全 文 ：云南大学学报 (自然科学版) 1998 , 20 (3):175 ～ 178 CN 53-1045/N　ISSN 0258-7971
Journal of Yunnan University
扶桑花醚不溶物 HR-2对体外培养的人绒毛膜组织及
小鼠离体子宫活动力的影响①
江　燕　　吕　琦　　赵翠兰　李开源　　崔悦礼　　周铭东　　马　岚
(云南大学生物系 , 昆明 , 650091 , 第一作者 40 岁 ,女 , 副教授)
摘要　不同浓度的扶桑花醚不溶物 HR-2对体外培养的人绒毛膜组织的形态 、HCG和孕酮分泌的影响.
观察了 HR-2 对小鼠离体子宫的刺激作用及不同阻断剂对子宫活动力的影响.结果表明:1)HR-2 可以明显
抑制人绒毛膜组织细胞的正常生长.2)培养液中的孕酮含量随 HR-2 的浓度增加呈梯度下降(P <0.01);而
HCG 仅在高浓度时有明显降低.3)HR-2 对离体的小鼠子宫有直接的兴奋作用(P<0.01), 这种兴奋作用不
被消炎痛 、阿托品和心得安阻断 , 但可被异丙嗪完全阻断.
关健词　扶桑花 , 提取物 ,绒毛膜组织 ,离体子宫 ,HCG ,孕酮
分类号　Q492.5
　　关于扶桑花醚不溶物的醚溶成分和水溶成分
的抗生育效应 ,印度学者曾作过初步的研究[ 1] ,我
们过去对此花乙醇提取物的一些工作也证实了其
花的抗生育与抗早孕作用[ 2 , 3] .由于这类粗提物成
分复杂[ 4] ,抗生育有效组分尚不能完全确定 ,所
以 ,对粗提物作进一步的分离提取 ,并对分离组分
进行生物学效应的研究 ,即是本文的目的.
1　材料和方法
1.1　材　料
1.1.1　材料　昆明种小白鼠(普通级),体重 27 ～
30 g ,购于昆明医学生物研究所.健康育龄妇女 6 ～
8周人流胎囊(昆医附二院提供).
1.1.2　药品　孕酮与 HCG 药盒 ,购于北方生物
技术研究所;盐酸异丙嗪 ,上海禾丰制药有限公司
生产;硫酸阿托品 ,广州侨光制药厂产品;消炎痛 ,
上海九福药业公司产品;心得安 ,江苏泗阳制药厂
产品;己烯雌酚 ,广州明兴制药厂产品.
扶桑花提取物 HR-2 ,采自云南省易门县的
干扶桑花 ,用乙醇浸泡回流提取后 ,浓缩.用石油醚
萃取浓缩液中的脂溶性成分后 ,再将剩余溶液冷
却 ,过滤所得沉淀物 ,定为 HR-2.经紫外吸收光
谱分析 ,该物在270 nm 处有较强吸收峰 ,其波形与
β-谷甾醇类似 , 360 nm 处有弱的吸收峰.
1.2　方法
1.2.1　HR-2 对体外培养的人绒毛组织的影响
　实验方法详见《扶桑花的石油醚提取物 HR-1
对体外培养的人早期胎盘绒毛组织分泌功能的影
响》一文 ,绒毛膜组织培养 24 h 后 ,随机将培养瓶
分为 5组 ,加入不同剂量的 HR-2 ,使其终浓度分
别为 0 μg/ml , 25 μg/ml , 50 μg/ml , 100 μg/ml 和
200μg/ml ,并于给药后的24 h镜检观察.给药 72 h
后终止实验.随后用放免法测每瓶培养液中 HCG
和孕酮的含量;用紫外仪测每瓶绒毛组织所含的蛋
白含量 ,然后换算出每 mg 蛋白分泌 HCG 与孕酮
的量.
1.2.2　HR-2 对离体子宫的影响　小鼠于实验
前 24 h腹腔注射己烯雌酚(1 mg/kg·BW.),按文
献[ 5]方法制备出离体子宫标本 ,置入含 50 ml改
良台氏液的浴槽中 ,持续通入体积分数为 95%O2
+5%CO2 ,恒温 37 ±1℃ , 稳定 30 min , 以 0.5
mm/s的速度记录子宫肌的收缩活动于二道生理
仪上.5 min 后给予 HR-2 ,使溶液终浓度为 100
μg/ml ,记录给药后 5 ～ 10 min子宫肌的收缩活动.
① 云南省应用基础研究基金资助项目.1998-03-02收稿
换去营养液 ,冲洗 3次 ,待曲线稳定后 ,分别加入受
体阻断剂阿托品 、心得安 、异丙嗪或消炎痛.每条子
宫仅给一种阻断剂 , 5min后 ,再次加入与前述相同
剂量的 HR-2 ,然后观察重新给予 HR-2后子宫
的收缩活动情况.实验结果以子宫活动力表示(子
宫活动力=平均强度×频率 单位:g ×次数/min);
实验数据用 t检验处理.
2　结　果
2.1　HR-2对人早期胎盘绒毛组织细胞生长的
影响　给药 24 h后 ,对照组细胞生长良好 ,呈多角
形 ,细胞间排列紧密 ,呈上皮样 ,并出现放射状的生
长晕.小剂量给药组(25 , 50 μg/ml)的细胞变小 ,
呈圆球形 ,胞质内有不同程度的黑色颗粒沉着 ,细
胞质透明度减小 ,生长晕消失.大剂量给药组(100 ,
200μg/ml)则细胞部分脱落 , 破损 , 胞间界限不
清 ,或出现不同程度的组织块脱落 ,悬浮于培养液
中.见图 1.
2.2　HR-2对绒毛组织分泌 HCG和孕酮的影响
实验表明 ,当培养液中的 HR-2 终浓度达到
100μg/ml和 200μg/ml时 ,HCG的含量较对照组
极明显减少(P <0.01),但两个浓度间未出现梯
度变化.低浓度的 HR-2对绒毛组织 HCG 分泌的
影响 ,并不十分明显 ,因而低浓度两组的 HCG 含
量与高浓度两组间的 HCG 含量 ,仍有极显著差异
(P<0.01).
各组别的孕酮含量随HR-2给药浓度的增加
而呈梯度下降 ,与对照组比较 , P <0 .05和P <
0.01(见表 1).显然绒毛膜组织的孕酮的分泌对
HR-2的反应明显较 HCG 敏感 ,这提示 ,绒毛组
织中孕酮的分泌可能会受到 HR-2的直接作用.
表 1　HR-2 对人绒毛膜组织 HCG和孕酮分泌的影响
Tab 1.Effect of HR-2 on HCG and progesterone secretions
of human trophoblast cells in vitro
组　别 数量(瓶)
蛋白中 HCG
含量/ 10-6
数量
(瓶)
蛋白中孕酮
含量/ 10-6
对照组 5 258.26±22.86 10 4.35±0.58
25μg/ml组 7 211.40±13.03 11 2.79±0.32＊
50μg/ml组 7 202.00±23.63 9 1.87±0.44＊＊
100μg/ml组 11 163.34±10.17＊＊ 10 1.42±0.25＊＊
200μg/ml组 7 150.02±8.83＊＊ 8 1.07±0.25＊＊
　　＊与对照组比较 P <0.05　＊＊P <0.01
2.3　HR-2对小鼠离体子宫活动力的影响
由表 2可见 ,100μg/ml的 HR-2对小鼠的离
体子宫有极明显的兴奋作用(P <0.01),这种兴
奋作用并不被阿托品 、心得安和消炎痛所阻断 ,但
可被异丙嗪完全阻断(P <0.01).提示 , HR-2 兴
奋子宫肌的作用 ,与子宫肌上的 H1受体有关.图
2 ,3 ,4 ,5 ,6.
A:对照组　　　　　　　　　　　　　　　　　B:给药组
图 1　HR-2 对体外培养的人绒毛膜组织的影响
Fig 1.Effect of HR-2 on morphology of human trophoblast cells
176 　　　　　云南大学学报(自然科学版)　　　　　　　　　　　　　　　　第 20 卷
A:HR-2(100μg/ml)
图 2　HR-2 对小鼠离体子宫的影响
F ig 2.Effect of HR-2 on uterine smooth muscles of mouse
in vitro
B:清洗　　C:阿托品　3μg/ml
图 3　给予阿托品后 HR-2 对离体子宫的影响
Fig 3.Effect of HR-2 on uterus after atropini
D:心得安　40μg/ml
图 4　给予心得安后 HR-2 对离体子宫的影响
Fig 4.Effect of HR-2 on uterus after propranololi
E:消炎痛　50μg/ml
图 5　给予消炎痛后 HR-2 对离体子宫的影响
F ig 5.Effect of HR-2 on uterus after indomethacin
表 2　HR-2 对小鼠离体子宫活动力的影响
Tab 2.Effect of HR-2 on uterus activity of mouse in vitro
组　别 数量(条)
给 HR-2 前
g×次/ 10 min
给　药　后
g×次/10 min
阻断剂后
g×次/ 10 min
对　照　组 36 10.4±2.1 52.6±12.2＊＊
阿托品组 8 16.8±4.9 63.3±12.2＊＊ 57.2±12.5＊＊
消炎痛组 9 12.4±4.8 51.9±12.6＊＊ 45.0±9.7＊＊
心得安组 7 16.5±4.5 69.1±17.9＊＊ 91.8±17.5＊＊
异丙嗪组 14 16.9±3.6 44.4±6.8＊＊ 0.49±0.22＊＊＊＊
　　A:与给药前比较　　B:与给药后比较　　＊＊P <0.01
F:异丙嗪　100μg/m l
图 6　给予异丙嗪后 HR-2 对离体子宫的影响
Fig 6.Effect of HR-2 on uterus after promethazine
3　讨　论
体外培养的人体绒毛膜组织的生长状况 ,可部
分反应出妊娠早期母体内的生理机能状况.由于妊
娠早期合体滋养层细胞分泌大量的 HCG , 使得维
持妊娠所需的孕酮随之大量分泌.显然在早期妊娠
中 ,HCG 分泌量的多少 ,即决定了孕酮分泌量的多
少.对 HR-2的研究表明 ,HR-2并不平行地减少
培养液中的 HCG 和孕酮水平 ,特别在低浓度时 ,在
HCG 水平并无明显减少的情况下 ,孕酮的分泌量
已显著下降 ,这似乎提示 ,HR-2除了干扰滋养层
细胞的 HCG 合成 ,继而造成孕酮分泌减少外 ,可能
直接干扰孕酮的合成与分泌.形态学的观察显示 ,
不同剂量的 HR-2都可造成培养的绒毛膜组织细
胞的正常生长受阻 ,细胞挛缩 、脱落或破损 ,这表明
HR-2 对妊娠早期的滋养层细胞可能有直接损伤
作用.很可能滋养层细胞不同程度的损伤 ,而致分
泌 HCG与孕酮的功能减弱 ,继而造成子宫的“不安
静” ,而致流产 , 是 HR-2干扰早期妊娠的主因.
从 HR-2影响小鼠离体子宫活动力的实验可
看出 ,它对动情期的小鼠子宫有直接的兴奋作用.
这可能也是导致妊娠子宫“不安静”的又一因素.由
于这种兴奋作用可被异丙嗪几乎完全不可逆地阻
177第 3 期　　　　江　燕等:扶桑花醚不溶物 HR-2 对体外培养的人绒毛膜组织及小鼠离体子宫活动力的影响　　　　
断 ,而不受阿托品 、心得安和消炎痛的影响 , 这表
明 ,HR-2 兴奋子宫的作用 ,与子宫肌的 M -受
体 ,β -受体和前列腺素合成酶无关 ,而是通过 H1
受体所中介的.有资料表明[ 4] ,扶桑花中所含的糖
甙类物质(槲皮素 ,山萘酚等)对平滑肌的气管 、小
肠与子宫均有兴奋作用;而且与本结果不同的是 ,
这种作用在家兔上可被阿托品阻断 ,我们对 HR-2
的紫外吸收光谱分析证明 ,它在 360 nm(类似槲皮
素)处确实有一弱的吸收峰 ,但这种直接兴奋子宫
的作用是由糖甙类物质所产生 ?或由 β-谷甾醇类
似物(270 nm)产生 ? 或是两种组分的共同作用 ,
目前还不能完全确定 , 而且阿托品的作用在本实
验结果与他人结果中的差异 , 也有待证明.但不难
看出 , HR-2 对早孕的影响可能是多环节的 ,它既
可通过干扰体内的胎盘内分泌系统 ,同时又可通过
子宫肌的 H1受体 ,直接造成子宫活动增加 ,使得早
孕子宫产生一种不利胚胎发育的内环境 ,从而导致
胎儿流产.进一步的研究尚在进行中.
参　考　文　献
1　Singh M P , Singh R H , Dupa K N.Antifertility activity of a
benzene ex tract of Hibiscus rosa-sinensis flowers on female
albino rats.Journal o f Medicinal Plant Research , 1982 , 44:
171～ 174
2　赵翠兰 ,江燕 , 李开源.朱槿花乙醇提取物对体外培养的
人早期胎盘绒毛组织分泌功能的影响.云南中医杂志 ,
1994 , 15(1):50 ～ 51
3　赵翠兰 ,江燕 , 李开源.朱槿花乙醇提取物对小白鼠的抗
生育作用.云南中医中药杂志 , 1995 , 16(6):57 ～ 58
4　江苏新医学院.中药大词典.上海:上海科技出版社 ,
1987.2262
5　徐叔云 ,卞如濂 , 陈　修.药理学实验方法.北京:人民卫
生出版社 , 1982.1147
Effect of Petroleum Ether Insoluble Fraction of Hibiscus rosa-sinensis
flow ers(HR-2)on Human Trophoblast cells and Uterus Activity of M ice in vitro
Jiang Yan　Lǜ Qi　Zhao Cuilan　Li Kaiyuan　Cui Yueli
(Biology Department of Yunnan University , 650091 , Kunming , PRC)
Abstract　Present communication deals with the effect of pet roleum ether insoluble fraction of Hibiscus
rosa-sinensis.flow ers(HR-2)on human trophoblast cells morphology , HCG and progesterone secretion , and
investigates the action of HR-2 on uterine smooth muscles of mice , as well as the ef fect of different blocking
drugs on HR-2.The results indicate that:(1)HR-2 has a significant inhibi tion on the morphology of hu-
man trophoblast cells ,(2)the concentration of progesterone in cultural medium decrease w ith the increase of
HR-2 doses(P <0.01),but HCG reduces only w hen the dose of HR-2 is 100μg/ml and 200μg/ml.(3)
HR-2 has a direct stimulation on uterus of mice in vi tro(P <0.01), and this st imulation is related to H1 re-
ceptor of uterine smooth muscles.
Key words　Hibiscus rosa-sinensis , trophoblast cells , uterus , HCG , progesterone
178 　　　　　云南大学学报(自然科学版)　　　　　　　　　　　　　　　　第 20 卷