全 文 ：［收稿日期］ 20100915(001)
［基金项目］ 辽宁省教育厅创新团队基金项目(2009T006)
［第一作者］ 周成惠，在读硕士研究生，主要从事中药质量标准
与创 新 药 物 研 究，Tel:13942879894，E-mail:
zchzcx123@ 163. com
［通讯作者］ * 张慧，副教授，Tel:13998541994，E-mail:syyycs@
163. com
HPLC测定不同产地掌叶半夏中腺苷的含量
周成惠1，李春雪，张镓小，张慧1*
(辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600)
［摘要］ 目的:采用 HPLC 法建立掌叶半夏中腺苷的含量测定方法。方法:采用 KromasilODS-C18(4. 6 mm × 200 mm，5
μm)色谱柱，流动相为甲醇-水(15∶ 85)，流速 1 mL·min －1，柱温 25 ℃，检测波长 260 nm。方法:腺苷在 9. 84 ～ 78. 72 mg·L–1线
性关系良好(r = 0. 999 8)，平均加样回收率为 99. 01%，RSD 1. 94%(n = 6)。结果:6 个不同产地掌叶半夏中腺苷含量大小
为:山东菏泽 >河北安国 >陕西汉中 >河北保定 >安徽亳州 >湖南浏阳。结论:该方法操作简便，结果可靠，重复性好，可作为
掌叶半夏药材的质量控制方法之一。
［关键词］ 掌叶半夏;腺苷;高效液相色谱法
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)03-0077-03
Determination of Content of Adenosine in Pinellia pedatisecta from
Different Districts by HPLC
ZHOU Cheng-hui1，LI Chun-xue，ZHANG Jia-xiao，ZHANG Hui1*
(The Medicine Institute of Liao ning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China )
［Abstract］ Objective:To establish an HPLC method to determine the content of adenosine in Pinellia peda-
tisecta from different districts. Method:Experiment was carried out on Kromasil C18(4. 6 mm × 200 mm，5 μm)
column with mobile phase consisted of methanol-water (15 ∶ 85)at a flow rate of 1. 0 mL·min －1 . The detection
wavelength was at 260 nm and the column temperature was at 25 ℃ . Result:The linear range of adenosine was
9. 84-78. 72 mg·L －1(r = 0. 999 7). The average recovery was 99. 01%，RSD 1. 94% (n = 6). The adenosine con-
tent of P. pedatisecta from different districts ranged in order was as follows:Heze > Anguo > Hanzhong > Baoding >
Bozhou > Liuyang. Conclusion:The method is quick，simple and reproducible for the determination of adenosine in
P. pedatisecta.
［Key words］ Pinellia pedatisecta;adenosine;HPLC
中药掌叶半夏是天南星科半夏属植物掌叶半夏
Pinellia pedatisecta 的干燥块茎，又称虎掌南星、滇半
夏、虎掌，始载于《神农本草经》，具有燥湿化痰，祛
风止惊、理气宽胸、消痞散结的功能［1］。其单味药材
制成的栓剂在临床上广泛用于治疗宫颈癌，是目前
治疗宫颈癌的常用药物之一。目前研究表明掌叶半
夏中含有生物碱、氨基酸、挥发油、有机酸类、掌叶半
夏蛋白及无机元素等多种成分［2］。腺苷是生物碱类
成分，具有明显的药理作用。有文献报道腺苷可以
扩张冠状血管，防止心律失常，降血压、抗凝血和减
弱心肌收缩力的作用，是掌叶半夏治疗胸痹等证的
主要活性成分之一［3］。而《中国药典》［4］与地方标
准中尚未规定其质量控制的含量测定方法和指标。
为解决上述问题，控制药材的质量，本文经实验摸
索，采用 HPLC建立掌叶半夏中腺苷的含量测定方
法，同时对不同产地的掌叶半夏腺苷含量进行了比
较，为掌叶半夏的质量评价提供一定的理论依据。
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第 17 卷第 3 期
2011 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 3
Feb.，2011
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2011.03.031
1 材料
1. 1 仪器 安 捷 伦 LC-1100 液 相 色 谱 仪
(G21771AA-UV 检测器、安捷伦色谱工作站)，
KQ3200 超声波清洗器(江苏昆山)，AY220 电子分
析天平(SHTMADZU)，UV2100 紫外-可见分光光度
计(北京瑞利分析仪器公司)。
1. 2 试药 腺苷对照品 (中国药品生物制品检定
所，批号 110879-2200202 ) ;掌叶半夏分别采于各
个产地，由辽宁中医药大学中药鉴定教研室翟延君
教授鉴定为掌叶半夏 P. pedatisecta 的块茎;甲醇为
色谱纯 (天津市科密欧化学试剂开发中心)，蒸馏
水，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱为 Kromasil ODS-C18(4. 6
mm ×200 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(15∶ 85);检
测波长为 260 nm;柱温为 25 ℃;流速 1 mL·min －1;
理论塔板数按腺苷计算不低于 2500。
2. 2 检测波长的确定 取腺苷对照品适量，加
30%甲醇制成 20 mg·L －1对照品溶液，置紫外分光光
度计中，记录紫外吸收光谱，结果表明，腺苷在 260
nm波长处有最大吸收。
2. 3 腺苷对照品溶液的配制 精密称取腺苷对照
品 7. 91 mg，置 200 mL 量瓶中，加 30%甲醇适量使
其溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
2. 4 供试品溶液的配制 取掌叶半夏药材粉 2 g
(过 3 号筛)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入
30%甲醇 25 mL，精密称定质量，超声提取(200 ～
250 W，60 ～ 100 Hz)30 min，放冷，加 30%甲醇补足
减失的质量，滤过，即得。
2. 5 空白干扰试验 取空白溶剂，按“供试品溶液
的配制”方法操作，制得空白阴性溶液，精密量取空
白阴性溶液、供试品溶液、对照品溶液 20 μL，注入
液相色谱仪，结果显示，阴性空白无干扰。见图 1。
图 1 掌叶半夏高效液相色谱图
A.对照品;B.阴性样品;C.供试品;1. 腺苷
2. 6 耐用性试验 分别选用 Diamonsil，Phenome-
nex，Agilent C18(4. 6 mm ×200 mm，5 μm)柱，按上述
色谱条件，分别注入空白阴性溶液、供试品溶液、对
照品溶液各 20 μL，结果显示，不同品牌的色谱柱腺
苷的主峰均能达到基线分离，分离度良好，阴性空白
无干扰，3 个色谱柱测得的供试品的含量 RSD 为
1. 31%，符合规定。
2. 7 线性关系考察 精密称取腺苷对照品 4. 92
mg，置 50 mL 量瓶中，用 30%甲醇溶解并稀释至刻
度，精密量取上述溶液 1，2，4，6，8 mL至 10 mL量瓶
中，用 30%甲醇稀释至刻度。精密量取 20 μL，注入
液相色谱仪，以峰面积(A)对进样量(C)进行回
归，得标准曲线回归方程 A = 11. 205 C + 189. 94，相
关系数为 r = 0. 999 8(n = 5)。结果表明，腺苷含量
在 9. 84 ～ 78. 72 mg·L–1线性关系良好。
2. 8 中间精密度试验 取同一供试品 6 份，在同一
实验室，由 3 个不同的实验人员，采用日本岛津 LC-
10A、Agilent1100、大连依利特 P200II 3 种色谱仪，按
上述色谱条件，精密量取供试品溶液 20 μL，注入液
相色谱仪，测定峰面积，计算腺苷的含量，结果 RSD
1. 11%(n = 6)，表明方法的中间精密度良好。
2. 9 稳定性试验 取同一样品，按上述色谱条件，
分别在 0，2，4，6，8 h，精密量取供试品溶液 20
μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。结果腺苷在不
同测定时间内的峰面积基本不变，RSD 0. 64%，表明
样品溶液在 8 h 内是稳定的。
2. 10 重复性试验 取同一供试品精密称取 6 份，
按 2. 3 项下方法平行制备供试品溶液。精密量取供
试品溶液 20 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计
算含量。结果腺苷含量的均值为 0. 512 mg·g － 1，
RSD 1. 24%，重复性符合规定。
2. 11 准确度试验 分别称取 6 份已知含量的样品
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第 17 卷第 3 期
2011 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 3
Feb.，2011
约 1 g，各精密加入腺苷对照品溶液(0. 542 g·L －1)1
mL，按供试品溶液制备方法制备，测定腺苷含量，计
算回收率。结果测得回收率在 95% ～ 105%之间，
平均加样回收率为 99. 01%，RSD 1. 94%(n = 6)，见
表 1。
表 1 腺苷加样回收率试验
No.
称样量
/ g
样品中
量 /mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1 1. 056 0. 533 0. 542 1. 063 98. 89
2 1. 076 0. 559 0. 542 1. 089 102. 57
3 1. 043 0. 523 0. 542 1. 053 96. 85 99. 01 1. 94
4 1. 055 0. 537 0. 542 1. 067 98. 89
5 1. 052 0. 531 0. 542 1. 061 97. 97
6 1. 060 0. 538 0. 542 1. 068 98. 89
2. 12 样品含量测定 取山东菏泽产掌叶半夏 3
批，粉碎，按供试品溶液制备方法制备，分别精密注
入供试品溶液 20 μL，测定峰面积，计算腺苷含量，
结果见表 2。
表 2 3 批样品中腺苷的含量(n =2)
批号 腺苷含量 /mg·g － 1 RSD /%
01 0. 525 0. 53
02 0. 522 0. 68
03 0. 529 1. 74
2. 13 不同产地样品的测定 分别精密称取陕西汉
中、安徽亳州、河北保定、湖南浏阳、河北安国、山东
菏泽等地的掌叶半夏药材(粉碎，过 3 号筛)2. 0 g，
置具塞锥形瓶中，按供试品溶液制备方法制备，滤
过，照 2. 1 项下色谱条件，测定峰面积，计算腺苷含
量。结果见表 3。
表 3 不同产地样品中腺苷含量测定(n =2) mg·g － 1
产地 腺苷 产地 腺苷
陕西汉中 0. 183 河北保定 0. 181
安徽亳州 0. 172 湖南浏阳 0. 055
河北安国 0. 192 山东菏泽 0. 539
3 讨论
3. 1 流动相的选择 本实验比较了甲醇-水、乙腈-
水、甲醇-酸水系统对样品中腺苷分离度、峰对称性
的影响，结果显示，采用甲醇-水(15∶ 85)洗脱时腺苷
分离效果和峰对称性良好。
3. 2 提取方法的比较 本实验比较了超声、回流、
索氏提取等方法对掌叶半夏药材中腺苷提取率的影
响。结果，超声提取法既省时又方便，而且提取腺苷
含量完全。
3. 3 提取溶剂的选择 本实验对乙醇、甲醇、水等
提取溶剂进行了优选，结果显示，水提取得到的腺苷
含量最大，但因本品富含淀粉，样品溶液黏稠，测定
困难，为此进一步筛选了不同浓度的甲醇溶液，结果
30%甲醇提得的腺苷含量与水相当，故最终选择
30%甲醇溶液为提取溶剂。
3. 4 不同产地样品中腺苷含量分析 测定结果显
示，本品产地不同，药材中腺苷含量差别很大，其中
山东菏泽的掌叶半夏腺苷含量最高，湖南浏阳的掌
叶半夏腺苷含量最低，掌叶半夏是山东菏泽的道地
药材，本研究进一步证实了道地药材质量优于其他
产地的规律，对临床用药的采收具有指导意义。
［参考文献］
［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志［M］.
北京:科学出版社，1980:14.
［2］ 王瑞，温月笙，杨澜，等. 掌叶半夏化学成分的研究
［J］.中国中药杂志，1997，22(7):421.
［3］ 毛艳，杨伟俊，贺金华，等. RP-HPLC 法测定维感泡腾
片中腺苷的含量［J］. 中国实验方剂学杂志，2010，16
(2):25.
［4］ 中国药典. 一部［S］. 2010.
［责任编辑 顾雪竹］
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周成惠，等:HPLC测定不同产地掌叶半夏中腺苷的含量