全 文 ：包合物含油率(%)= 包合物中挥发油量(g)
包合物总重量(g)
× 100%
挥发油利用率为衡量包合效果的重要指标，挥发油利用率越
高，包合效果越好，可作为包合工艺筛选的主要指标，权重系数定
为 0． 6，但包合物收得率和包合物含油率也有意义，两者越高，包
合效果越好，因此，包合物收得率和包合物含油率可作为次要筛
选指标，权重系数定分别为 0． 2，将三者进行综合评分，实验结果
见表 5 ～ 6。
表 5 挥发油包合工艺正交实验结果
实验号 A B C D
挥发油利
用率(%)
包合物收
得率(%)
包合物含
油率(%)
综合
评分
1 1 1 1 1 12． 55 71． 94 2． 71 22． 46
2 1 2 2 2 31． 37 66． 67 5． 20 46． 46
3 1 3 3 3 62． 74 50． 68 10． 64 49． 91
4 2 1 2 3 30． 12 63． 23 7． 39 32． 20
5 2 2 3 1 56． 47 77． 29 7． 43 50． 83
6 2 3 1 2 62． 58 72． 20 7． 47 53． 48
7 3 1 3 2 50． 19 68． 46 25． 48 48． 90
8 3 2 1 3 25． 10 61． 09 4． 54 16． 19
9 3 3 2 1 31． 29 79． 51 3． 39 35． 35
均值 1 0． 283 0． 247 0． 267 0． 267
均值 2 0． 397 0． 300 0． 247 0． 383
均值 3 0． 283 0． 417 0． 450 0． 313
极差 0． 114 0． 170 0． 200 0． 116
表 6 方差分析
因素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 显著性
A 0． 026 2 1． 238 19． 000
B 0． 045 2 2． 143 19． 000
C 0． 075 2 3． 571 19． 000
D 0． 021 2 1． 000 19． 000
误差 0． 02 2
根据上述综合评分，可得出最佳包合工艺为 A2B3C1D2，即温
度为 50 ℃包合 β － CD 与挥发油的比为 8 ∶ 1，搅拌时间为 30
min，β － CD与水之比为 1∶ 15。由表 6 方差分析可见，上述 4 因
素对包合效果均没有显著性差异。
2． 2． 6 包合工艺验证实验 取挥发油的无水乙醇溶液(V∶ V = 1
∶ 1) ，按上述最佳工艺进行验证实验(n = 3) ，挥发油的得率最
高，且工艺稳定，故所选的工艺技术条件 A2B3C1D2 是可行的。
2． 2． 7 包合物的 TLC 验证 取包合物 0． 5 g，加入 95%乙醇 2
ml，振摇后滤过，滤液为样品 a，另取挥发油 2 滴，加入 95 %乙醇
2 ml混合溶解，得样品 b。分别吸取样品 a、b液各得 10 ml。点于
同一块 0． 3 % CMC － Na －硅胶 G 薄层板上，以石油醚∶ 醋酸乙
酯(85∶ 15)为展开剂，上行展开。取出晾干后喷以 1 %香草醛
硫酸液，105 ℃烘至斑点清晰。
样品 a中未现出挥发油中相应的斑点。
表明挥发油已被 β － CD包合，其外部无游离挥发油粘附。
3 讨论
当归、安息香、藏菖蒲和藏党参为六味止痛胶囊处方中含挥
发油的药材，在提取 4 h挥发油的量较大，但是 8 h之后挥发油的
量已没有明显增加。
β － CD包合物的制备过程中，客体的投入量大小对包合效
果有较大的影响，在一定范围内可以提高包合率，但是过多反而
会降低饱和率。本文对客体投入量对包合效果的影响进行探讨，
结果表明:β － CD与水之比为 1∶ 15，β － CD与油之比为 8∶ 1 时
包合效果好;在 50℃搅拌 30 min 挥发油利用率最高。这是因为
在此温度下 β － CD溶解度高于室温下的溶解度，与挥发油接触
多，易于将挥发油更多包合，同时又可避免高温搅拌引起挥发油
的逸散。
本实验中当归、安息香、藏菖蒲和藏党参的总挥发油的利用
率约为 62 %，这说明尚有游离挥发油未被包合，吸附在包合物表
面，如何进一步提高挥发油的包合工艺还有待进一步研究。
参考文献:
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β － CD包合工艺的研究［J］．中成药，2008，30(11) :170．
收稿日期:2010-03-11; 修订日期:2010-06-27
基金项目:广东省教育厅育苗工程［No．(2008)342］
作者简介:卢国勇(1985-) ，男(汉族) ，广东高州人，现为广东药学院中药
学院在读硕士研究生，主要从事中药炮制与质量标准研究工作．
* 通讯作者简介:孟 江(1976-) ，女(汉族) ，河南三门峡人，现任广东药
学院副教授，博士学位，主要从事中药药效物质基础及饮片质量标准化研
究工作．
鱼腥草多糖双氧水脱色工艺研究
卢国勇，孟 江* ，廖华卫
(广东药学院·中药学院，广东 广州 510006)
摘要:目的 研究鱼腥草多糖双氧水脱色的最佳工艺。方法 以多糖含量和脱色率为指标，在单因素筛选的基础上，采用
正交实验法对脱色工艺进行优选。结果 脱色最佳工艺为:在 60℃的条件下，调节 pH 9． 0，加入双氧水量 30%，反应 4h。
结论 该脱色工艺操作简单、效率高，适合工业化应用。
关键词:鱼腥草; 多糖; 双氧水; 脱色工艺
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 03． 072
中图分类号:TS 201． 1 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)03-0671-03
多糖是一类具有广泛生物活性的生物大分子物质［1］，大量
试验证明多糖具有抗病毒、增强免疫力、抗肿瘤、延缓衰老、降血
糖、抗凝血等多种功效［2］，因此多糖的研究具有重要的应用价
值。鱼腥草为三白草科植物蕺菜 Houttuynia cordata Thunb． 的干
燥地上部分或新鲜全草，为国家卫生部确定的药食两用的品种。
本课题组曾对鱼腥草多糖的提取工艺进行研究报道［3，4］。药理
研究发现鱼腥草水溶性多糖对羟自由基和超氧自由基有较明显
的清除作用［5］，然而鱼腥草水提醇沉后得到的多糖常呈黑红色，
不利于鱼腥草多糖成分的进一步分离鉴定和鱼腥草多糖保健品
的开发。双氧水脱色具有脱色效率高、操作简单、快捷的特点，为
此对双氧水脱色方法进行优选，以期找到适合工业化生产的最佳
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脱色工艺，为鱼腥草多糖的理论研究及工业化提取中脱色操作提
供理论依据。
1 材料与仪器
1． 1 药材与试剂 鱼腥草购于广州市清平药材市场，经鉴定为三
白草科蕺菜属植物 Houttuynia cordata Thunb．。苯酚试剂参照余
世春［6］等设计方法配制，其它试剂均为分析纯。
1． 2 仪器 PHS － 25 型 pH 计(上海精密科学仪器有限公司) ，
TDL80 － 2B离心机(上海安亭科学仪器厂) ，UV － 1800 型紫外可
见光分光光度计(北京瑞利分析仪器公司) ，FA2004B 电子天平
(上海精密科学仪器有限公司)。
2 分析方法
2． 1 鱼腥草多糖的提取与精制 取鱼腥草干品 500 g，以 95%乙
醇回流脱脂 3 次，药渣置通风处晾干，加水 10 倍量、8 倍量、8 倍
量，于 90 ～ 100℃依次提取 3，2 ，1 h，过滤，合并滤液，浓缩至约
400 ml，用 95%乙醇调至含醇量为 80%，静置过夜，离心，沉淀依
次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，得粗多糖。取粗多糖加水溶解至
100 ml，加入等体积 30%三氯乙酸溶液脱蛋白，4 ℃静置，离心，
上清液用 0． 01 mol /L的氢氧化钠调 pH为 7，溶液减压浓缩，浓缩
液装入透析袋置水中透析，透析液减压浓缩至 100 ml，加入 95%
乙醇调含醇量为 80%，静置，离心，沉淀用无水乙醇、丙酮、无水
乙醚依次洗涤，真空干燥，得除蛋白精制鱼腥草多糖。
2． 2 多糖含量测定
2． 2． 1 标准曲线的制备 精密称取 105 ℃ 干燥至恒重的葡萄糖
标准品 0． 100 0 g，置 100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，再
取 1 ml，定容至 10 ml，得浓度为 0． 100 0 mg /ml的葡萄糖标准液，
精密量取此标准液 0． 1，0． 2，0． 3，0． 4，0． 5 ml，分别置 10 ml 试管
中，加蒸馏水补充至 1． 0 ml，摇匀，加 5 %苯酚溶液 1 ml，浓硫酸 5
ml，室温放置 30 min，另取 1 ml 蒸馏水，加同量苯酚和浓硫酸同
法操作，作为空白对照，置 UV －1800 型分光光度计中，于 490 nm
测定吸收度，以吸收度(Y)对葡萄糖含量(X)进行回归，得回归方
程:Y = 12． 438 X + 0． 021 9，相关系数 r = 0． 999 6。
2． 2． 2 换算因素的测定 精密称取 60 ℃干燥至恒重的鱼腥草多
糖 105． 2 mg，置 100ml容量瓶中，加入少量蒸馏水溶解，并稀释至
刻度，摇匀，精密量取此液 1 ml，照标准曲线制备项下的方法测定
吸收度，从回归方程中求出多糖供试液中葡萄糖的浓度。按下式
计算换算因素:F = W/(C × D)。F为换算因素;W为多糖重量
(mg) ;C为多糖稀释液中葡萄糖的浓度(mg /ml) ;D为稀释因素。
2． 2． 3 样品含量测定方法 取各供试品溶液，按“2． 2． 1”项下方
法操作，测定吸收值，从回归方程中求出供试液中葡萄糖的含量，
按下式计算样品中多糖含量:多糖含量(%)= C × D × F × 100 /
W。
2． 3 脱色率的计算 对鱼腥草粗多糖液进行了可见一紫外光谱
700 ～ 200 nm扫描，结果表明溶液无最大吸收波长，根据多糖溶
液脱色前后均为橙黄色，故从溶液的互补色考虑选择 450 nm 为
检测波长测定其吸收度。并按下式计算脱色率。
脱色率(%)=脱色前吸光度 －脱色后吸光度
脱色前吸光度
× 100%
2． 4 数据处理 采用加权评分法。评分标准为:将各项指标除以
该列最大值再乘以 100，为该项得分。根据多糖脱色率(x)和多糖
含量(y)两项指标权衡，确定二者的权重系数均为 0． 5，对两项指
标进行加权求和，通过公式 z =0． 5 x +0． 5 y，得到综合评分(z)。
3 结果与分析
3． 1 单因素实验 称取粗多糖 20 g 加 1 000 ml 蒸馏水，加热使
充分溶解，放冷，离心，离心液作为鱼腥草粗多糖溶液备用。考虑
双氧水有较强的氧化性而破坏多糖，故单因素实验以脱色效果与
多糖含量为测定指标。
3． 1． 1 脱色时间的影响 取 3 ml粗多糖溶液于 10 ml 容量瓶中，
加 30%双氧水 0． 3 ml，50℃反应不同时间，冷却，分别于 450 nm和
490 nm处测定吸光度，分别计算脱色率和多糖含量。结果见表 1。
表 1 脱色时间对双氧水脱色效果和多糖含量的影响
脱色时间 t /h 脱色率(%) 多糖含量(%)
0． 3 33． 8 22． 3
0． 6 40． 9 21． 8
1 41． 9 22． 9
1． 5 48． 1 22． 7
2 52 21． 8
3 57． 3 22． 0
5 64． 1 22． 0
8 71． 3 22． 7
10 72． 3 21． 4
表 1 可以看出，随着时间的增加，脱色效果增大明显，但在 8
h后变化不大，而多糖含量下降。所以脱色时间应在 8 h左右。
3． 1． 2 pH值对脱色效果的影响 取 3 ml粗多糖溶液于 10 ml容
量瓶中，加 30%双氧水 0． 3 ml，50℃，不同 pH条件下反应 4 h，冷
却，分别于 450 nm和 490 nm 处测定吸光度，分别计算脱色率和
多糖含量。结果见表 2 。
表 2 pH值对双氧水脱色效果和多糖含量的影响
pH值 脱色率(%) 多糖含量(%)
5 80． 1 23． 4
7 80． 4 23． 5
8 84． 5 23． 5
9 93 23． 3
10 97． 7 23． 1
11 92． 3 23． 1
由表 2 可以看出，脱色率在 pH 为 10 最大，说明双氧水在碱
性条件下对鱼腥草多糖提取液中色素有较大吸附，而多糖含量变
化不大。所以，脱色 pH应控制为 10 左右。
3． 1． 3 温度对脱色的影响 取粗多糖溶液 30 ml 调 pH = 9 ～ 10，
移取 3 ml于 10 ml容量瓶中，加 30%双氧水 0． 3 ml，不同温度条
件下反应 2 h，冷却，分别于 450 nm 和 490 nm 处测定吸光度，分
别计算脱色率和多糖含量。结果见表 3。
表 3 温度对双氧水脱色效果和多糖含量的影响
温度 /℃ 脱色率(%) 多糖含量(%)
20 36． 0 23． 1
40 72． 0 20． 1
60 88． 7 19． 3
80 93． 1 17． 9
100 95． 5 15． 4
由表 3 可以看出，脱色率随着温度的升高而升高，在 80℃
后，变化不大，说明双氧水对鱼腥草多糖提取液中色素的吸附趋
于平衡，而多糖含量也随温度升高而降低，80℃后多糖含量降低
比较大。所以，脱色温度应控制为 80℃以内。
3． 1． 4 双氧水用量对脱色的影响 取粗多糖溶液 30 ml调 pH = 9
～ 10，取 3 ml 于 10 ml 容量瓶中，50℃加入不等量双氧水反应 4
h，冷却，分别于 450 nm和 490 nm 处测定吸光度，分别计算脱色
率和多糖含量。结果见表 4。
表 4 双氧水用量对双氧水脱色效果和多糖含量的影响
pH 脱色率(%) 多糖含量(%)
5 85 22． 5
10 85． 3 22． 3
15 89． 3 22． 2
20 89． 5 23． 7
30 91． 2 26． 6
50 92． 1 19． 7
由表 4 可以看出，脱色率随着双氧水用量的升高而降低，在
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用量为多糖溶液体积的 30%后，光密度值变化不大，而多糖含量
在用量为 30%以后，含量急剧降低，说明双氧水用量不宜过大，
用量应控制为 30%以内。
3． 2 正交实验因素水平表的设计与实验 按单因素试验的结果，
选择 pH、温度、时间、双氧水用量按 L9(3
4)安排正交实验。因素
水平设计见表 5。
称粗多糖 8 g，加 400 ml水溶解，离心，取 30 ml于 100 ml容
量瓶中，按正交实验方案进行脱色，冷却，定容，测定脱色率和多
糖含量，以二者作为衡量脱色效率的指标。数据处理采用加权评
分法。评分标准为:将各项指标除以该列最大值再乘以 100，为
该项得分。设定多糖脱色率(x)和多糖含量(y)两者的权重系数
均为 0． 5，对两项指标进行加权求和。通过公式 z = 0． 5x + 0． 5y，
得到综合评分(z)。试验结果及方差分析见表 6 ～ 7。
表 5 脱色因素水平表
实验号
A
用量(%)
B
温度 T /℃
C
时间 t /h
D
pH
1 5 50 4 9． 0
2 15 60 6 9． 5
3 30 70 8 10
表 6 正交实验表及结果
实验号
因素
A B C D
脱色率
(%)
多糖含量
(%)
综合评分
(y)
1 1 1 1 1 81． 99 18． 30 87． 90
2 1 2 2 2 93． 78 19． 97 98． 13
3 1 3 3 3 76． 85 17． 23 82． 58
4 2 1 2 3 89． 96 15． 82 85． 78
5 2 2 3 1 95． 19 19． 64 98． 02
6 2 3 1 2 97． 01 13． 81 84． 36
7 3 1 3 2 96． 68 16． 96 92． 08
8 3 2 1 3 91． 62 15． 55 85． 95
9 3 3 2 1 97． 43 18． 77 97． 00
Ⅰj 268． 61 266． 48 257． 85 282． 92 G = 811． 8
Ⅱj 268． 16 282． 1 280． 91 274． 57 CT = 73 224． 36
Ⅲj 275． 03 263． 94 272． 68 254． 31
Ⅰj 2 72 151． 33 71 011． 59 66 486． 62 80 043． 73
Ⅱj 2 71 909． 79 79 580． 41 78 910． 43 75 388． 68
Ⅲj 2 75 641． 5 69 664． 32 74 354． 38 64 673． 58
Rj 219 702． 62 220 256． 32 219 751． 43 220 105． 99
Sj 9． 85 194． 41 26． 12 144． 30
表 7 方差分析
方差来源 离差平方和 自由度 方差 F值 显著性
B 194． 41 2 97． 21 19． 72 ※
C 26． 12 2 13． 06 2． 65
D 144． 30 2 72． 12 13． 63
误差 9． 85 2 4． 93
※有显著性影响 F0． 05(2． 2)= 19． 00 F0． 01(2． 2)= 99
由表 6 ～ 7 可看出，双氧水脱色的影响因素大小顺序为:B ＞
D ＞ C ＞ A，其中 B因素各水平之间有显著性差异。确定最佳脱色
条件为 A3B2C2D1，由于因素 C脱色时间没有显著性差异，为缩短
时间，提高效率，脱色时间调整为 4 h。故最佳脱色条件为在
60℃下，调节 pH至 9． 0，加入双氧水量 30%，反应 4 h。
3． 3 验证实验 称取 3 份鱼腥草多糖，每份 2 g 按正交实验所得
出脱色的最佳条件进行，测定脱色率及多糖含量分别为96． 56%，
19． 28%。结果表明实验所确定的工艺为最佳工艺条件。
4 讨论
多糖提取物的脱色方法有活性炭法、双氧水法和树脂脱色
法。活性炭脱色产品颜色较重，且脱色后溶液中的活性炭残渣难
于完全除去;树脂脱色效果最好，脱色工艺简单，但树脂价格较
高，一次性投资较大，且需再生使用，生产周期较长，适合少量样
品的脱色，不适合工业化大生产;双氧水脱色操作简便，脱色效果
较好，产品颜色较浅，但对多糖具有较强的氧化作用，在使用时一
定要控制好条件。
参考文献:
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