全 文 ：收稿日期：2012-04-18
基金项目：广西自然科学基金重点项目（2010GXNSFD013022）；广西研究生教育创新计划资助项目（GXUIIT32526）
作者简介：*为通讯作者，胡庭俊（1965-），教授，博士生导师，主要从事中兽药研究与开发工作，E- mail：tingjunhu@126.com。陶俊
宇（1985-），研究方向为兽医药理毒理学，E- mail：gba_hades@163.com
蛇含委陵菜提取物对人工感染鸡白痢的治疗效果
陶俊宇，胡庭俊*，班丽萍
（广西大学动物科学技术学院，南宁 530005）
摘要：【目的】探讨蛇含委陵菜提取物对雏鸡白痢的治疗效果。【方法】采用不同提取方法（水煎法、水煎醇提法、微
波提取法、乙酸乙酯提取法、乙醇分级提取法）对蛇含委陵菜进行提取，测定不同极性段提取物的最小抑菌浓度（MIC），
筛选出最佳提取方法，然后以蛇含委陵菜水提物自拟高、中、低3个剂量组，经口灌服人工感染鸡白痢沙门氏菌的1日龄
雏鸡，以诺氟沙星为药物对照，评价其对雏鸡白痢病的治疗效果。【结果】水煎法获得的蛇含委陵菜水提物对鸡白痢沙
门氏菌和鸡大肠杆菌的抑制效果最佳，MIC分别为5.21和10.41 mg/mL；在人工感染治疗试验中，雏鸡在感染鸡白痢沙门
氏菌18 h后，以每天经口灌服1次蛇含委陵菜水提物（0.75 mL /羽），连续3 d，其治疗有效率达86.7%。【结论】蛇含委陵菜
水提物对革兰氏阴性菌具有良好的抑制效果，安全低毒，原材料价廉易得，具有较高的研发价值。
关键词：蛇含委陵菜；提取物；鸡白痢；沙门氏菌；治疗效果
中图分类号：S853.75 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2012）09-1391-04
0 引言
【研究意义】鸡白痢是由沙门氏菌感染引起的一
种最常见传染病，既可以垂直传播又可以水平传播，
且以两周龄内的雏鸡最易感，3周龄以上的鸡发病后
极少死亡，但耐过鸡发育不良，多呈隐性感染并持续
向外界排出病菌，生长速度和产蛋量严重下降（周
妍，2011）。目前，该病的防治主要依靠抗生素，但在
取得一定效果的同时也带来耐药菌株和肉蛋药物残
留的问题。蛇含委陵菜（Potentilla kleiniana）又名蛇
含、蛇衔，为蔷薇科委陵菜属多年生宿根草本植物，
广泛分布于我国西南、中南、华东及陕西、西藏等地，
其有效成分为蛇含鞣质、仙鹤草素和长梗马铃素。蛇
含委陵菜味苦，微寒，归肝、肺经，全草入药，对百日
咳、痢疾、疟疾及带状疱疹均有很好的治疗效果。【前
Therapeutic effect of Potentilla kleiniana extract against
experimental Salmonella pullorum in chicken
TAO Jun- yu，HUTing- jun*，BANLi- ping
（College of Animal Science and Technology，Guangxi University，Nanning 530005，China）
Abstract：【Objective】The present experiment was aimed to evaluate the therapeutic effect of Potentilla kleiniana ex-
tract against experimental Salmonella pullorum in chicken. 【Method】Five extracting methods viz.， water decoction， water
decoction combined with ethanol extracting， microwave extracting， ethyl acetate extracting and ethanol grading extracting
were used to extract Potentilla kleiniana and minimal inhibitory concentration （MIC） in several extracts of different polarity
zones were measured to screen out the best extraction method； subsequently， the Potentilla kleiniana extract with three
different dosages （high， moderate， and low） were drenched to treat one-day-old chicks infected with artificial Salmonella
pullorum， then the therapeutic effects were assessed using norfloxacin as the medical control. 【Result】The water extract，
obtained from water decoction， showed the most potent antimicrobial activity to Salmonella pullorum and Escherichia coli
in chicken， and the MIC of Salmonella pullorum and Escherichia coli were 5.21 and 10.41 mg/mL， respectively. The opti-
mal treatment effective rate of chicken reached 86.7% through drenching 0.75 mL/chicken once a day for 3 days consecu-
tively after infecting Salmonella pullorum for 18 hours. 【Conclusion】Safe， inexpensive， and low-toxic Potentilla kleiniana
extract could effectively inhibit gram-negative bacterium； hence， Potentilla kleiniana extract is of high research and de-
velopmental value.
Key words： Potentilla kleiniana； extract； pullorum disease； Salmonella pullorum； therapeutic effect
DOI：10.3969/j：issn.2095-1191.2012.09.1391
南方农业学报 JOURNAL OF SOUTHERN AGRICULTURE 2012，43（9）：1391-1394
ISSN 2095-1191；CODEN NNXAAB http：//www.nfnyxb.com
南 方 农 业 学 报
人研究进展】Okuda等（1982）首次从蛇含委陵菜中分
离获得蛇含鞣质，并对其分子结构进行测定。孙丽群
（2002）以蛇含委陵菜为君药治疗带状疱疹，其疗效
显著。黄易安等（2008）以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正
丁醇对蛇含委陵菜全草95%乙醇提取物进行分段萃
取，再以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、枯草
杆菌、藤黄微球菌为受试菌，测定各萃取物的抑菌活
性，结果表明，乙酸乙酯萃取物具有良好的抑菌活
性，尤其对金黄色葡萄球菌的抑制效果显著，最小抑
菌浓度（MIC）≤0.33 mg/mL。许正刚和闵运江（2010）
采用正交设计从样品浓度、上样量、乙醇洗脱液浓
度、乙醇洗脱液用量等方面，对AB- 8型大孔树脂纯化
委陵菜黄酮的工艺条件进行优化，发现委陵菜黄酮
在水浴温度70℃、乙醇浓度40%、固液比1∶100的条件
下提取3次的效果最佳。【本研究切入点】广西民间素
有以蛇含委陵菜治疗蛇虫咬伤和小儿惊风，但在兽
医临床应用上未见相关报道。【拟解决的关键问题】
采用不同提取方法对蛇含委陵菜全草进行提取，测
定相应提取物的MIC，筛选出最佳提取方法，并进行
水提物对人工感染鸡白痢沙门氏菌的治疗试验，以
期为蛇含委陵菜提取物在防治鸡白痢上的应用提供
参考依据。
1 材料与方法
1. 1 试验材料
蛇含委陵菜购于南宁市山草堂，晒干除杂粉碎
后备用。健康1日龄雄性凤翔雏鸡购于南宁市禽苗市
场，共90羽，购回后按免疫程序接种马立克疫苗，经
检测无鸡白痢母源抗体，按照种鸡饲养管理程序进
行饲养管理。昆明种小鼠购于广西医科大学实验动
物中心，体重约120 g，雌雄各半，共30只。鸡白痢鸡伤
寒多价染色抗原购于中国兽医药品监察所；诺氟沙
星由广西北斗星动物保健品有限公司提供；大肠杆
菌标准株、鸡大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌、白色念珠
菌及金黄色葡萄球菌由广西大学动物科学技术学院
药理实验室提供，均以比浊法配置成3×108 CFU/mL
备用。
1. 2 蛇含委陵菜提取物的制备
1. 2. 1 水煎法 准确称取蛇含委陵菜粉末20 g，料
水比依次为1∶10、1∶8和1∶8，100℃水浴煎煮3次，每次
1.5 h。分别用4层灭菌纱布过滤，合并3次滤液，经
3000 r/min离心30 min后取上清液，进行减压蒸发浓
缩，最后定容至20 mL。
1. 2. 2 水煎醇提法 先按水煎法提取蛇含委陵菜，
经减压蒸发浓缩至60 mL后加入95%乙醇，使乙醇含
量达到80%，静置24 h后过滤，滤液经3000 r/min离心
30 min，再取上清液进行减压蒸发去除乙醇，浓缩定
容至20 mL。
1. 2. 3 微波提取法 准确称取蛇含委陵菜粉末
20 g，加入200 mL水后置于微波样品处理系统中，
100℃下处理15 min。经4层灭菌纱布过滤后，3000
r/min离心30 min，取上清液进行减压蒸发浓缩，最后
定容至20 mL。
1. 2. 4 乙酸乙酯提取法 先按水煎醇提法提取蛇
含委陵菜，经减压蒸发去除乙醇后，用乙酸乙酯萃取
24 h，减压蒸发去除溶剂，最后定容至20 mL。
1. 2. 5 乙醇分级提取法 准确称取蛇含委陵菜粉
末3份，每份20 g，分别以95%乙醇、70%乙醇和45%乙
醇浸提3次，每次的乙醇剂量均为200 mL，浸提时间
为48、24和24 h。然后分别用4层灭菌纱布过滤，合并3
次滤液，3000 r/min离心30 min，取上清液经减压蒸发
去除乙醇，定容至20 mL。
上述蛇含委陵菜提取液经减压蒸发浓缩定容
后，再以115℃高压灭菌15 min，然后4℃保存备用。
1. 3 MIC测定
采用试管二倍稀释法：取灭菌试管12支并编号，
按1~12的编号排列于试管架上，按无菌操作要求分
别加入营养肉汤0.5 mL，然后吸取蛇含委陵菜提取液
0.5 mL置于第1管，混匀后从第1管吸取0.5 mL加入第
2管，同样混匀后吸取0.5 mL放入第3管。依此法逐管
稀释至第10管，第10管弃除0.5 mL，第11管不加蛇含
委陵菜提取液作为阳性对照，第12管不加菌液作为
阴性对照；前11管均分别加入0.5 mL备用菌液。此外，
每份样品均依照上述方法制作其不加菌液的平行对
照样品。37℃培养12 h后取出试管观察细菌生长情
况。MIC判定标准：37℃培养12 h后，每试管内吸取
100 μL液体用酶标仪测定OD值，并结合肉眼观察各
管内细菌生长情况。
1. 4 急性毒性试验
将30只小鼠随机分为低、中、高剂量3组，每组10
只，分别按5.0、7.5和10.0 g/kg的剂量经口灌服蛇含委
陵菜提取液，给药后7 d内连续观察小鼠精神状态、食
欲、呼吸、运动等，第8 d处死小鼠，剖检观察其心脏、
肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃和胸腺的病理变化。
1. 5 人工感染鸡白痢治疗试验
将90羽雏鸡随机分成6组，每组15羽，其试验设
计如表1所示。第15日龄时除空白组外其余试验鸡均
采血做平板凝集试验，并结合临床表现情况判断发
病率。疗效判定标准：（1）治愈。用药后临床症状消
失，精神及采食情况恢复正常，平板凝集试验无凝集
反应判为治愈。（2）显效。用药后临床症状明显减轻，
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陶俊宇等：蛇含委陵菜提取物对人工感染鸡白痢的治疗效果
精神及采食情况基本恢复到发病前的状态，平板凝
集试验有微量凝集反应。（3）有效。用药后临床症状
减轻，精神及采食情况没有恢复到发病前的状态，平
板凝集试验有多量凝集反应。（4）无效。用药后临床
症状未见减轻，平板凝集试验有大量凝集反应或发
病鸡死亡，剖检有特征性病理变化。
表 1 人工感染鸡白痢病治疗试验设计
Tab.1 Treatment design of experimental pullorum disease
攻毒 Injected by
3日龄时经口灌服9×108 CFU/mL
鸡白痢沙门氏菌
3日龄时经口灌服9×108 CFU/mL
鸡白痢沙门氏菌
3日龄时经口灌服9×108 CFU/mL
鸡白痢沙门氏菌
3日龄时经口灌服9×108 CFU/mL
鸡白痢沙门氏菌
3日龄时经口灌服9×108 CFU/mL
鸡白痢沙门氏菌
不攻毒
治疗 Treatment
感染18 h后经口灌服蛇含委陵菜提取液，
0.25 mL/羽，1次/d，连续3 d
感染18 h后经口灌服蛇含委陵菜提取液，
0.50 mL/羽，1次/d，连续3 d
感染18 h后经口灌服蛇含委陵菜提取液，
0.75 mL/羽，1次/d，连续3 d
感染18 h后经口灌服诺氟沙星原粉，
2 mg/羽，1次/d，连续3 d
不进行药物治疗
不进行药物治疗
2 结果与分析
2. 1 MIC测定结果
由表2可知，各种提取方法中以水煎法获得的蛇
含委陵菜水提物对鸡白痢沙门氏菌和鸡大肠杆菌的
抑制效果最佳，MIC分别为5.21和10.41 mg/mL，而对白
色念珠菌和金黄色葡萄球菌的MIC分别为10.41和
20.83 mg/mL，表明蛇含委陵菜水提物对革兰氏阴性菌
和革兰氏阳性菌均有很好的抑制效果。
表 2 蛇含委陵菜提取物对不同细菌的MIC（mg/mL）
Tab.2 MIC of Potentilla kleiniana extract on different bacterium
蛇含委陵菜水提物 Potentilla kleiniana extract 水煎法 41.67 10.41 5.21 10.41 20.83
蛇含委陵菜水提醇沉物 Potentilla kleiniana alcohol precipitation 水煎醇提法 10.41 20.83 41.67 10.41 5.21
蛇含委陵菜微波提取物 Potentilla kleiniana microwave extract 微波提取法 20.83 83.33 10.41 20.83 41.67
蛇含委陵菜乙酸乙酯提取物 Potentilla kleiniana ethyl acetate extract 乙酸乙酯提取法 10.41 83.33 10.41 20.83 41.67
蛇含委陵菜95%乙醇浸提物 95% Potentilla kleiniana ethanol extract 乙醇分级提取法 83.33 83.33 83.33 83.33 83.33
蛇含委陵菜70%乙醇浸提物 70% Potentilla kleiniana ethanol extract 乙醇分级提取法 41.67 41.67 41.67 83.33 41.67
蛇含委陵菜45%乙醇浸提物 45% Potentilla kleiniana ethanol extract 乙醇分级提取法 41.67 41.67 5.21 5.21 41.67
提取方法
Extraction
method
大肠杆菌
标准株
Standard
strain of
Escherichia
coli
鸡大肠
杆菌
Escherichia
coli
鸡白痢沙
门氏菌
Salmonella
pullorum
白色念
珠菌
Candida
albicans
金黄色
葡萄球菌
Staphylococcus
aureus
提取物
Extract
2. 2 急性毒性试验结果
各处理组小鼠在给药后7 d内无死亡发生，被毛
有光泽，食欲和精神状态均正常。第8 d将小鼠处死，
剖检观察其心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃和胸腺的
病理变化，发现除高剂量组中有两只小鼠的肾脏有出
血点之外，其余小鼠的各脏器均无异常现象。
2. 3 人工感染鸡白痢治疗试验结果
由表3可知，低剂量组的死亡率为40.0%，未能获
得良好的疗效；高剂量组的有效率达86.7%，且高于药
物对照组（80.0%），说明蛇含委陵菜水提物对人工感
染鸡白痢的治疗效果随着水提物浓度升高而更佳，当
其使用剂量达到0.75 mL/羽时，蛇含委陵菜水提物对
鸡白痢沙门氏菌有良好的杀灭效果。
3 讨论
本研究以不同极性段溶剂对蛇含委陵菜的有效
成分进行提取，并对相应提取物的MIC进行测定，结果
表明，水溶性成分对以大肠杆菌和沙门氏菌为代表的
革兰氏阴性菌有很好的抑制效果，其中以水提法和
45%乙醇浸提法获得的提取物对鸡白痢沙门氏菌的
抑菌效果最佳，MIC均达5.21 mg/mL；此外，蛇含委陵
菜提取物对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌这两种革
兰氏阳性菌也有抑制效果，说明蛇含委陵菜水提物具
有广谱抗菌作用。蛇含委陵菜有效成分为蛇含鞣质、
仙鹤草素和长梗马铃素，蛇含鞣质和仙鹤草素为含有
α-葡萄糖单元的鞣花单宁二聚体（Okuda et al.，1984）。
已有研究表明，鞣质有抗肿瘤作用（宛春雷和金哲雄，
组别 Group
低剂量组 Low- dose
中剂量组Moderate- dose
高剂量组 High- dose
药物对照组Medical control
阳性对照组 Positive control
空白对照组 Blank control
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南 方 农 业 学 报
表 3 蛇含委陵菜水提物对人工感染鸡白痢的治疗效果
Tab.3 Therapeutic effect of Potentilla kleiniana extract against experimental Salmonella pullorum in chicken
低剂量组 Low- dose 15 5 4 6 40.0 60.0
中剂量组Moderate- dose 15 8 3 4 26.7 73.3
高剂量组 High- dose 15 11 2 2 13.3 86.7
药物对照组Medical control 15 9 3 3 20.0 80.0
阳性对照组 Positive control 15 0 0 7 46.7 -
空白对照组 Blank control 15 0 0 0 0 -
2011），具有较强的供氢能力，可以清除体内产生的氧
自由基从而发挥抗氧化作用（于莉和金哲雄，2009）；
此外还能影响细菌生物膜的形成，抑制细菌生物膜
信号的传导，从而达到抑菌作用（赵今等，2009）。蛇
含委陵菜水提物能抑制鸡白痢沙门氏菌的生长，可
能与蛇含鞣质的抑菌效果有关，但其抑制机理还需
进一步研究。
近年来，由于长期使用诺氟沙星，其耐药菌的产
生导致鸡白痢的预防和治疗效果不甚理想。此外，鸡
对诺氟沙星相当敏感，养殖过程中的中毒事件屡见不
鲜，雏鸡中毒主要表现为不安、尖叫、站立不稳且呈后
坐退行姿势，少数呈现神经症状，间歇发作，最后抽搐
呈角弓反张姿势直至死亡（周诗其和王大菊，1994）。雏
鸡发生诺氟沙星中毒时，除了采取更换饲料和加大饮
水量促进尿酸盐排出的补救措施外，目前尚无特效解
毒药。本研究的蛇含委陵菜水提物急性毒性试验结果
表明，蛇含委陵菜水提物是一种安全低毒的药物，10.0
g/kg的剂量之下未见小鼠死亡。而在人工感染治疗试
验中发现，蛇含委陵菜水提物使用剂量越大，对鸡白
痢沙门氏菌的抑菌效果越佳，且高剂量下对鸡白痢沙
门氏菌的治疗效果优于诺氟沙星。可见，蛇含委陵菜
水提物为兽医临床上防治鸡白痢沙门氏菌带来了新
的选择。
4 结论
蛇含委陵菜水提物对革兰氏阴性菌具有良好的
抑制效果，尤其对雏鸡白痢有很好的疗效，且安全低
毒、原材料价廉易得，因此具有较高的研发价值。
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（责任编辑 兰宗宝）
组别 Group 鸡只总数（羽）
Total number of chicken
治愈数（羽）
Recovered number
显效数（羽）
Effective number
死亡数（羽）
Dead number
死亡率（%）
Mortality rate
有效率（%）
Effective rate
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