全 文 ：收稿日期:2007-07-10;　修订日期:2007-10-15
基金项目:广东药学院博士启动基金资助项目(No.2006ZYX07)
作者简介:孟　江(1976-),女(汉族),河南三门峡人 ,现任广东药学院中
药学院讲师 ,博士学位 ,主要从事中药及饮片质量标准化研究工作.
不同产地鱼腥草多糖含量测定
孟　江 , 周毅生 ,廖华卫
(广东药学院中药学院 ,广东 广州　510000)
摘要:目的 测定不同产地鱼腥草多糖的含量。方法 用苯酚 -硫酸法测定鱼腥草中多糖的含量。结果 不同产地的鱼
腥草中多糖含量为:15.73% ～ 20.29%。结论 不同产地鱼腥草多糖的含量有一定的差异。
关键词:鱼腥草;　多糖;　含量测定;　不同产地
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)04-0822-01
DeterminationofPolysaccharideinHoutuyniacordatafrom VariousCultivationLoca-
tions
MENGJiang, ZHOUYi-sheng,LIAOHua-wei
(GuangdongPharmaceuticalUniversity, Guangdong, Guangzhou, 510000, China)
Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentofpolysaccharidesinHouttuyniacordatafromvariouscultivationlocations.
MethodsThecontentsofpolysaccharideweremeasuredbyphenol-H2SO4 colorimetry.ResultsThecontentsofpolysaccharidesinHouttuyniacordatafromvariouscultivationlocationsvariedfrom15.73% ～ 20.29%.ConclusionThereisgreatdifferencein
polysaccharidecontentinHouttuyniacordatafromvariouscultivationlocations.
Keywords:Houtuyniacordata;　Polysaccharide;　Determination;　VariousCultivationLocations
　　鲜鱼腥草为三白草科 Saururaceae蕺菜属植物蕺菜 Houtuyn-
iacordataThunb.的新鲜全草 [ 1] , 具有清热解毒 、消肿排脓 、利尿
通淋的功效。主要用于肺脓疡 、痰热咳嗽 、热痢热淋 、痈疮肿
毒 [ 2]等证。本课题组曾对鲜鱼腥草 GC-MS、HPLC-MS指纹图
谱 、黄酮类 、酚类化合物的化学研究方面进行报道 [ 3 ～ 6] 。 药理研
究发现鱼腥草水溶性多糖对羟自由基和超氧自由基有较明显的
清除作用 [ 7] 。本课题对不同产地鱼腥草进行多糖含量测定 , 为
鱼腥草资源的开发提供理论依据。
1　器材
1.1　仪器 UV-7501型紫外可见光光度计(无锡科达仪器厂),
电热恒温水浴锅(上海仪表集团供销公司),医用离心机(LD5 -
10型 , 北京医用离心机厂), 电子天平(BS210S, madebystartori-
us)
1.2　试药 葡萄糖标准品 Sigma公司产品;苯酚 、硫酸 、丙酮 、乙
醚 、三氯乙酸 、氢氧化钠试剂均为分析纯 ,医用乙醇(广州市新升
华玻有限公司),苯酚试液参照文献 [ 8]配制。
鱼腥草购于广州清平市场 ,经广东药学院中药学院生药教研
室陈幼竹博士鉴定为三白草科蕺菜属植物 Houtuyniacordata
Thunb.。
2　方法与结果
2.1 　鱼腥草多糖的提取与精制 取鱼腥草干品 200 g, 以 95%
乙醇回流脱脂 3次 , 药渣置通风处晾干 , 加水 10倍量 、8倍量 、 8
倍量 , 于 90 ～ 100℃依次提取 3, 2, 1 h, 过滤 , 合并滤液 ,浓缩至约
200ml, 用 95%乙醇调至含醇量为 80%, 静置过夜 , 离心 , 沉淀依
次用无水乙醇 、丙酮 、乙醚洗涤 ,得粗多糖。取粗多糖加水溶解至
100ml, 加入等体积 30%三氯乙酸溶液脱蛋白 , 4℃静置 ,离心 ,上
清液用 0.01 mol/L的氢氧化钠调 pH=7, 溶液减压浓缩 , 将浓缩
液装入透析袋置水中透析 ,透析液减压浓缩至 100 ml, 加入 95%
乙醇调含醇量为 80%, 静置 , 离心 ,沉淀用无水乙醇 、丙酮 、无水
乙醚依次洗涤 , 真空干燥 ,得除蛋白精制鱼腥草多糖。
2.2　标准品溶液与供试品溶液的制备
2.2.1　标准品溶液的制备 精密称取 105℃干燥至恒重的葡萄
糖 0.096 4 g, 加水溶解并定容至 100 ml,再取 1 ml, 定容至 10 ml
的容量瓶中 ,即制得浓度为 0.096 4 mg/ml的葡萄糖对照品贮
备液。
2.2.2　供试品溶液的制备 取 60℃干燥 1 h的鱼腥草约 10g, 精
密称定 ,用 95%乙醇 100, 80, 80 ml依次回流脱脂 3, 2, 2 h, 药渣
用 95%乙醇洗涤数次 ,药渣置通风处自然晾干后置烧瓶中 ,加水
100 ml, 精密称定 , 水浴(90 ～ 100℃)温提 4 h。再精密称定 ,补足
水至原重 ,振摇 , 趁热纱布过滤 ,离心除去沉淀 , 得上清液。精密
量取上清液 5 ml,放入透析袋中流水透析 24 h, 透析内液定容至
25 ml, 再精密量取 5 ml, 定容至 50 ml, 得供试液 , 冰箱中放置
备用。
2.3　标准曲线的制备 精密量葡萄糖标准品溶液 0.1, 0.2, 0.3,
0.4, 0.5, 0.6, 0.7 ml, 分别置 10 ml具塞试管中 , 加蒸馏水补充至
1.0 ml, 摇匀 , 加 5%苯酚溶液 1 ml, 浓硫酸 5 ml, 室温放置 40
min。另取 1ml蒸馏水 ,加同量苯酚和浓硫酸 , 同法操作 , 作为空
白对照 。置 7501型分光光度计中 , 于 490 nm测定吸收度 , 以吸
收度(Y)对葡萄糖含量(X)进行回归 , 得回归方程:Y= 9.107 3
X+0.010 2,相关系数 r2 =0.999 8。结果表明葡萄糖在 0.019 3
～ 0.096 4 mg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.4　换算因素的测定 精密称取 60℃干燥至恒重的鱼腥草多糖
101.2mg, 置 100ml容量瓶中 , 加入少量蒸馏水溶解 , 并稀释至刻
度 , 摇匀 , 精密量取此液 1 ml,照标准曲线制备项下的方法测定吸
收度 , 从回归方程中求出多糖供试液中葡萄糖的浓度。按下式计
算换算因素:F=W/(C×D)。 F为换算因素;W为多糖重量
(mg);C为多糖稀释液中葡萄糖的浓度(mg/ml);D为稀释因素。
2.5 　精密度实验 取供试液 , 按上述方法操作 , 连续测定 5次 ,
RSD=2.61%。结果表明精密度良好。
2.6　稳定性实验 取供试液 , 按上述方法操作 ,每隔 30min测定
一次吸收度 ,连续 5h考察其稳定性 , 结果表明供试液在 5 h显色
稳定 , RSD=2.61%。
2.7　加样回收率实验 精密称取鱼腥草样品 20g, 加入适量葡萄
糖对照品 ,置同一烧杯中 ,按供试液制备与含量测定法操作。 测
定结果葡萄糖的平均回收率为 100.7%, RSD=3.78%(n=6)。
2.8　样品测定方法 取各供试品溶液 , 按 “ 2.3”项下方法操作 ,
测定吸收值 , 从回归方程中求出供试液中葡萄糖的含量 , 按下式
计算样品中多糖含量:多糖含量(%)=C×D×F×100/W。 结
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.4　
果见表 1。
表 1　不同产地多糖含量测定 %
产地 多糖含量 平均含量 RSD
15.58
广东 15.88 15.73 1.01
15.82
16.50
广西 16.10 16.21 1.56
16.03
16.12
湖南 15.66 15.89 1.49
15.80
20.26
湖北 20.32 20.29 0.15
20.50
3　讨论
从湖北 、广东 、广西和湖南产多糖含量测定结果来看 ,不同产
地鱼腥草多糖含量有一定的差异 ,其中湖北的鱼腥草多糖含量最
高 , 广东和湖南产的鱼腥草多糖含量相近。
在鱼腥草多糖的含量测定中 ,因较难得到相应多糖对照品 ,
采用葡萄糖代替对照品 , 测定样品中多糖的相对含量。文中以比
色法测定样品中的单糖 ,通过单糖和多糖的换算因子计算药材中
多糖。
鱼腥草目前主要是开发挥发油类成分的制剂如鱼腥草注射
液等相关产品 ,而对于水溶性多糖以废弃物处理 , 本课题对鱼腥
草不同产地多糖的含量测定 ,对于鱼腥草资源的合理充分利用具
有重要的意义。
参考文献:
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收稿日期:2007-06-28;　修订日期:2007-10-21
基金项目:广西医科大学青年教师博士基金启动课题
作者简介:李　静(1981-),女(汉族),河南南阳人 ,现为广西医科大学 2005
级在读硕士研究生,学士学位 ,主要从事肿瘤抗原 、分子机制研究工作.
＊通讯作者简介:杨　斌(1964-), 男(汉族),广西玉林人 , 现任广西医科
大学药学院副教授 ,博士学位 ,主要从事中药抗肿瘤研究工作.
青蒿琥酯对人肝癌 HEPG-2细胞增殖作用的研究
李　静 , 杨　斌＊ , 陈永顺
(广西医科大学药学院 ,广西 南宁　530021)
摘要:目的 研究青蒿琥酯(Artesunate, Art)对肿瘤细胞增殖抑制作用。方法 MTT法测定 Art, 与铁剂联用 ,以及与 5-
FU联用对人肝癌细胞系 HEPG-2的增殖抑制作用。结果 Art能够明显抑制 HEPG-2细胞的生长 , 并呈现明显的时间
-剂量效应。 24, 48, 72h的 IC
50
值分别为 103.1, 75.3, 65.7μg/m。当 Art(10μg/ml)与 5-氟尿嘧啶(5 -Fu)(5μg/ml)
联合使用时 , 表现出明显的协同作用。结论 Art对人肝癌细胞系 HEPG-2细胞有显著的抑制作用 ,有可能开发为临床
抗癌治疗的辅助药物。
关键词:青蒿琥酯;　HEPG-2
中图分类号:R962　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)04-0823-02
ExperimentalStudyontheEffectofartesunate(Art)onHEPG-2 CellsinVitro
LIJing,YANGBin＊ ,CHENYong-shun
(GuangxiMedicalUniversity, Nanning, 530021, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheefectofartesunate(Art)onHEPG-2cellsinvitro.MethodsCelculture, MTTwereper-
formedtoobservetheproliferationofArt, combiningwithiron, 5-FU.ResultsArt(50～ 200μg/ml)couldinhibitHEPG-2cel
proliferationinatime-dosedependentmannerandIC50were103.1, 75.3, 65.7μg/mlin24h, 48h, 72hrespectively.WhenArt
(10μg/ml)wasusedcombiningwith5-Fu(2.5μg/ml), therewasobvioussynergies.ConclusionArtcouldsignificantlyinhibit
theproliferationofHEPG-2.
Keywords:Art;　HEPG-2
　　青蒿琥酯(artesunate, Art)是从天然植物青蒿中提取的一种
含内过氧化基团的倍半萜内酯化合物 , 其结构具有一定的新颖
性 , 临床上主要用于抗疟治疗。目前的研究发现 ,其还具有抗肿
瘤效应 [ 1, 2] 。 本实验研究了 Art对体外培养的人肝癌细胞系
HEPG-2细胞增殖的影响。现报道如下。
1　器材
1.1　仪器 全自动 CO2孵箱(美国 ThermoFormo),倒置显微镜(日产), 雷勃 MK3酶标仪。
1.2　试剂 RPMI-1640培养液(美国 Gibco公司);小牛血清
(杭州四季青生物工程材料有限公司);四唑盐(MTT), 二甲基亚
砜(DMSO)均购自 Sigma公司;Art购于桂林制药厂;5 -FU购于
广西医科大学第一附属医院药剂科;硫酸亚铁为分析纯。
1.3 　细胞株和细胞培养 人肝癌 HEPG-2细胞株从广西医科
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.4 时珍国医国药 2008年第 19卷第 4期