全 文 ：通讯作者:张秀桥 Tel:(027)68890106 E-mail:qiaoxzh2000@ 163． com
野鸡尾体外止血活性部位的筛选研究
尚祥伟 方玉 黄静 答国政 明小芳 张秀桥 (湖北中医药大学 武汉 430065)
摘 要 目的:确定野鸡尾的体外止血活性部位，为阐明其止血活性物质基础提供实验依据。方法:以云南白药作为阳性药
物(5 mg·ml －1)，设空白对照(去离子水)组，采用试管法、凝血板法测定野鸡尾乙醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、
正丁醇萃取物及水提取物(5 mg·ml －1)对体外血浆复钙时间和凝血时间的影响，并以体外血浆复钙时间和凝血时间为筛选
指标对各部位止血效果进行评价。结果:与空白对照组比较，野鸡尾乙酸乙酯萃取物对缩短体外血浆复钙时间和凝血时间的
作用效果显著，且优于云南白药(P ＜ 0． 01);野鸡尾乙醇提取物可在一定程度上缩短体外血浆复钙时间和凝血时间(P ＜
0． 01);野鸡尾石油醚萃取物及正丁醇萃取物对缩短体外血浆复钙时间无明显作用(P ＞ 0． 05)，对体外凝血时间有缩短作用
(P ＜ 0． 01);野鸡尾水提取物在缩短体外血浆复钙时间和凝血时间方面效果均不显著(P ＞ 0． 05)。结论:野鸡尾乙酸乙酯萃
取物具有较好的止血作用，为主要体外止血活性部位。
关键词 野鸡尾;止血;活性部位;凝血时间;血浆复钙时间
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2016)12-2241-03
Screening of the Effective Fraction with Hemostatic Effect in vitro from Onychium Japonicum
Shang Xiangwei，Fang Yu，Huang Jing，Da Guozheng，Ming Xiaofang，Zhang Xiuqiao (Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan
430065，China)
ABSTＲACT Objective:To study the in vitro hemostatic effects of different extracts of Onychium japonicum． Methods:In the ex-
periment，there was a blank control group (deionized water)，positive drug Yunnan Baiyao group (5 mg·ml －1)and ethanol extract，
petroleum extract，acetic ether extract，n-butanol extract and water decoction of O． japonicun groups (5 mg·ml －1)． A test tube meth-
od and a plate method for blood coagulation were adopted to determine the plasma recalcification time and the coagulation time in vitro．
Ｒesults:Compared with blank group，acetic ether extract of O． Japonicun could significantly shortened the plasma recalcification time
and coagulation time in vitro，and better results than Yunnan Baiyao(P ＜ 0． 01)． Primary extracts of ethanol of O． japonicunwere short-
ened obviously(P ＜ 0． 01)． Petroleum extract and n-butanol extract of O． Japonicun couldn’t shortened the plasma recalcification time
in vitro(P ＞ 0． 05)，butcould significantly shortened coagulation time in vitro(P ＜ 0． 01)． Water decoction of O． Japonicun didn’t dem-
onstrated significantly effect on the plasma recalcification time as well as the coagulation time in vitro(P ＞ 0． 05)． Conclusion:The
acetic ether extract of O． japonicun has better hemostatic effect in vitro．
KEY WOＲDS Onychium japonicum;Hemostasis;Effective fraction;Coagulation time;Plasma recalcification time
野鸡尾为中国蕨科植物野雉尾金粉蕨 Onychi-
um japonicum (Thunb．)Kze． 的干燥全草，收载于
《湖北中草药志》、《湖北恩施药用植物志》等，为湖
北西部地区土家族民间常用止血药。其性凉，味苦，
具有清热解毒、凉血止血、退黄利湿的功效，常用于
治疗外伤出血、吐血、便血等出血症，还可用于解丹
毒、蕈类中毒、砷磷中毒等病症［1］。现代药理研究
表明本品具有抗炎镇痛、抗肿瘤、解痉、解毒等作
用［2 ～ 6］。但目前国内外文献中尚未见关于其止血作
用研究的报道。本研究制备了野鸡尾乙醇提取物、
石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物及水
提取物，并采用试管法、凝血板法，以体外血浆复钙
时间和凝血时间为指标，评价野鸡尾 5 种提取物体
外止血效果，筛选主要活性部位，为进一步研究其止
血作用的物质基础以及开发新的止血药物提供实验
依据。
1 材料与方法
1． 1 仪器
电子恒温水浴锅(上海宜昌仪器纱筛厂);
AL204 型电子分析天平(慈溪市天东衡器厂);800D
电动离心机(常州迈科诺仪器有限公司);ＲE-2000
型旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂);SHZ-D(III)
循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限公司)。
1． 2 动物
SPF级 SD大鼠，雄性，体质量 180 ～ 220 g，由湖
北省实验动物研究中心提供，合格证号:No．
42000600008781。
1． 3 试药
野鸡尾于 2014 年 6 月采自湖北省恩施自治州
来凤县，经湖北中医药大学张秀桥教授鉴定为中国
蕨科 植 物 野 雉 尾 金 粉 蕨 Onychium japonicum
(Thunb．)Kze．全草，自然风干，备用。标本存放于
1422
中国药师 2016 年第 19 卷第 12 期 China Pharmacist 2016，Vol． 19 No． 12
湖北中医药大学标本馆。
云南白药胶囊(云南白药集团股份有限公司，
批号:20150420);水为去离子水，其他试剂均为分析
纯。
1． 4 溶液的制备
1． 4． 1 供试品溶液 野鸡尾 10 g，粉碎，用 10 倍量
水煎煮 30 min，滤过，药渣再加 8 倍量水煎煮 20
min，滤过，合并两次滤液，减压浓缩，真空干燥
(60℃)，得其水提取物0． 5 g。
野鸡尾 50 g，粉碎，用 10 倍量 95%、75%乙醇分
别渗漉提取一次，合并渗漉液，减压浓缩，真空干燥
(60℃)，得乙醇提取物9． 7 g。取乙醇提取物5． 0 g，
加水混悬，依次用等体积石油醚、乙酸乙酯、正丁醇
萃取数次至无色，合并各萃取液，减压浓缩，真空干
燥(60℃)，分别得石油醚萃取物0． 6 g、乙酸乙酯萃
取物0． 5 g、正丁醇萃取物3． 3 g。
取野鸡尾水提取物、乙醇提取物、石油醚萃取
物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物，各0． 25 g，用去
离子水配制成浓度为 5 mg·ml －1的溶液，经一次性
进口滤器抽滤成色泽清亮的样品溶液，备用。
1． 4． 2 阳性对照溶液 称取云南白药胶囊内容物
0． 25 g，用去离子水配制成浓度为 5 mg·ml －1的溶
液，经一次性进口滤器抽滤成色泽清亮的样品溶液，
备用。
1． 4． 3 M /40 CaCl2溶液 取无水氯化钙1． 11 g，加
去离子水至 400 ml，混匀，即得。
1． 5 对体外血浆复钙时间的影响
试验分为 7 组，即空白对照组(去离子水)、阳
性对照组(云南白药，5 mg·ml －1)以及野鸡尾水提
取物组、野鸡尾乙醇提取物组、野鸡尾石油醚萃取物
组、野鸡尾乙酸乙酯萃取物组、野鸡尾正丁醇萃取物
组(5 mg·ml －1)5 个给药组。用采血管采集大鼠腹
主动脉血，按 9 ∶ 1 比例与3． 2%枸橼酸钠溶液轻轻
混匀，以 2 500 r·min －1离心 30 min，分离血浆备用。
取 0． 1 ml相应药物和 0． 1 ml M /40 CaCl2溶液加入
洁净玻璃试管中，摇匀，试管置于 37 ℃的水浴箱中，
再于各管内同时加入抗凝血浆 0． 1 ml，立即计时。
每隔 30 s 倾斜试管 1 次，在混合液中开始出现弥漫
的白色颗粒纤维蛋白丝时停止计时，记录所用时间
即为体外血浆复钙时间［7，8］。试验重复 6 次。
1． 6 对体外凝血时间的影响(凝血板法)
分组与药物质量浓度同“1． 5”项下。用采血管
采集大鼠腹主动脉血，按 9 ∶ 1 比例与3． 2%枸橼酸
钠溶液轻轻混匀，得抗凝血液备用。取0． 1 ml相应
药物和0． 1 ml M /40 CaCl2溶液加入一次性凝血板的
凹坑内，用大头针将药物与 M/40 CaCl2溶液混匀，
再于各凹坑内同时加入抗凝血液0． 5 ml，立即计时，
迅速用大头针搅拌混匀且搅拌次数一致。每隔 30 s
用大头针穿过血液轻挑 1 次，观察血液是否完全凝
固。从加入抗凝血液到血液完全凝固，记录所用时
间即为体外凝血时间［9，10］。试验重复 6 次。
1． 7 对体外凝血时间的影响(试管法)
分组与药物质量浓度同“1． 5”项下。取洁净玻
璃试管，加入 M/40 CaCl2溶液0． 1 ml，摇匀，试管置
于 37 ℃的水浴箱中，再于各管内同时加入抗凝血液
0． 5 ml，轻摇、混匀，立即计时。每隔 30 s 轻轻倾斜
试管 1 次，观察有无凝血。从加入抗凝血液到倾斜
试管血块凝固于管底不流动，记录所用时间即为体
外凝血时间［11］。试验重复 6 次。
1． 8 统计学方法
数据结果通过 SPSS12． 0 统计软件分析。数据
均以 珋x ± s表示，Levene’s test检验方差齐性，两组间
比较用 t检验，多组间比较采用 One-Way ANOVA分
析 LSD。检验水准 α = 0． 05，应用 OriginPro 7． 5 统
计软件进行绘图。
2 结果
2． 1 野鸡尾各提取物对体外血浆复钙时间的影响
与空白对照组比较，野鸡尾石油醚萃取物组、正
丁醇萃取物组、水提取物组对体外血浆复钙时间无明
显影响(P ＞ 0． 05)，阳性对照组、野鸡尾乙醇提取物
组及乙酸乙酯萃取物组的体外血浆复钙时间显著缩
短(P ＜0． 01)，并且野鸡尾乙醇提取物组及乙酸乙酯
萃取物组的体外血浆复钙时间均小于阳性对照组，其
作用效果较阳性药更为显著(P ＜0． 01)。见表 1。
表 1 野鸡尾各提取物对体外血浆复钙时间
的影响(珋x ± s，n =6)
组别
质量浓度
(mg·ml －1)
血浆复钙时间
(min)
空白对照组 － 1． 32 ± 0． 08
阳性对照组 5． 0 1． 16 ± 0． 05a
野鸡尾乙醇提取物组 5． 0 1． 14 ± 0． 08ab
野鸡尾石油醚萃取物组 5． 0 1． 31 ± 0． 02
野鸡尾乙酸乙酯萃取物组 5． 0 1． 07 ± 0． 05ab
野鸡尾正丁醇萃取物组 5． 0 1． 37 ± 0． 14
野鸡尾水提取物组 5． 0 1． 54 ± 0． 22
注:与空白对照组比较，aP ＜ 0． 01;与阳性对照组比较，bP ＜ 0． 01。
2． 2 凝血板法测定对体外凝血时间的影响
与空白对照组比较，阳性对照组、野鸡尾乙醇提
取物组、石油醚萃取物组、乙酸乙酯萃取物组及正丁
醇萃取物组均可显著缩短体外凝血时间(P ＜ 0． 01)，
而野鸡尾水提取物组对体外凝血时间无明显影响(P
2422
www． zgys． org 研究论文
＞0． 05)。与阳性对照组比较，野鸡尾乙酸乙酯萃取
物组和正丁醇萃取物组对体外凝血时间缩短更明显
(P ＜0． 01)，其余各组的体外凝血时间差异均无统计
学意义(P ＞0． 05)。试验结果见表 2。
2． 3 试管法测定对体外凝血时间的影响
与空白对照组比较，阳性对照组及野鸡尾各提取
物组的体外凝血时间有明显的缩短(P ＜ 0． 01)。与
阳性对照组比较，仅野鸡尾乙酸乙酯萃取物组的体外
凝血时间缩短更明显(P ＜ 0． 01)，其余各组对体外凝
血时间差异无统计学意义(P ＞0． 05)。见表 2。
表 2 野鸡尾各提取物对体外凝血时间的影响
(珋x ± s，n =6)
组别
质量浓度
(mg·ml －1)
凝血时间(min)
凝血板法 试管法
空白对照组 － 8． 20 ±0． 27 2． 84 ±0． 04
阳性对照组 5． 0 6． 31 ±0． 14a 2． 40 ±0． 24a
野鸡尾乙醇提取物组 5． 0 6． 07 ±0，17a 2． 53 ±0． 22a
野鸡尾石油醚萃取物组 5． 0 6． 00 ±0． 17a 2． 42 ±0． 21a
野鸡尾乙酸乙酯萃取物组 5． 0 5． 88 ±0． 19ab 2． 16 ±0． 46ab
野鸡尾正丁醇萃取物组 5． 0 5． 85 ±0． 35ab 2． 29 ±0． 23a
野鸡尾水提取物组 5． 0 8． 27 ±0． 42 2． 49 ±0． 17a
注:与空白对照组比较，aP ＜ 0． 01;与阳性对照组比较，bP ＜ 0． 01。
3 讨论
本研究采用溶剂法对野鸡尾进行提取、分离，得
到不同极性提取物，并对各提取物的体外凝血作用
进行探讨。研究结果提示，野鸡尾乙酸乙酯萃取物
可显著缩短体外血浆复钙时间和凝血时间，其效果
优于云南白药(P ＜ 0． 01);野鸡尾乙醇提取物可明
显缩短血浆复钙时间和凝血时间;野鸡尾石油醚萃
取物和正丁醇萃取物对体外血浆复钙时间无显著影
响(P ＞ 0． 05)，但可缩短体外凝血时间。结果表明，
野鸡尾 5 种提取物中，乙酸乙酯萃取物体外止血效
果最好，乙醇提取物、石油醚萃取物及正丁醇萃取物
均有一定的止血效果，水提取物止血效果不明显。
传统中医认为，止血中药根据中药药性可分为
凉血止血、收敛止血、化瘀止血、温经止血 4 类。据
文献报道，凉血止血中药止血部位的有效成分主要
有黄酮类、醌类、鞣质类、酚类、有机酸盐等［12］。李
明潺［2，3］研究野鸡尾化学成分时，从野鸡尾乙酸乙
酯提取部位分离得到黄酮类、原儿茶酸、咖啡酸等成
分，其中原儿茶酸、咖啡酸为凉血止血药小蓟的止血
活性成分［13］。本研究发现乙酸乙酯萃取物的凝血
效果最佳，为野鸡尾止血作用的主要活性部位。因
此推断野鸡尾乙酸乙酯部位可能含有原儿茶酸、咖
啡酸等成分，止血作用可能与小蓟相似，是通过局部
血管收缩，抑制纤溶而发挥作用。
凝血途径分为内源性凝血途径、外源性凝血途
径和共同凝血途径。血管收缩性能、血小板活性、血
液的黏稠度、凝血因子及纤维蛋白等因素均能影响
止血过程。凝血时间［14］是指血液离开血管后在体
外发生凝固的时间，是一种测定内源性凝血途径的
研究方法。血浆复钙时间［15］是在有脱钙抗凝剂枸
橼酸钠的血液中，再加入钙离子，使其重新恢复凝血
作用。本研究是以上述 2 个指标作为考察对象，初
步研究了野鸡尾体外止血活性部位，后续实验可以
结合血浆凝血酶原时间 PT(检测机体外源性凝血系
统)、活化部分凝血活酶时间 APTT(检测机体内源
性凝血系统)、凝血酶时间 TT(提供纤维蛋白原功能
的信息)和凝血酶时间 FIB(检测共同凝血途径)来
进一步探讨其止血机制。
参 考 文 献
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中国药师 2016 年第 19 卷第 12 期 China Pharmacist 2016，Vol． 19 No． 12