全 文 ：第 1 期 曾勇 等 高效液相色谱法测定武当玉兰中木兰脂素的含量
2013 年 3 月第 36 卷第 1 期 成都中医药大学学报
Mar. 2013，Vol. 36，No. 1 Journal of Chengdu University of TCM
高效液相色谱法测定武当玉兰中木兰脂素的含量
曾勇1 刘燕1 瞿京红2
(1． 湖北省东风汽车公司 茅箭医院 药剂科，湖北 十堰 442000;2． 湖北省东风汽车公司总医院，湖北 十堰 442000)
摘 要:目的:建立反相高效液相色谱法测定武当玉兰中木兰脂素含量的方法。方法:采用Agilent HC-
C8 (250 mm ×4. 6 mm，5 μm)为色谱柱，流动相为乙腈-四氢呋喃-水 (35∶ 1∶ 64)，流速为 1. 0 mL /min，柱
温为30 ℃，检测波长为278 nm。结果:武当玉兰中木兰脂素在0. 05 ～1. 02 mg / mL (r =0. 9998)范围内线性
关系良好，平均加样回收率为 97. 9 %;RSD不大于 2. 0 %。结论:本方法快速，简便，重复性好，可用于
武当玉兰及其制剂中木兰脂素的含量测定。
关键词:木兰脂素;武当玉兰;高效液相色谱法
中图分类号:R282. 71;R284 文献标识码:A 文章编号:1004-0668 (2013)01-0067-03
作者简介:曾勇，男，1968 年生;主管药师;E-mail:lizhihaojack@ 126. com。
通讯作者:瞿京红，女;副主任药师;研究方向:医院药学工作;E-mail:dfyyqq@ 163. com。
Determination of Magnolin in Magnolia Sprengeri Pamp.
by High Performamce Liquid Chromatography
ZENG Yong1 ，LIU Yan 1 ，QU Jing-hong2
(1． Department of Pharmacy，Dongfeng Maojian Hospital Shiyan，44200，China;2． Dongfeng General Hospital Shiyan，Shiyan，442000，China)
［Abstract］ Objective:To establish a method for the determination of magnolin in Magnolia sprengeri Pamp.Methods:HPLC
method was used with Agilent HC-C8 (250 mm ×4. 6 mm，5 μm)column and the mobile phase consisted of acetonitrile-tetrahydrofu-
ran-water (35∶ 1 ∶ 64) . The flow rate was 1. 0 mL/min，the column temperature was 30℃，and the UV detector was set at 278
nm. Results:The linear ranges of magnolin was 0. 05 ～ 1. 02 mg /mL (r = 0. 9998)． The average recovery of magnolin was 97. 9 %，
and RSD ＜ 2. 0 % ． Conclusion:The method is simple，repeatable and accurate，it can be applied in quantitative determination of
evodiamine and rutaecarpine in Magnolia sprengeri Pamp．
［Key Words］:Magnolin;Magnolia sprengeri Pamp.;different growth period;HPLC
武当玉兰为木兰科植物武当玉兰 Magnolia
sprengeri Pamp. 的干燥花蕾，具有通鼻窍、散风寒
的功效，鄂西北尤其是十堰地区广泛用于治疗风寒
头痛、鼻渊、鼻塞，为多种中药复方制剂以及中成
药的主要药味，也是中药辛夷的主要来源植物。
2010版药典一部［1］规定了辛夷的质量控制指标，其
中包括木兰脂素的含量。由于本地区采收武当玉兰
时并无严格生长时限限制，导致盲目采收，为提高
武当玉兰药材质量，保护十堰地区武当玉兰药材资
源，本研究采用高效液相色谱法测定武当木兰中木
兰脂素的含量，以期保护当地武当玉兰药材资源。
1 仪器与试药
德国 Dionex-U3000 液相色谱仪 (德国 DIONEX
公司，二极管阵列检测器，Dionex Chemeleon 色谱
工作站) ，SK5200H超声波清洗机 (上海科导超声
仪器有限公司) ;普利赛斯 XB10200G 型电子天平
(d = 0. 1 mg) ;木兰脂素对照品 (购于中国药品生
物制品检定所，供含量测定用，批号 110882-
200505) ，武当木兰采自十堰市武当山地区，经湖
北省十堰市药品检验所陈银华副主任中药师鉴定为
木兰科植物武当玉兰 Magnolia sprengeri Pamp. 的花
蕾，甲醇、乙腈均为色谱纯，水为双蒸水，其他试
剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备
取木兰脂素对照品适量经减压干燥器中干燥至
恒重，精密称定，加甲醇溶解制成含木兰脂素的浓
度为 1. 02 mg /mL的溶液，摇匀，即得。
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DOI:10.13593/j.cnki.51-1501/r.2013.01.039
成都中医药大学学报 2013 年第 36 卷
2. 2 供试品溶液的制备
取本品 45 ℃干燥至恒重，粉碎成粗粉，精密
称取约 1. 00 g，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙
酯 20 mL，密塞，称定重量，浸泡 30 min，超声处
理 (功率 250 W，频率 33 kHz)30 min，放冷，再
称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤
过，精密量取续滤液 3 mL，加在中性氧化铝 (100
～ 200 目，2 g，内径 9 mm，湿法装柱，用乙酸乙
酯 5 mL预洗)上，用甲醇 15 mL 洗脱，收集洗脱
液，置 25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过
取上清液，即得。
2. 3 色谱条件［2-4］
色谱柱为 Agilent HC-C8 (250 mm ×4. 6 mm，5
μm) ;流动相:乙腈-四氢呋喃-水 (35 ∶ 1 ∶ 64) ;流
速:1. 0 mL /min;柱温:30 ℃;进样量:10 μL;
检测波长 278 nm，在此色谱条件下，木兰脂素色谱
峰理论塔板数不低于 9000，色谱图见图 1、图 2。
图 1 对照品 (木兰脂素)HPLC色谱图
2. 4 标准曲线与线性范围
精密量取木兰脂素对照品溶液 0. 5 mL，1. 0
mL，2. 0 mL，5. 0 mL，8. 0 mL，10. 0 mL置 10 mL
量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀。分别精
密吸取 10 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测
定峰面积，以对照品色谱峰面积对对照品浓度进行
线性回归，回归方程为:Y = 0. 0741X － 0. 0334，r
= 0. 9998，表明木兰脂素在 0. 05 ～ 1. 02 mg / mL范
围内线性关系良好。
图 2 供试品 HPLC色谱图
2. 5 精密度试验
取木兰脂素对照品溶液，按上述色谱条件，重
复进样 6 次，测得峰面积 RSD为 1. 29 %。
2. 6 稳定性试验
精密吸取“2. 2”项下的供试品溶液，室温放
置 12 h，分别在 0 h，2 h，4 h，8 h，12 h 测定，
记录木兰脂素的色谱峰面积，计算其 RSD 为 1. 79
%，表明处理后的供试品溶液在 12 h内稳定。
2. 7 重复性试验
取同一批武当玉兰药材 9 份，每份约 1. 0 g，
精密称定。照 “2. 2”项下平行制备供试品溶液，
按上述色谱条件测定，记录色谱峰面积，按外标两
点法计算样品中的含量，结果木兰脂素的含量分别
为 4. 38 mg /g，RSD为 1. 78 %。
2. 8 加样回收率试验
精密称取已知含量的武当玉兰 9 份，每份 0. 5
g，分别精密加入对照品溶液 3. 0 mL、4. 0 mL、
5. 0 mL。按“2. 2”项下的方法制备供试品溶液，
进样 10 μL。测定回收率，结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
成分 取样量 (g) 原有含量 (mg) 加入量 (mg) 测得量 (mg) 回收率 (%) 平均值 (%) RSD (%)
木
兰
脂
素
0. 4992 2. 4111 3. 06 5. 4231 98. 4
0. 4868 2. 3512 3. 06 5. 3066 96. 6
0. 5110 2. 4681 3. 06 5. 5040 99. 2
0. 5016 2. 4227 4. 08 6. 3938 97. 3
0. 4974 2. 4024 4. 08 6. 4372 98. 9
0. 4941 2. 3865 4. 08 6. 4510 99. 6
0. 4984 2. 4073 5. 10 7. 2900 95. 7
0. 5061 2. 4444 5. 10 7. 4062 97. 3
0. 5153 2. 4889 5. 10 7. 4874 98. 0
97. 9 1. 30
2. 9 样品测定
取武当玉兰，按 “2. 2”项下方法制备供试品
溶液，照上述色谱条件进样测定，外标两点法计算
样品中木兰脂素的含量，结果见表 2。
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第 1 期 曾勇 等 高效液相色谱法测定武当玉兰中木兰脂素的含量
表 2 不同样品中木兰脂素的含量测定结果 (mg /g，n = 5)
批号 木兰脂素
20100412 4. 38
20100521 4. 42
20110423 4. 85
20110515 5. 69
20120416 4. 71
3 讨论
由于武当玉兰目前没有大规模人工种植，所以
本研究中树龄的确定相当困难，研究组到当地种植
有武当玉兰的农户家中调查，确定植株的生长年
限，第二年花蕾期进行采摘。每个生长年限段的树
种选取有代表性的植物进行分析。
武当玉兰作为重要的中药材与望春花、玉兰都
作为辛夷入药，但是武当玉兰与另外两种药材作为
不同植物，其化学成分的差别，及具体药理作用有
何不同都有待于本课题再进一本深入研究。
参考文献
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医药科技出版社，2010:169．
［2］方红，郭群，苏玮，等 . 高效液相色谱法测定中药辛
夷中木兰脂素的含量 ［J］． 药物分析，2002，22
(5) :342-345．
［3］马玉良，韩桂秋 . 辛夷中木脂素成分的研究 ［J］． 中
国中药杂志，1995，20 (2) :102．
［4］苏中兴 . 武当木兰花挥发油化学成分的研究 ［J］． 中
药材，1992，15 (5) :30.
(收稿日期:2012-11-12 责任编辑:薛红
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)
(上接第 38 页)
测定结果表明，Fzd 受体系列变化的时间点主
要出现在诱导的第 3 d，响应的受体主要为 Fzd2 和
Fzd3，其余 Fzd受体没有显著变化。
3 讨论
随着基础研究的不断深入，已报道的研究结果
表明细胞的成骨分化信号转导机制研究主要集中在
MAPK途径 (包括 JNK、ERK、p38 通路)、Notch
途径、Wnt 途径［6］等。目前认为 Wnt 信号途径包
括以下 3 种分支［7］: (1)经典 Wnt 信号通路，通
过 β-Catenin作用激活基因转录; (2)Wnt /Ca2 +通
路，通过胞内 Ca2 +的释放，从而影响细胞黏连和
基因表达; (3)Wnt /PCP 通路，通过小 G 蛋白激
活 c-Jun N 端激酶 JNK，来调控细胞骨架重排。其
中经典的 Wnt 信号通路由 Wnt 糖蛋白 (主要是
Wnt1、Wnt3a、Wnt8a、Wnt10b 等)、 β-Catenin、
卷轴受体 (Frizzled receptor) ，以及低密度脂蛋白
受体相关蛋白 LRP5 /6 、糖原合成激酶 (GSK-
3b)、Dsh (Dishevelled)、淋巴增强因子 (LEF) /
T细胞因子 (TCF)转录因子等组成。近年来，中
药对骨质疏松的干预和治疗作用的报道比较多，但
关于细胞成骨分化调控的信号途径报道比较少。
从本文所检测的 Fzd分子来看，杜仲醇提取物
诱导的响应分子主要是 Fzd2 和 Fzd3，响应时间出
现在诱导的第 3 天，其余 Fzd在各时间点没有显著
变化。提示 Wnt 信号途径可能与杜仲诱导 BMSCs
成骨分化相关。
需要指出的本实验检测的分子单一，若同时还
检测 Wnt信号通路中其它分子，更能说明 Wnt 信
号途径参与了杜仲醇提取物诱导 BMSCs 成骨分化，
有待于进一步研究。
参考文献
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(收稿日期:2012-09-03 责任编辑:薛红)
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