全 文 ：正文中含量测定项下方法测定供试品溶液并测定其盐酸小檗碱
的含量。平均回收率为 96.7%, 相对标准偏差为 1.53%, 表明此
法回收率良好。结果见表 1。
表 1　加样回收率实验结果
取样量
m/g
样品中量
m/mg
加入量
m/mg
实测量
m/mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
0.2519 1.458 1.54 2.941 96.3
0.2531 1.465 1.54 2.967 97.5
0.2507 1.452 1.54 2.924 95.6 96.7 1.53
0.2524 1.461 1.54 3.010 98.9
0.2524 1.461 1.54 2.929 95.3
2.2.9　样品含量测定 取本品 10批 , 按正文中含量测定项下方
法测定。结果见表 2。
3　讨论
实验过程中对盐酸小檗碱对照品的 80%甲醇溶液进行停泵
扫描 , 波长范围为 190nm至 400 nm。结果盐酸小檗碱的紫外特
征吸收最大 265 nm,由于在 265 nm处检测系统易稳定 ,峰形好 、
响应大 , 确定 265nm为检测波长。
表 2　10批和胃止痛片样品含量测定结果 mg
批　号 每片中盐酸小檗碱含量 批　号
每片中盐酸
小檗碱含量
20051001 1.77 20051103 1.49
20051002 1.40 20051201 1.31
20051003 1.64 20051202 1.30
20051101 1.15 20051203 1.55
20051102 1.72 20051204 1.25
由于不同产地及采收时间等原因导致黄连药材中的盐酸小
檗碱的含量有高有低 , 结合以上 10批样品中盐酸小檗碱的含量
测定结果 ,将本品中盐酸小檗碱的含量定为每片含黄连以盐酸小
檗碱计 ,应不得少于 0.70 mg。
参考文献:.
[ 1 ] 　余小婷 ,幸　而 ,黄红雯.和胃止痛胶囊质量标准研究 [ J] .中南药
学 , 2004, 2(5):291.
[ 2 ] 　朴惠善 ,沈光海 ,郑云花 , 等.紫外分光光度法测定关苍术复方制
剂中延胡索乙素含量 [ J].延边医学院学报 , 1996, 19(1):11.
[ 3 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:213,附录 VIB.
收稿日期:2007-03-29;　修订日期:2007-09-03
作者简介:陈国栋(1970-),男(土家族), 湖北恩施人, 现任湖北民族学院
医学院实验师 ,主要从事道地中药材的药效学研究工作.
竹节人参对缺氧耐受小鼠兴奋性氨基酸的影响
陈国栋 , 文德鉴
(湖北民族学院医学院 ,湖北 恩施　445000)
摘要:目的 探讨竹节人参对小鼠缺氧耐受形成中脑组织兴奋性氨基酸(EAA)含量的影响。方法 将小鼠用竹节人参处
理后 , 建立小鼠急性重复缺氧耐受模型 , 观察竹节人参对缺氧耐受形成中脑组织中的谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-
氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)的影响。结果 竹节人参对正常脑组织 EAA含量无影响 , 可使缺氧耐受形成中脑组织
Glu, Asp含量降低 ,对 GABA, Gly无明显影响。结论 竹节人参能明显降低缺氧脑组织中 EAA含量 ,从而发挥对脑损伤的
保护作用。
关键词:竹节人参;　缺氧耐受;　兴奋性氨基酸;　脑组织
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)03-0716-02
EffectofRichPanaxjaponicusontheContentsoftheExcitatoryAminoAcidintheBrain
TissueofMicewithEndurationofOxygenDeficiency
CHENGuo-dong, WENDe-jian
(TheMedicalSchoolofHubeiInstiuteforNationalities, Enshi445000 , China)Abstract:ObjectiveTostudytheeffectofPanaxjaponicusonthecontentsoftheexcitatoryaminoacid(EAA)inthebraintis-
sueofmousewiththeconditionofendurationofoxygendeficiency.MethodsAftertreatedwithPanaxjaponicus, theacuteendur-
ablemodelofoxygendeficiencywasestablishedinmice.Thecontentsofglutamate(Glu), asparate(Asp), gama-aminobutyric
acid(GABA)andglycine(Gly)inthebraintissuewereassayedbyHple.ResultsRichPanaxjaponicushadnoapparenteffect
onEAAcontentsofnormalbraintissue, butitcoulddecreasethecontentsofGluandASPinmicewiththeconditionofendura-
tionofoxygendeficiency, ithadnoapparentefectonthecontentsofGAGBandGly.ConclusionRichPanaxjaponicuscande-
creasetheEAAcontentsinthebraintissueandprotecttheinjuredbrain.
Keywords:Panaxjaponicus;　Enduranceofoxygendeficiency;　ExcitatoryAminoAcid;　Tissueofbrain
　　竹节人参(PanaxjaponicusC.A.Mey)含有多种氨基酸(如门
冬氨酸 、丝氨酸 、谷氨酸 、组氨酸 、甘氨酸 、丙氨酸……)人参皂
苷 、三七皂苷等成分 [ 1 , 2] ,兼有人参和三七两药之功效 ,具有滋补
强壮 、活血化淤等的作用 [ 3] 。而生长在有 “中国硒都”之称的湖
北恩施深山丛林中的竹节人参 , 由于其富硒而使药效独特 , 疗效
显著。现已大规模种植 , 资源极为丰富 ,家种竹节人参具有野生
竹节人参一样的药用价值 [ 4] 。本实验以小鼠为对象 , 建立急性
重复缺氧模型 , 旨在研究竹节人参对缺氧耐受小鼠脑组织中兴奋
性氨基酸(excitatoryaminoacid, EAA)的影响 , 为深度开发湖北恩
施富硒竹节人参提供理论依据。
1　器材
1.1 　试剂和仪器 谷氨酸(glutamateGlu)、天冬氨酸(asparate
Asp)、γ-氨基丁酸(gama-aminobutyricacidGABA)、甘氨酸
(glycineGly)标准品均为美国 Sigma公司产品 , 纯度为 99.99%,
其它试剂均为国产分析纯。 TG328A型电子分析天平;RE-52
·716·
时珍国医国药 2008年第 19卷第 3期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.3　
型旋转蒸发器;DL-50型超级恒温器;GL-20G高速冷冻离心
机;LC-10A高效液相色谱仪 (日本岛津)。
1.2　动物 昆明种小鼠 80只 , 体重(20.0±2.1)g, 雌雄各半 ,由
湖北省实验动物中心提供。
1.3 　竹节人参注射剂的制备 竹节人参购自恩施中药材公司。
取根粗粉用水煎煮后采用沉淀法制备成注射剂(由本院中药制
剂实验室制备)。相当生药含量为 2 g/ml, 用时以生理盐水稀释
成 0.4 g/ml。
2　方法
2.1　实验分组及处理 随机将昆明种小鼠分为 8组:正常对照
组 、竹节人参对照组 、1次缺氧模型组 、 1次缺氧竹节人参组 、2次
缺氧模型组 、 2次缺氧竹节人参组 、 3次缺氧模型组 、3次缺氧竹
节人参组 , 每组 10只。
竹节人参对照组 、 1次缺氧竹节人参组 、2次缺氧竹节人参
组 、3次缺氧竹节人参组小鼠均腹腔注射药物 10 ml/kg, 正常对
照组 、1次缺氧模型组 、2次缺氧模型组和 3次缺氧模型组小鼠均
腹腔注射等量生理盐水。 1次 /d, 连续给药 2d,试验前 30 min给
药 1次。
2.2 　急性重复缺氧模型的建立 将上述药物处理后的小鼠 , 除
正常对照组和竹节人参对照组外 ,按急性重复缺氧方法 , 分别置
于含有新鲜空气 ,经过标定的 150 ml广口瓶内。以橡皮塞密闭 ,
记时 , 一旦出现喘气呼吸 , 立即取出 , 并随即转移到另一相似体
积 , 含有新鲜空气的广口瓶内 , 密闭 , 记时。依此类推至 3次 ,实
验室温度(20±2)℃。
2.3 　测定方法和指标 将急性重复缺氧处理后的小鼠处死 , 取
出双侧脑组织 , 在冰台上迅速分离双侧前脑皮质和海马 , 以冰生
理盐水冲洗后除去残血 , 吸干后称重 , 按 1∶9比例加入无水乙
醇 , 以高速匀浆机在冰浴下制成 10%脑匀浆液。匀浆条件为 10
s/次 , 停 15 s, 共计 4次。将匀浆液于 3 500 r/min(4℃)离心 5
min,分离上清液 , 于 -30℃保存待测。测试前标本复溶 ,再 1 000
r/min(4℃)离心 10min,取上清液 , 检测条件及方法按 Chen等 [ 5]
建立的高效液相色谱仪法进行 ,进样量为 100 μl。检测小鼠脑组
织中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨
酸(Gly)的含量。
2.4 　数据分析 实验数据用 SPSS11.5 forWindows统计分析软
件进行处理 , 数据以 x±s表示 ,实验结果采用配对样本 t检验 。
3　结果
3.1 　缺氧耐受小鼠脑中兴奋性氨基酸 Glu, Asp含量的变化 第
1, 2, 3次缺氧后 ,除 2次缺氧模型组脑组织 Glu的含量与正常对
照组相比无明显差异(P>0.05)外 , Glu和 Asp的含量明显升高
(P<0.01), 随着缺氧次数的增加有明显下降趋势。各组间 Glu
和 Asp含量也有一定的差别 , 且随缺氧次数的增加 , 其差别愈明
显。结果见表 1。
3.2 　竹节人参对缺氧耐受小鼠脑中兴奋性氨基酸 Glu, Asp含
量的影响 竹节人参对正常小鼠脑组织 Glu, Asp含量影响不大
(P>0.05)。第 1, 2, 3次缺氧后 ,除 1次缺氧竹节人参组脑组织
Glu的含量与正常对照组相比明显升高(P<0.01)外 , Glu和 Asp
的含量无明显差异(P>0.05), 随着缺氧次数的增加有下降趋势
结果见表 1。
3.3 　各组脑组织中抑制性氨基酸 GABA, Gly含量的变化 竹节
人参对正常小鼠脑组织中 GABA, Gly的含量影响不大 (P>
0.05)。 1次缺氧后 , 竹节人参组与缺氧组脑组织 GABA与对照
组相比有明显升高(P<0.05), Gly的含量也有升高趋势 , 随缺氧
次数的增加 GABA和 Gly的含量有回降趋势(P﹥ 0.05),无统计
学意义 。结果见表 1。
表 1　竹节人参对缺氧耐受小鼠氨基酸的影响( x±s)
μmol· g-1
组别 Glu Asp GABA Gly
正常对照 6.77±0.39 2.04±0.15 2.24±0.23 2.31±0.25
竹节人参对照 6.78±0.36 2.03±0.16 2.22±0.23 2.27±0.24
1次缺氧模型 8.13±0.46＊＊ 2.35±0.23＊＊ 2.56±0.28＊ 2.32±0.23
1次缺氧竹节人参 7.60±0.38■■ 2.18±0.21 2.52±0.24■ 2.31±0.22
2次缺氧模型 6.63±0.37 1.83±0.19＊＊ 2.43±0.26 2.30±0.24
2次缺氧竹节人参 7.24±0.43 2.11±0.21 2.36±0.25 2.26±0.26
3次缺氧模型 6.18±0.34＊＊ 1.67±0.14＊＊ 2.21±0.14 2.35±0.22
3次缺氧竹节人参 7.17±0.45 2.05±0.22 2.29±0.26 2.25±0.20
　　模型组与正常对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;竹节人参组与正常对照组
比较 , ■P<0.05, ■■P<0.01;n=10
4　讨论
氨基酸是生命的基础物质 ,在人体的生长 、发育 、营养和代谢
等生命活动中起着重要作用。 EAA主要是指 Glu和 Asp, Glu是
中枢神经系统中含量最高 , 分布最广 ,作用最强的兴奋性神经递
质。大量实验证实脑缺血缺氧损伤时 ,脑内产生大量的 EAA, 作
用其受体 , 导致细胞内钙超载及一系列的变化 , 最终使神经细胞
代谢衰竭而死亡。 EAA升高的程度与脑损伤的程度有关 , 损伤
越严重则兴奋性氨基酸升高越显著 ,持续时间越长。在重复缺氧
过程中 , 脑组织可能通过某种机制的调节 , 减少了兴奋性氨基酸
的生成 ,促进了抑制性氨基酸的回降 , 从而促进缺氧耐受的形成。
脑缺氧过程中 ,自由基反应也是引起脑损伤的另一个重要因
素 , 在正常情况下 , 不致引起病理效应 , 但在脑缺氧情况下 ,自由
基产生过多 ,超氧化物歧化酶(superoxidedismutase, SOD)含量明
显降低 , 引起细胞损伤 , 脑损伤越严重 , SOD降低愈明显 [ 6] 。 有
研究表明竹节人参有抗疲劳 [ 7] 、抗炎 、镇痛作用 , 对垂体后叶素
造成的小鼠心肌缺血损伤 、大鼠胃缺血再灌注损伤有保护作用。
本研究结果表明 ,竹节人参可对抗缺氧性脑损伤 ,防止缺氧
时 EAA的升高。竹节人参对缺氧所致小鼠脑损伤具有明显的保
护作用 ,其作用机理可能与对抗脑缺氧时 EAA的升高及清除过
多自由基等有关。
参考文献:
[ 1 ] 　陈永波 ,饶　斌 ,沈艳芬.竹节人参中氨基酸和皂甙特征组分的分
析鉴别 [ J] .色谱 , 2003, 21(3):248.
[ 2 ] 　黄泰康 ,丁志遵.现代本草纲目 , 上卷 [ M] .北京:中国医药科技出
版社 , 2000:1046.
[ 3 ] 　谢宗万 ,范崔生 ,朱兆仪.全国中草药汇编 ,上册 [ M] .北京:人民
卫生出版社 , 2000:380.
[ 4 ] 　瞿万云.家种与野生竹节人参化学组分的薄层色谱比较分析 [ J] .
湖北民族学院学报(医学版), 2003, 20(2):12.
[ 5 ] 　ChenBM, XiaLM, ZhaoRQ.DeterminationofNG, NG-dinmethyl-
arginineinhumanplasmabyhigh-performanceliquidchromgraphy
[ J] .JournalofchromatographyB, 1997, 692:467.
[ 6 ] 　王丽珠 ,尹中秋 ,郑　伟.34例新生儿缺氧缺血性脑病 SOD及丙
二醛的变化 [ J] .实用儿科杂志 , 1993, 8(2):93.
[ 7 ] 　刘　红.竹节人参提取物抗疲劳的实验研究 [ J] .湖北民族学院学
报(医学版), 2001, 18(3):4.
·717·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.3 时珍国医国药 2008年第 19卷第 3期