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收稿日期:2008-10-21
作者简介:于加平(1973-),男 , 汉族 ,吉林省吉林市人 , 讲师 ,从事分析化学和天然产物的提取方面教学与研究工作。
HPLC法测定金银木花和叶中绿原酸的含量
于加平 ,李海燕 ,孙　博
(吉林农业科技学院生物工程学院 ,吉林 132101)
摘　要:采用 70%的甲醇溶液为提取剂 ,索氏提取法对金银木花和叶中绿原酸进行提取 ,HPLC 法对金银木花和叶中
绿原酸进行检测。色谱柱为SHIMADZU C18柱 , 流动相为乙腈-0.5%磷酸溶液(体积比1:9), 波长为327nm , 流速为1.0mL·
min-1。绿原酸在 0.232～ 3.48μg 呈良好线性关系 , 相关系数 r为 0.999 6。结果表明:金银木花和叶中都含有绿原酸且含
量较高。
关键词:金银木;HPLC;绿原酸
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A
Determination of Chlorogenic Acid in Lonicer maakii Maxim S Flowers and Leaves by HPLC
YU Jiaping , LIHaiyan , SUN Bo
(Jilin Agricultural Science and Technology College　Department of Bioengineering , J ilin 132101 , China)
Abstract:With 70%methanol as solvent , the chlorogenic acid in Lonicer maakii Maxim s flowers and leaves
was extracted with Soxhlet extraction and the determination was done with HPLC.The chlorogenic acid was seperated
on SHIMADZU C18 column , the mobile phase was acetonit rile-0.5%phosphoric acid(1:9), and the detection
wave length was 327nm , the volume flow was 1.0mL·mi-1.The calibration curve was linear in the range of 0.232 ～
3.48μg (r=0.999 6).The result showed that there were higher content of chlorogenic acid in flowers and leaves of
Lonicer maakii Maxim.
Key words:Lonicer maakii Maxim;HPLC;chlorogenic acid
　　金银木(Lonicer maakii Maxim.),别名金银忍
冬 、木忍冬 、鸡骨头 ,是忍冬科忍冬属的落叶灌木 ,
分布于全国各地 ,生于林缘 、沟谷地带 、山坡阴湿
处或杂木林中[ 1] 。金银木全株可入药 ,具有祛风
解毒 、消肿止痛的作用[ 2] 。绿原酸具有很高的生
物活性和生理活性 ,一直被认为是忍冬中的主要
有效成分 ,有植物“黄金”之美誉。现代药理研究
表明 ,其具有抗菌抗病毒作用外 , 还有抗艾滋病
毒 、抗过敏 、抗肿瘤等功能 ,具有保肝利胆 、止血 、
抗氧化 、抗生育等作用[ 3] ,由于其所具有的药理和
药效作用而日益引起人们的重视 。为此 ,笔者对
金银木叶和花中绿原酸进行提取及含量分析 ,旨
在为金银木的开发和综合利用奠定理论基础 。
1　仪器 、试剂及实验材料
1.1　仪器
岛津 LC-20A型高效液相色谱仪(真空脱气
机 ,进样器 ,柱温箱 ,紫外检测器), LC 工作站 ,岛
津色谱柱(4.6×150μm ,5μm ,C18);索氏提取器(上
海洪纪仪器设备有限公司), ESJ205-4型电子天
平(沈阳龙腾电子有限公司)。
1.2　试剂
乙腈(天津市福晨化学试剂厂生产)、色谱纯 、
超纯水 、磷酸(沈阳市新化试剂厂提供)、分析纯 、
绿原酸对照品(购自中国制药生物制品检定所 ,批
号 110753-200212)。
1.3　实验材料
金银木花和叶:采于吉林农业科技学院校园
内 ,经专家鉴定为金银木的花和叶 ,经阴干 、低温
烘干处理为干品。
2　实验方法与结果
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第 18卷 第 1期
2009年 3月 　　
吉林农业科技学院学报
Journal of Jilin Agricultural Science and Technology College
　　Vol.18 ,No.1
March ,2009
2.1　金银木花和叶中绿原酸的提取
称取干燥金银木的花和叶粉末各 10g ,将称好
的样品用滤纸包好 ,分别置于两套索氏提取器中 ,
然后各加 70%的甲醇溶液 80mL ,浸泡 2h 后 ,水浴
锅70℃加热回流至无色 ,把回流液倒于蒸馏瓶中
进行减压蒸馏至 30mL ,超声溶解 ,过滤 ,装于棕色
具塞管中 ,得待测液 ,放于冰箱中待用。
2.2　绿原酸的检测
2.2.1　色谱条件　4.6×150mm的 SHIMADZU色
谱柱 ,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ,填料粒
度为 5μm;乙腈-0.5%磷酸溶液(1∶9)为流动相;
检测波长为 327nm;流速为 1.0mL·min-1;柱温为
25℃。
2.2.2　绿原酸对照品溶液的制备　精密称取绿
原酸对照品5.800mg ,置 25mL容量瓶中 ,加甲醇超
声溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,用 0.2μm 滤膜过滤 ,
即得浓度为 0.232mg·mL-1的绿原酸的对照品溶
液。
2.2.3　金银木花和叶中绿原酸的检测　取 2.2.2
的对照品溶液 3μL 和2.1提取液 5μL(经 0.2μm滤
膜过滤),按上述色谱条件分别进样分析。平行进
样5次 ,得色谱图 ,见图 1 ,由色谱图可知 ,五次得
到的金银木花和叶提取液的绿原酸的保留时间与
标准品绿原酸的保留时间基本一致 ,证实金银木
的花和叶中都含有绿原酸 。
2.3　金银木花和叶中绿原酸的含量测定
2.3.1　标准曲线的制备　精密吸取对照品溶液
(0.232mg·mL-1)1.0 、3.0 、5.0 、7.0 、10.0 、15.0μL
进样 ,记录色谱图 ,以绿原酸对照品的积分峰面积
值为横坐标 ,进样量为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,得
回归方程 Y=5.646 2×10-7X-0.095 75 ,相关系
数 r=0.999 6(n=5)。绿原酸在 0.232 ～ 3.48μg范
围内呈现良好线性关系。
2.3.2　稳定性试验　取对照品溶液分别于配制
后0 、1 、2 、4 、8 、12h ,取滤液 5μL 注入色谱仪 ,记录
色谱图 ,考察溶液放置后峰面积的变化情况 , RSD
为 0.18%,表明供试品溶液在 12h内稳定 。
2.3.3　精密度试验　取对照品溶液 5μL ,连续重
复进样 5 次 ,记录色谱图 ,考察峰面积的变化情
况 , RSD为 0.024 7%,表明该含量测定方法精密度
良好 。结果见表 1。
表 1　精密度试验　　(n=5)
编号 1 2 3 4 5 RSD
测得峰面积(Area) 2175976 2176066 2177068 2176004 2175643 0.024 7%
2.3.4　回收率试验　精密称取金银木花和叶各 5
份 ,每份约 5.00g ,分别加绿原酸标品溶液0.20mL ,
按2.1方法进行制备待测样品溶液 ,进样 10μL ,按
2.2.1色谱条件进行分析测定 ,根据回归方程计算
每份绿原酸含量 。计算得金银木花的平均回收率
为99.98%, RSD为 1.72%;金银木叶的平均回收
率为 99.21%,RSD为 1.98%。
2.4　样品含量的测定
分别取 2.1 制备的金银木的花和叶提取液
10μL(经 0.2μm滤膜过滤),平行进样 5次 ,得色谱
图 ,按外标法进行计算样品中绿原酸的含量 ,结果
见表 2。 (下转第 24页)
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March ,2009
活力大于 0.7。采精后进行精液品质检查 ,若活力
低于 0.7 ,畸形率高于 10%, 狐的受胎率明显下
降[ 1] 。
7　大胆利用外源激素
经过三次试验研究证明 ,PGF2a 、PMSG和 hCG
三种生殖激素联用 ,即母狐肌肉注射 PGF2a 0.3mg
·kg-1 , 24h后 ,再肌肉注射 PMSG 30IU·kg-1 ,待母
狐允许爬跨后 ,肌肉注射 hCG l0IU·kg-1 ,能够促使
银狐早发情 ,显著提高银狐发情率 ,缩短妊娠时
间 ,提高窝产仔数 ,从而显著提高银狐繁殖力[ 5、6] 。
这些试验结论我们都可以参考 。
8　配种操作方法
交配活动应选择在双方性欲最旺盛的早晨或
傍晚进行。把雌狐狸放入雄狐狸笼内 ,严防外界
干扰 ,配种员立即离开并在暗处监视 ,一般 30 ～
45min即可达成交配 ,当发现 1 小时仍未达成交
配 ,要立即更换雄狐狸 。为确保受胎 ,提高准胎
率 ,不管是本交还是人工授精 ,都要在第二天早晨
再配 1次 ,如果条件允许 ,在第三天可以选择其他
的种公狐狸再配一次 ,可以最大限度地提高配种
率。
9　配种注意事项
合理的公母比例 ,确保较好的种公狐狸使用
率。如果采用本交时公母比例为 1:3 ～ 4比较理
想 ,一只种公狐狸每天可配 2只母狐狸 ,时间要间
隔4h左右;采用人工授精技术 ,公母比例可达 1:
40 ～ 50 。年龄配对的原则:初产母狐狸要选成年
公狐狸配对 ,经产母狐狸要选青年公狐狸配对
10　加强配种期饲养管理
此期要供给种狐狸营养丰富 、适口性好 、易消
化的饲料 ,除了使用优质的狐狸专用预混料外 ,还
可以在每公斤饲料中添加维生素 E 25 ～ 30mg 、葱
或蒜 3 ～ 5g 。由于狐狸生性机警 、狡猾多疑 ,极易
受惊 ,所以在配种期要保持安静 ,固定饲养人员 ,
谢绝外人参观和闲人逗留 ,禁止燃放鞭炮和一切
车辆进入狐狸场 。饲养管理人员要仔细看护 ,严
禁跑狐狸 。
参考文献:
[ 1] 　马丽娟.特种动物生产[ M] .北京:中国农业出版社 , 2006:48
～ 54.
[ 2] 　马丽娟.经济动物生产学[M] .长春:吉林科技出版社 , 1999:
75～ 83.
[ 3] 　李家瑞.特种经济动物养殖[ M] .北京:中国农业出版社 ,
2002:91～ 106.
[ 4] 　刘志平.影响人工授精母狐受孕率的因素[ J] .经济动物学
报 ,2000(1):1～ 4.
[ 5] 　李晓艳.PGF-(2α)、PMSG、hCG 联合应用提高母狐繁殖力的
研究[ D] .吉林大学 , 2006.
[ 6] 　葛东宁 ,张智婷 ,毕学云 , 等.外源激素对银狐繁殖力的影响
[ J] .林业科技 , 2004(5):37～ 39.
(上接第 2页)
表 2　样品含量测定　(n=5)
编号 1 2 3 4 5 平均含量 RSD%
花中绿原酸的含量(%) 4.87 4.85 4.80 4.81 4.89 4.84 0.79
叶中绿原酸的含量(%) 3.75 3.79 3.72 3.77 3.74 3.75 0.72
3　讨论
3.1　本论文采用索氏提取法对金银木的花和叶中
绿原酸进行提取 ,经高效液相色谱法进行检测 ,分
析研究证实金银木的花和叶中都含有绿原酸 ,经外
标法计算花中含量为 4.84%,叶中含量为 3.75%。
由此可推断金银木的花和叶是一种可开发的新的
药用植物资源。
3.2　目前金银木多数为城市的绿化树种 ,其花和
叶目前都被废弃 ,我国金银木资源十分丰富 。通
过本论文为金银木的花和叶的药用开发提供理论
依据 ,使之得到合理应用。
3.3　绿原酸是一种对热敏感的化合物 ,在提取的
过程中应注意温度的控制 ,提取温度最好不要高
于 75℃,否则对提取结果会有很大的影响 。
参考文献:
[ 1] 　中国科学院植物研究所南京中山植物园.栽培植物名录[M] .
上海:科学技术出版社 , 1959:87.
[ 2] 　李宝华 , 宫文辉.青岛崂山海岸带野生木本药用植物资源
[ J] .黄渤海海洋学 , 2000(1):55～ 65.
[ 3] 　刘海军 ,裘爱泳 ,任惠兰.绿原酸提取与纯化分离方法研究进
展[ J] .粮食与油脂 , 2007(7):42～ 45.
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