全 文 ：
鸡肝 散 , 又 名 四 方 篙 ( lE s肠 zitz 。 占lan da
eB in h
.
)
, 为唇形科香需属多年生草本植物 。 性味苦
辛 、凉 ,具有清热解毒 、消炎止痛的功效 , 民间常用于
治疗感冒 、痢疾 、肝炎等病症 [’ ! 。 其花序 、叶和茎富
含挥发油和黄酮 [2一 , , 药理研究表明 ,该挥发油具有
广谱抗菌和杀菌作用 ,并能直接抑制流感病毒 , 同时
还具有明显的镇痛 、抗炎协同作用 ’ 。 本课题组在
文献报道〔’ 礴 和 Gc 一M s 技术分析鸡肝散挥发油成分
基础上 , 用对照品对照 , 确定其中含有 a 一旅烯刀一旅
烯 、 1 , 8 一按叶醚 、樟脑 、芳樟醇 、 乙酸龙脑醋和龙脑 ,
并利用顶空气相色谱法对这 7 种活性成分进行含
量测定 ,初步比较了不同提取方法对各成分组成的
影响 , 为该民族药材的质量控制和进一步开发利用
提供科学依据。
1 仪器与试药
1
.
1 仪器
水蒸气蒸馏器 、 HA220 一 50 一 06 型超临界二氧
化碳萃取仪 (江苏南通市华安超临界萃取有限公
司 ) 、 H P 一 7 694 E 顶空进样仪 、 H P 一 6 890 气相色谱
仪及工作站 ( A g i l e n t 公司 ) 。
1
.
2 试剂
对照品 : 樟脑 (批号 : 74 7 一2 00 106 ) 、芳樟醇 (批
号 : 1503 一 2000 1 ) 、 乙 酸龙脑醋 ( 批 号 : 1 107 59 -
20 30 3) 均购于中国药品生物制品检定所 , 供含量
测定用 ; a 一旅烯 (批 号 : 050 309 ) 、 刀一旅烯 (批 号 :
0503 1 1 )
、龙脑 (批号 : 0 5030 1 ) 、 l , 8 一按叶醚 (批号 :
05 05 06 )均购于上海友思生物技术有限公司 , 经面
积归一法计算含量分别为 98 . 1% , 97 . 7% , 98 . 3% ,
99
.
2%
。 乙酸乙醋为分析纯 。
1
.
3 药材
鸡肝散药材由昆明金殿制药有限公司提供 , 以
总花序部位为主 ,带有少量的茎叶 , 经干燥后打粉 ,
过 4 0 目筛后 , 备用 。 原植物标本由云南昆明大学李
恒教授鉴定 。
2 挥发油提取及样品液制备
2
.
1 水蒸汽蒸馏法
取鸡肝散药材 10 9 , 依水蒸汽蒸馏法 ( 中国药
典 2 005 年版 )提取 Z h ,冷却分层后收集挥发油 , 得
到橙黄色油状液 , 精密称重 。 取挥发油约 20 m g
(精密称定 )至 5 0 m L 量瓶中 , 用乙酸乙醋稀释至刻
度 ,备用 。
2
.
2 超临界二 氧化碳萃取法
取鸡肝散药材粉末 10 9 ,置萃取釜中萃取 , 得
到黄绿色油状物 ,精密称重 。 萃取条件为 :萃取温度
中国药学杂志 2 0 8 年 3 月第 43 卷第 6 期
4 0 ℃ , 压力 2 5 M P a , 分离釜 I 温度 4 5 ℃ , 压力 8
M Pa
, 分离釜 fl 温度 30 ℃ ,压力 4 M P a ,萃取 Z h 。 取
萃取物约 2 0 0 m g (精密称定 )至 50 m L 量瓶中 ,用
乙酸乙醋稀释至刻度 , 备用 。
2
.
3 溶剂提取法
2
.
3
.
1 正己烷索氏提取法 取药材粉末 10 9 ,加正
己烷 10 0 m L ,于索氏提取器中水浴回流 Z h ,滤液用
旋蒸法浓缩并转移至 50 m L 量瓶中 ,正己烷定容 , 备
用 。、
2
.
3
.
2 正己烷回流提取法 取药材粉末 or g ,加正
己烷 10 0 m L , 于 25 0 m L 圆底烧瓶中水浴回流 Z h ,
滤液用旋蒸法浓缩并转移至 50 m L 量瓶中 , 正己烷
定容 ,备用 。
2
.
3
.
3 乙酸乙醋索氏提取法 取药材粉末 or g ,加
乙酸乙醋 10 m L ,于索氏提取器中水浴回流 Z h , 滤
液用旋蒸法浓缩并转移至 50 m L 量瓶中 , 乙酸乙醋
定容 ,备用 。
2
.
3
.
4 乙酸乙醋回流提取法 取药材粉末 10 9 ,加
乙酸乙醋 100 m L ,于 25 0 m L 圆底烧瓶中水浴回流 2
h
,液滤用旋蒸法浓缩并转移至 50 n lL 量瓶中 , 乙酸
乙酉旨定容 , 备用 。
3 方法与结果
3
.
1 色谱条件
I N N OW AX 型毛细管柱 ( 0 . 53 m m x 30 m , 5
林m ) ;程序升温过程 : 初始温度 60 ℃ , 以 30 ℃ ·
im
n 一 `的速率升至 90 ℃ ,再以 5 ℃ · inI n 一 ’的速率升
至 180 ℃ 。 进样口温度 20 ℃ ,检测器 ( IF D )温度
2 4 0 ℃ ,分流比 5 : l ;氮气流速 2 0 m L · m i n 一 ’ ;氢气
流速 4 5 m L · m sn 一 ’ ,空气流速 4 50 m L · m i 。 一 ’ 。 顶
空条件 :顶空平衡温度 90 ℃ ,平衡时间 30 m in ,气体
1
.
0 m L 自动进样 。
3
.
2 系统适用性
在 “ 3 . 1 ” 色谱条件下 , 对照品和样品的色谱图
见图 1 。 图中 a 一旅烯刀一旅烯 、 1 , 8 一按叶醚 、樟脑 、芳
樟醇 、 乙酸龙脑醋和龙脑的保留时间分别为 3 . 24 ,
3
.
7 5
,
4
.
5 7
,
9
.
34
,
9
.
6 6
,
10
.
4 5
,
13
.
0 8 m i n ;理论塔板
数分 别为 2 0 9 5 3 7 , 19 1 1 8 1 , 18 4 9 2 6 , 2 52 5 1 1 ,
303 4 03
,
2 7 2 5 5 2
,
4 06 0 13 ; 分离度 分别为 1 . 9 5 ,
7
.
9 7
,
2
.
8 0
,
8 1
.
5 7
,
4
.
3 3
,
10
.
5 1
,
2
.
0 6
。
3
.
3 供试品溶液的制备
取 “ 2 . 1” 至 “ 2 . 3 ” 项下制备的挥发油样品液各
2
.
0 m L
, 分别置于 10 m L 量瓶中 ,加乙酸乙醋稀释至
刻度 , 摇匀 ,作为进样试液 ,备用 。
3
.
4 对照品溶液的制备
石而下石而不了而丽丽丽币丽丽不兀 . 45 9 .
八
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3
.
6 仪器精密度实验
精密量取标准对照品溶液 ( 5 号对照品溶液 ) 5
份 , 每份 3 . 0 m L 置顶空瓶中 , 连续进样 5 次 , 测定 7
种挥发油成分的峰面积 , 并计算其 RS D 值 , 分别为
1
.
9%
,
1
.
8%
,
1
.
5 %
,
1
.
2%
,
1
.
1%
,
0
.
9%
,
1
.
2 %
(
n 二 5 )
。
3
.
7 稳定性实验
精密量取同一份供试品溶液 (批号 20 309 )3 . 0
m L 置顶空瓶中 ,于 O , 2 , 4 , 8 , 12 h 分别进样 ,测定 7
种成分的峰面积 , 并计算其 RSD 值 , 分别为 2 . 1% ,
2
.
8%
,
2
.
6%
,
1
.
6%
,
2
.
1%
,
2
.
5%
,
2
.
3% ( n = 5 )
, 表
明样品在 12 1: 内稳定 二
3
.
8 重复性实验
取同一样品 5 份 (批号 200309 ) , 按供试品溶液
的制备方法平行制备 , 各取 3 . 0 m L 溶液置顶空瓶
中 ,进样测定 ,计算 7 种成分的含量和其 R SD 值 , 分
别为 2 . 9% , 2 . 9% , 1 . 2% , 2 . 8% , 2 . 9 % , 2 . 2% ,
2
.
8% (
。 二 5 )
,表明本法重复性较好 。
3
.
9 回收率实验
精密 量取 已 知 含 量 的 挥 发 油样 品 ( 批 号
20 03 09 ) 9 份 ,每 3 份一组 , 按高 、 中 、 低 3 个水平分
别精密加人一定量对照品混合液 , 按供试品溶液的
制备方法操作 ,进样测定 , 并计算 7 种成分的回收率
和其 RS D 值 。 结果其平均回收率分别为 % . 6% ,
9 7
.
0%
,
97
.
8%
,
9 9
.
9%
,
96
.
5%
,
9 7
.
4 %
,
9 7
.
1%
,相
应的 RSD 值分别为 1 . 3% , 1 . 4% , 0 . 8% , 0 . 5% ,
1
.
3%
,
1
.
4 %
,
1
.
2%
。
3
.
10 样品含量的测定
取不同采集时间的鸡肝散药材各 2 份 ,用水蒸
气蒸馏法提取挥发油 ;取同一批鸡肝散药材各 2 份 ,
分别用不同提取方法提取挥发油 。。 分别取各挥发
油 , 按供试品溶液的制备方法制备供试液 , 各取 3 . 0
m L 置顶空瓶中 ,进样测定 ,并计算其含量 ,结果见表
2 和表 3 :
表 2 不同采集时间鸡肝散药材中 7 种挥发油成分的含量 .
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·
g
一
l
,
I ; 二 2
T a b
.
2 C o n 沈 n t s ( 、「s e v e n o o m p o n e n t s `一f v ( 、 la t i le 0 11 in E ls ho l卜
: : a 占la 椒玩 B 。 一l t h . e ( ) Ile 。· r e d a t d i fe r e n r . m g · g 一 ’ , n = 2
P ,。 k 一i , a
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图 1 空白溶剂 ( A ) 、 对照 品溶液 ( B )和样品溶液 ( C ) 的色
谱图
l 一 a 一旅烯 ; 2 一月一旅烯 ; 3 一 l , 8一按叶醚 ; 4 一 樟脑 ; 5 一 芳樟醇 ; 6 一 乙酸龙脑醋 ;
7 一 龙脑
F i.g 1 Ch or m a t`) g ar m s (飞f L) la n k s o l v o n t ( A )
, r o fe ,℃ n o e s o l u t i ( ) n
( B )
a n `1 、 a m P le * o l u t i o n ( C )
l 一 a 一 I )i n e n。 ; 2 一 月 ! ) i n o n。 ; 3 一 1 . 8 、` , n f 、。, I ; 4 一 。 a rn ph o r : 5 一 l i n a ]。 l ; 6 一 阮 n l、 l
a r e t a l户 : 7 一 bo 卫
一
n P川
精密称取 a 一旅烯刀一旅烯 、 l , 8 一按叶醚 、樟脑 、芳
樟醇 、 乙酸龙脑酷和龙脑适量 ,分别置于 10 m L 量瓶
中 ,用乙酸乙醋溶解并稀释至刻度 ,制成每 1 m L 含
a
一旅烯 3 . 3 m g刀一旅烯 3 . 2 m g 、 l , 8 一按叶醚 1 1. 1 m g 、
樟脑 23 . 8 m g 、芳樟醇 14 . 0 m g 、 乙酸龙脑醋 6 . s n飞g
和龙脑 5 . 3 m g 的对照品溶液 , 精密量取上述对照品
溶液各 5 m L 于同一 50 m L量瓶中 ,加乙酸乙酷至刻
度作为混合对照品溶液 , 备用 。
3
.
5 线性关系考察
精密量取混合对照品溶液 1 . 0 , 2 . 0 , 5 . 0 , 8 . 0 ,
10
.
0 , ln 置 10 m L量瓶中 ,加乙酸乙酷稀释至刻度 ,
作为系列标准对照品溶液 , 取各浓度的溶液 3 . 0 m L
置顶空瓶中 ,气体 1 . 0 m L 自动进样 ,测定峰面积 , 以
浓度 (X )为横坐标 ,峰面积 ( )Y 为纵坐标 ,绘制标准
曲线 ,结果见表 l
表 1 7 种挥发性成分的线性方程和浓度范围
T a b
.
1 Li n e a r 。
、 。飞一:一 i(川 a n f l 。 ( ) n e e n t r a t io n r a n罗 o f s e v e n (· o m -
P o n e n t S
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3 3
一 33 ( )
3 2
一 32 ()
1 11 一 1 1 10
238
一 2 3 80
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65
一 65 0
5 3 一 53 ( )
0 99 9
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.
(川4
4 讨 论
4
.
1 色谱方法及条件的选择
屺: l , ; , , 尸 /, a r, , , J , 2 0 0 8 材 a ,、 `h , 十、 , 1. 4 3 八` , . 6 ` } ,囚药学杂志 2( x )8 勺一 3 月第 43 卷第 6 期
表 3
Ta b
.
3
不同提取方法鸡肝散药材 (2010 0 9) 中 7 种挥发油成分的含量 .m 。 · g一 ’ , 。 = 2
C o n t e n t、 0 1
、
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、
o m p 。。 xl e n t s 0 1
、
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注 : 表中“ 一 ” 示 ` 未检测到”
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根据文献 l ’ 毛 {报道和本校药物分析研究室多年
的实验经验 , 顶空进样法有使待测成分的相对浓度
增加而非挥发性杂质减少 , 并在较低温下汽化可避
免组分分解等优点 ,故本实验采用该法进样 ;色谱分
离采用单个对照品定位和混合对照探索分离条件相
结合 , 经比较匀速升温和程序升温等不同操作 ,最后
选定以 30 ℃ · m i n 一 ’ 升至 90 ℃ ,再以 5 ℃ · 而 n 一 ’
升至 180 ℃的分离效率好 , 分析时间短 (巧 m in 以
内 ) ;由于自动进样法的相对操作误差较少 , 故本实
验采用外标法检测 , 方法学实验所得的结果也验证
了此法的可行性 。
4
.
2 样品含量分析
从表 2 可知 , 1 月份采集的药材中 7 种挥发油
成分的含量明显较 9 月份高 , 而且药材储存时间越
长 ,其含量也越低 ,这说明药材成熟度和储藏时间对
其质量均有影响 , 其中以药材的成熟度为主要影响
因素 。
从表 3 可知 , 不同提取方法对药材中 7 种挥发
油成分的含量也有明显影响 , 以超临界二氧化碳萃
取法最高 , 水蒸气蒸馏法次之 ,溶剂提取法最低 。 这
结果说明超临界萃取由于温度低 , 保留挥发性成分
效果较好 , 水蒸气蒸馏法由于温度高 ,损失略大 , 而
溶剂法提取由于操作过程复杂 , 其中使用减压旋蒸
浓缩等手段 , 结果损失更大刀一旅烯和乙酸龙脑醋这
2 种成分甚至未检测到 。
所以 ,鸡肝散挥发油成分的提取 , 以前两种方法
为好 , 但考虑到这两种方法也各有同时提取未挥发
性成分或温度高等缺点 , 进一步应用研究时应因地
制宜地选择合适方法和条件 。
4
.
3 结论
顶空气相色谱法具有快速 、准确 、专属性强的特
点 , 适合对药材中挥发油成分的检测和质量控制 。
致谢 :浙江大学药学院王龙虎老师和柯博克硕士提供超临界
流体萃取的技术支持和帮助 ,王瀚华硕士提供顶空气相色谱
分析的技术支持和帮助 。
R E F E R E N C E S
〔l ] J ia n g s u N e w M e d ie a l Co lle g e . hT e D 、 21` ,。 , )r of hC in o e 7l(Y d i t i o n -
a l 腕d io in 打、 (中药大辞典 ) 〔M」. s ha n gh a i : Sh a n g ha i S e i e n e e
a n d T e e h n o lo gy P
u b li s h . n g Ho u s e
,
19 7 7 : 12 0 8
一
120 9
.
「2 〕 R E N P , s ll E N e x w , z HE NG 5 2 . s t u d ie s o r , th e e h e m , c a l
e o 一n po r l e n t a n d a P P }ie a n t o f e s s e n ti a l 0 115 o f E八h o l面 “ bla n da
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尺创 (色谱 ) , 19 9 3 , 11 ( 2 ) : 6 9 一7 1
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、 , d u a l (, sar
rl l e s o lv e n之5 i f l rz l c e ,即 Jl n e b y h e ad sp a e e e a p i1Ja叮 笋
e h or o l a t o g ar ph y 〔 J ] . C h: n J hP a mr An a l ( 药物分析 杂志 ) ,
2 00 4
,
2 4 ( 3 )
: 2 7 3
一
2 7 5
.
(收稿日期 : 2X() 7刃4 一 16 )
20 0 8 年药物新制剂技术学习班开班通知
为适应现代药剂学的发展 , 向广大药学专业人员提供药剂学领域新剂型 、新技术等 , 中国药学会药剂学 专业委员会将于
20 8 年 6 月 2 一 8 日在上海举办 2008 年 “ 药物新制剂技术 ” 学习班 。
此学习班由第二军医大学药学院承办。
培训对象 :高等院校教学科研人员 、新药研究开发人员 、医院药学技术人员 。
学分 : 国家继续教育 n类学分 12 分 (或军队继续教育 I类学分 20 分 ) 、 ) 培训分理论授课和实验教学。
详情请登陆 : 。 w . cP a . o gr . c n 查询
〔本刊讯」
甲蔺百事薪蔽丽云飞百刃藉豹舜爵爵丽 瓦扁下 i石石而顶丽云丽于王不不丽百了丙万万 ’ 46 1 ’