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珠子参有效止血部位探究及其对内源途径凝血因子的作用



全 文 :现代预防医学 2011 年第 38 卷第 20 期 Modern Preventive Medicine, 2011, Vol.38, NO.20
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文章编号: 1003-8507(2011)20-4235-03 中图分类号: R973 + .2 文献标识码: A 【实验技术及其应用】
珠子参有效止血部位探究及其对内源途径凝血因子的
作用
杨扬, 余汶静, 光梦凯, 郝泽良, 朱彦
摘要: [ 目的 ] 研究珠子参的止血有效部位及其对内源性途径凝血因子的作用。 [ 方法 ] 分别将珠子参正丁醇、
水和乙酸乙酯提取物与抗凝兔血混合, 测定其凝血时间。 在此基础上用凝血功能的检验方法对各项指标进行测定。 [ 结
果 ] 水提取物组与正丁醇提取物组和乙酸乙酯组比较, 凝血时间最短, 且差异有统计学意义 (P﹤0.01), 且凝血时间随
浓度增高而逐渐缩短, 具有较好相关性。 TT、 FIB、 PT 组与空白组间差异无统计学意义 (P﹥0.05)。 APTT 组第 2 组~第
8 组 APTT 为 (18.3 ± 0.6) ~ (15.1 ± 0.5) s, 显著短于空白组凝血时间 (26.4 ± 1.3) s (P﹤0.05), 其中以第 8 组的珠
子参提取物浓度为 5%的试管的平均凝血时间最短。 [ 结论 ] 珠子参水提取物具有较强的促凝血作用, 其机理可能与
增强内源途径凝血因子的活性有关, 具有较大的开发利用价值。
关键词: 珠子参; 止血作用; 活化部分凝血酶时间; 凝血酶时间
STUDY ON THE MECHANISM OF PROMOTING BLOOD COAGULATION BY USING WATER
EXTRACT OF PANAX PSEUDOGINSENG VAR. JAPONICAS YANG Yang, YU Wen-jing, YU
Wen-jing, et al. (West China School of Stomatology, Sichuan University, Chengdu 610041, China)
Abstract: [Objective] To investigate the hemostatically effective part of Panax pseudoginseng var japonicus and its ef-
fects on intrinsic coagulation factors. [Methods] The n-butyl alcohol extract, the water extract and the ethyl acetate extract of
Panax pseudoginseng var japonicus were mixed, respectively, with anticoagulatant rabbit blood, and the blood clotting time
was measured to determine blood-clotting parameters. [Results] Compared with the n-butyl alcohol extract group and the ethyl
acetate group, the water extract had the shortest clotting time, and the difference was statistically significant (P﹤0.01). And
the time became gradually shorter with the increasing concentrations of the water extract, with the difference of the clotting time
being fairly well correlated with that of the concentrations. The difference of the clotting time between the TT, FIB, and PT
groups and the control group was not significant (P﹥0.05). Of the eight groups designed for APTT measurement, seven groups
(from the second to the eighth) had the APTT of (18.3±0.6) - (15.1±0.5) seconds, which was obviously shorter than that of
the control group, i.e. (26.4±1.3) seconds (P﹤0.05), and the test tube with the water extract of a concentration of 5% of the
eighth group had the shortest average clotting time. [Conclusion] The water extract of Panax pseudoginseng var japonicus is
quite effective in promoting blood coagulation probably through increasing the activity of intrinsic coagulation factors, and thus
medicinally this plant is of a high potential for exploitation and utilization.
Key words: Panax pseudoginseng var japonicus; Blood coagulation; APTT
珠子参 (Panax pseudoginseng var.japonicus) 是五加科人
参属植物, 因其根茎呈珠子状而得名。 珠子参主要产地为陕
西、 四川、 湖北和云南。 该植物具有较高的药用价值, 具有舒
筋、 补血、 止血之功效, 用于气血两虚、 烦热口渴及咳血、 吐
血、 外伤出血等 [1~3]。 在以往学者的研究中, 已经分离出了珠
子参中的大量化学成分, 其有效活性成分可能为皂苷类成分,
但有关珠子参对凝血作用的研究还很少 [4]。 本组分别将珠子参
正丁醇、 水和乙酸乙酯提取物与抗凝兔血混合, 测定其凝血时
间。 在此基础上用凝血功能的检验方法对各项指标进行测定。
期望为珠子参促凝血作用的进一步研究提供依据。
作者简介: 杨扬 (1988-), 男, 本科, 研究方向: 口腔医学
作者单位: 四川大学华西口腔医学院, 成都, 610041
1 材料与方法
1.1 实验材料与仪器
1.1.1 动物 新西兰大耳白家兔, 雌性, 2.5~3.0 kg。 四川大
学基础医学实验教学中心提供 (许可证号 scxk (川 ) -10-
2006)。
1.1.2 药物 珠子参, 由中国科学院昆明植物研究所提供。 云
南白药 (云南白药集团股份有限公司, 批号 20081208)
1.1.3 仪器 实验用旋转蒸发仪为德国产海盗夫 Hei-VAP
Value G3 旋转蒸发仪 (产地: 德国)。 测定凝血指标仪器由四
川大学华西医院提供。
1.2 方法
1.2.1 提取物制备 与中国科学院昆明植物研究所植物化学国
家重点实验室室合作, 进行提取、 纯化、 分离和鉴定工作, 获
得珠子参水溶性提取物。 对珠子参样品进行了提取和划分部
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位, 分别得到正丁醇萃提取物、 水溶性提取物和乙酸乙酯提取物。
1.2.2 止血有效部位筛选 采用凝血板法测定凝血时间, 50
支试管 (每个试管中已加入 4%的枸橼酸钠 0.25 ml), 分为 5
组, 在每个试管中加入新鲜的兔静脉血 2 ml, 充分振荡。 分别
加入正丁醇提取物 2.5、 5.0、 10.0 g / kg, 云南白药 0.8 g / kg 和
等容量生理盐水。 水提取物、 乙酸乙酯提取物方法同上。 凝血
计时开始以后, 每间隔 30 s 用大头针穿过血液轻挑 1 次, 当
出现血丝时为开始凝血。 从加入抗凝血液到出现凝血丝的时间
为凝血时间。 重复实验 3 次, 取其平均值。
1.2.3 水提取物对凝集参数的影响 实验分 9 组, 即 8 个不同
浓度实验组与 1 个空白对照组, 每组 10 个平行管。 实验用试
管为临床专用试管 (每个试管中已加入 4%的枸橼酸钠 0.25
ml)。 在每个试管中加入新鲜的兔静脉血 2 ml, 充分振荡。 向
空白对照组中加入 0.2 ml 去离子水, 然后向 8 个实验组中分别
加入浓度为 0.0391%、 0.0781%、 0.1563%、 0.3125%、 0.625%、
1.25%、 2.5%、 5%的水提取物溶液, 轻轻颠倒摇匀后, 立即于
3 000 r /min 离心 15 min。 取血清用凝固法测定 PT (凝血酶原
时间)、 APTT (活化部分凝血活酶时间)、 TT (凝血酶时间)、
FIB (纤维蛋白原含量)。
1.2.4 统计分析 Excel 建立数据库, 采用 SPSS18.0 统计学软
件分析, 计量资料以均数±标准差 (x ± s) 表示, 采用 t 检验。
计数资料采用率表示, 进行 χ2检验。 P﹤0.05 为差异有统计学
意义。
2 结果
2.1 3 种提取物凝血时间比较
水提取物组凝血时间低浓度为 (169.26 ± 15.27) s, 中浓
度为 (146.22 ± 14.83) s, 高浓度为 (123.37 ± 11.68) s, 显
著优于空白对照组、 正丁醇提取物组和乙酸乙酯提取物, 且差
异具有统计学意义 (P﹤0.01), 凝血时间随浓度增高而逐渐缩
短, 具有较好的相关性, 所以水提取物可能为珠子参的主要凝
血部位。 数据见表 1~3。
2.2 水提取物凝血功能指标参数比较
水提取物凝血参数比较发现, TT、 FIB、 PT 组与空白组相
比较, 差异无统计学意义 (P﹥0.05)。 APTT 组第 2 组~第 8 组
APTT 为 (18.3 ± 0.6) ~ (15.1 ± 0.5) s, 比空白组 (26.4 ±
1.3) s 凝血时间短, 差异具有统计学意义 (P﹤0.05); 其中第
8 组的珠子参提取物浓度为 5%的试管的平均 APTT 最短, 数值
见表 4~6。
3 讨论
以往对珠子参的研究主要是对其化学成分的分析和数量以
及分布的调查, 但针对珠子参促凝血的作用和机理的研究还很
少。 血液凝固是一系列酶促过程, 最后使纤维蛋白原变为纤维
蛋白, 血液由溶胶状态转为凝胶状态, 凝血酶在凝血中也发挥
了重要的作用。 凝血常规测定是内源凝血系统和外源凝血系统
 5  s x ± s

 
          
                            
                 
  
                 

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 4  s x ± s

 
          
                       
                 
                 

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殊阶段, 在学习和生活中面临着来自家庭、 学校、 社会的多重
压力, 又加上现代的心理健康教育与心理咨询相对滞后, 学生
的心理负担超出了所承受的压力, 常会出现一些偏差。 调查结
果提示: 过去 12 个月不良情绪、 学习压力高、 有自杀倾向、
有自杀计划的发生率均较高, 尤其是占 17.75%的学生有自杀
倾向, 6.42%的学生有有自杀计划, 这些都是给家庭、 学校、
社会带来不安定的因素, 须引起各界人士和有关部门的重视。
男女生比较, “学习压力高”、 “有自杀倾向” 的发生率女生
高于男生 (P﹤0.01), 这可能与女生心理脆弱有关。
综上所述, 昆山市中学生伤害情况相当严重, 健康行为不
够, 心理素质不高, 生存环境不良, 以上数据对我们社会、 教
育部门、 家长提出新的要求: 为了下一代健康成长, 必须树立
健康第一理念, 及时制定保护青少年健康的决策及方案。
参考文献:
[ 1 ] 沙汝明. 昆山市 1984-2006 年学龄期人群死亡模式变化趋势研究
[J]. 现代预防医学, 2009, 36 (1): 59-61.
(收稿日期: 2010-04-15)
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较敏感和常用的筛选试验, 其中 APTT 反映了内源途径凝血因
子凝血因子 (Ⅷ、 Ⅸ、 Ⅺ) 的活性, TT 可以反映内源性凝血
过程第 3 期中纤维蛋白原的利用度, FIB 反映了提高纤维蛋白
原的含量。 PT 能反映外源性凝血系统的活性, 其长短与外源
途径凝血因子 (Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅴ、 Ⅶ、 Ⅹ) 的活性有关 [5,6]; 凝血
常规测定具有较高的准确性, 现已广泛应用于临床 [7], 但尚未
见应用于珠子参凝血机制研究的报道。
本实验首先对珠子参凝血有效部位进行了研究, 结果中的
数值表明水提取物组与正丁醇提取物组和乙酸乙酯组比较, 凝
血时间最短, 且差异有统计学意义 (P﹤0.01), 而水提取物组
随浓度增高凝血时间逐渐缩短, 具有较好的相关性, 因此水提
取物可能为珠子参的主要凝血部位。 在此研究的基础上, 利用
水提取物, 对加入不同浓度的珠子参水提取物的兔静脉血进行
了一系列凝血功能指标的测定。 运用凝血常规测定法测定珠子
参水提取物对兔血的凝血时间影响得出: APTT 组显著优于空
白组, 差异有统计学意义 (P﹤0.01), 而 TT、 FIB、 PT 组与空
白组相比较, 差异无统计学意义 (P﹥0.05)。 实验数据显示,
珠子参水提取物的浓度在 0.0781%以上时试管 APTT 均有缩短
(P﹤0.01), 得出最短 APTT 为浓度在 5%时 [(15.1 ± 0.8) s]。
说明其对内源途径凝血因子 (Ⅷ、 Ⅸ、 Ⅺ) 表现出明显的激活
作用, 达到促进凝血的作用。
珠子参中化学成分复杂, 主要为果酸类、 醇类和竹节参皂
苷、 人参皂苷等皂苷类成分 [4], 而正丁醇、 水和乙酸乙酯的提
取物均有一定的凝血作用, 表明珠子参中极性大的化合物和极
性小的化合物均有可能是增强内源性途径凝血因子活性的主要
活性成分, 其完整的有效活性成分和凝血机理有待进一步的研究。
参考文献:
[ 1 ] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 (一部)[M]. 北京: 中国
医药科技出版社, 2010. 254-255.
[ 2 ] 宋小妹, 李渊源, 宋蓓. 珠子参不同药用部位微量元素分析[J].
西北药学杂志, 2011, 2: 79-80.
[ 3 ] 赵毅, 赵仁, 宋亮, 等 . 珠子参药材品种概述及资源现状调查
[J]. 中国现代中药, 2011, 1: 11-17.
[ 4 ] 宋小妹, 刘越, 蔡宝昌. 珠子参的化学成分 [J]. 沈阳药科大学
学报, 2010, 8: 626-630.
[ 5 ] 殷开俊. 凝血功能常规检查异常结果分析 [J]. 中国误诊学杂志,
2009, 31: 15-17.
[ 6 ] Eikelboom JW, Weitz JI (2008) Selective factor Xa inhibition for
thromboprophylaxis [J]. Lancet, 372: 6-8.
[ 7 ] Moss AJ, Goldstein RE, Marder VJ, et al. Thrombogenic factors
and recurrent coronary events [J]. Circulaion, 1999, 99: 2517-
2522.
(收稿日期: 2011-04-28)
 6  s x ± s

 
          
                       
                   
                 

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