 44.80±9.02 0.9096 >0.05 0.93±0.11 1.475 >0.05
0.75 10 100×10 43.30±9.23 0.88±0.17溶剂对照 10 100×10 38.90±7.19 0.82±0.15
　注:各剂量组小白鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率 、吞噬指数与对照组间差异均无显著性(P >0.05)
274 Chinese Journal of Microecology , October 2004 , Vol.16 No.5
　　各剂量组溶血空斑数均高于对 照组 ,其中 高剂
量组小白鼠溶血空斑数与对照组间差异有显著性
(P <0.05),中 、低剂量组小白鼠溶血空斑数与对照
组间差异均无显著性(P>0.05)。
表 11　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠抗体生成细胞试验结果
组别
[ g/(kg·bw)]
动物数
(只)
溶血空斑数/ 106脾细胞
(x±s) q 值 P 值
3.00 10 870.0±194.1 2.980 <0.05
1.50 10 719.0±310.6 1.542 >0.05
0.75 10 783.0±208.2 2.151 >0.05溶剂对照 10 557.0±207.8
　注:F =3.168 , P <0.05
表 12　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠血清溶血素测定结果
组别
[ g/(kg·bw)]
动物数
(只)
足跖厚度差值(mm)
(x±s) q 值 P 值
3.00 10 198.20±24.41 3.464 <0.01
1.50 10 198.10±37.85 3.457 <0.01
0.75 10 177.90±36.86 2.011 >0.05溶剂对照 10 149.80±22.75
　注:F =5.366 , P <0.01
2.7　血清溶血素测定见表 11　高 、中剂量组体积数
与对照组间差异均有高度显著性(P<0.01)。
2.8　脏/体比值测定
表 13　“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠脏/体比值(%)测定结果
组别
[ g/(kg·bw)]
动物数(只)
胸腺/体
(x±s)
脾/体
(x±s)
3.00 10 0.3710±0.0746 0.5710±0.0945
1.50 10 0.3190±0.0799 0.6350±0.3455
0.75 10 0.3340±0.0591 0.5250±0.1165溶剂对照 10 0.3640±0.0966 0.5380±0.0801
　注:经 t 检验 , 各剂量组小白鼠胸腺/体 、脾/体与对照组间差异均无显著性(P>0.05)
2.9　测定结果　细胞免疫功能测定:小白鼠迟发变
态反应(DTH)结果为阳性;ConA诱导小白鼠脾淋巴
细胞转化试验(MTT)结果为阳性 。体液免疫功能测
定:抗体生成细胞检测(PFC)结果为阳性;血清溶血
素测定结果为阳性。单核-巨噬细胞功能测定:小白
鼠碳粒廓清试验结果为阴性;小白鼠腹腔巨噬细胞吞
噬鸡红细胞试验结果为阴性。脏体比值测定结果为
阴性 。该实验观察到“水苏牌水苏冲剂”对小白鼠细
胞免疫和体液免设功能试验结果均为阳性 ,故说明
“水苏牌水苏冲剂”具有免疫调节作用。
3　讨论
实验结果表明水苏冲剂具有免疫调节作用。其
原因可能是水苏糖促进肠内有益菌 ,特别是双歧杆菌
的增殖 ,改善肠道内环境[ 1] 。而双歧杆菌对健康的作
用包括生物学屏障 ,合成多种维生素 、控制内毒素血
症 、抑制腐败细菌在肠道内腐化 、预防和治疗与抗生
素有关的腹泻 、抗肿瘤预防癌变及抗感染等[ 2 ,3] 。双
歧杆菌的免疫增强作用贯穿于以上各种作用机制中。
多种实验均证明双歧杆菌及其表面 LTA 、WPG 、SC 能
增强小白鼠脾 NK 、LAK细胞杀伤肿瘤靶细胞的活性 ,
对细胞因子活性的增强作用主要表现为对腹腔局部
巨噬细胞来源的细胞因子 IL-1 、TNF 、IL-6活性增强。
这些细胞因子具有广泛的生物活性 ,能增强免疫系统
抗病原微生物的感染[ 4] 。但水苏冲剂具体免疫调节
的作用机制有待进一步探讨 。
从天然植物中提取功能低聚糖 ,作为微生态健康
产品的功能组分 ,通过促进肠内有益菌 ,特别是双歧
杆菌的增殖起到调节免疫作用 ,其突出特点是无任何
毒副作用[ 4] , 目前国内高纯度功能性低聚糖产品较
为少见。
【参考文献】
[ 1] 李迎慧 ,刘衡川 ,余倩 ,等.长康双歧菌增殖胶囊对肠道菌群影响
的研究[ J] .中国微生态学杂志 , 2001, 13(3):138-139.
[ 2] 神谷茂 ,小泽敦.肠内菌丛的意义[ J] .临床检查 , 1994 , 38(5):521.
[ 3] Hoover DG.Bifidobacteria activity and potential benefit s[ J] .Food Technol ,
1993 , 47(6):120.
[ 4] 蓝景刚 ,胡宏.双歧杆菌抗衰老作用的初步研究[ J] .中国微生态
学杂志 , 1995, 7(6):8-10.
275中国微生态学杂志　2004 年 10月第 16 卷第 5期