全 文 ：·食用菌· 北方园艺２０１６（０２）：１３４～１３８
第一作者简介：黄万兵（１９８８－），男，湖北荆州人，硕士，研究实习
员，研究方向为应用微生物。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｕａｎｇｗｂ１０１２＠ｑｑ．ｃｏｍ．
责任作者：朱国胜（１９７１－），男，博士，研究员，硕士生导师，现主要
从事中药材及食药用真菌等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｇｓａｈ＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：贵州省优秀青年科技人才培养对象专项资金资助项目
（黔科合人字（２０１１）３５号）；贵州省科技计划资助项目（黔科合院
所创能（２０１０）４００２）；中央补助地方科技基础条件专项基金资助项
目（黔科条中补地（２０１０）４００２）；贵州省中药现代化科技产业研究
开发专项资助项目（黔科合中药字［２０１１］５０３５号）；贵州省农业科
学院研究生创新基金资助项目（黔农科合（创新基金）２０１１０１６
号）；贵州省农业科学院专项资金资助项目（黔农科院院专项
［２０１２］０２０号，黔农科院院专项［２０１４］０３５号）；贵州省农业科学院
博士科研启动资助项目（黔农科院人才启动项目［２００９］００６号）。
收稿日期：２０１５－０９－２４
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６０２０３５
七株贵州蜜环菌胞内多糖得率及胞外酶活性研究
黄 万 兵１，２，桂 　 阳１，２，龚 光 禄１，２，杨 通 静１，２，刘 朝 贵３，朱 国 胜１，２
（１．贵州省现代中药材研究所，贵州 贵阳５５０００６；２．贵州省农业生物技术重点实验室，贵州 贵阳５５０００６；
３．西南大学 园艺园林学院，重庆４００７１６）
　　摘　要：以７株贵州蜜环菌为试材，采用苯酚－硫酸法测定多糖得率、ＤＮＳ法测定蜜环菌发酵液
中木聚糖酶和羧甲基纤维素酶的活性、丁香醛连氮测定发酵液中漆酶活性，研究了不同蜜环菌在发
酵过程中漆酶等胞外酶活性变化规律及菌丝胞内多糖提取率。结果表明：各菌株间多糖得率存在显
著差异；各菌株胞外酶活性变化趋势均是先升后降；各酶在不同菌株间达到最大酶活的时间、最大酶
活性值存在明显差异；优良菌株ＤＪ１第４天就能结束发酵，达到最大酶活时间最短、持续时间长。蜜
环菌液体发酵时最早分泌的是ＣＭＣ酶、漆酶，然后是木聚糖酶，但起主要作用的是木聚糖酶。
关键词：蜜环菌；木聚糖酶；羧甲基纤维素酶（ＣＭＣ酶）；漆酶；胞内多糖
中图分类号：Ｓ　６４６．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１６）０２－０１３４－０５
　　蜜环菌（Ａｒｍｉｌａｒｉｌａ）属担子菌门、伞菌纲、膨瑚菌
科、蜜环菌属，目前全球共有生物种约３０种，中国约１５
种［１－２］。作为天麻的主要营养源，蜜环菌是促进天麻生
长发育的重要共生真菌，同时自身又是重要的药食用
真菌［３］。
　　蜜环菌多糖从其子实体、菌丝体、发酵液中被提取
出来，它是蜜环菌的主要活性成分，主要包括胞内多糖
和胞外多糖。蜜环菌多糖药理作用广，具有抗辐射、抗
眩晕症、促进造血、抑制肿瘤生长、调节免疫等药理作
用［４－５］。蜜环菌的生长与胞外酶活性有着密切关系。蜜
环菌为木腐菌，木材中９０％的主要成分为半纤维素、纤
维素、木质素，其分泌的胞外酶可降解半纤维素、纤维
素、木质素等来满足自身生长繁殖所需的营养［６－７］。该
试验以７株贵州蜜环菌为试材，研究了不同生物种的蜜
环菌菌丝体胞内多糖得率，拟为研究贵州本土蜜环菌的
多糖药用价值研究打下基础；同时研究了贵州蜜环菌发
酵液中漆酶等胞外酶活性变化规律，探索了液体发酵中
胞外酶与蜜环菌生长势的关系。
１　材料与方法
１．１　试验材料
１．１．１　菌株　供试蜜环菌菌株由贵州省现代中药材研
究所重点实验室分离保存，详细信息见表１。
１．１．２　主要试剂与仪器　木聚糖（Ａｌａｄｄｉｎ）；丁香醛连

　　
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｐｅａｃｈ　ａｎｄ　ｆｌａｔ　ｐｅａｃｈ，ｔｗｏ　ｃｕｌｔｉｖａｒｓ　ｏｆ‘Ｍｅｉｘｉａｎｇ’ａｎｄ‘Ｇａｌａｘｙ’
ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｆｒｕｉｔ　ｃｏｌｏｒ，ｆｌｅｓｈ　ｆｉｒｍｎｅｓｓ，ｓｏｌｕｂｌｅ　ｓｕｇａｒ　ａｎｄ　ｏｒｇａｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｌｏｒ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　２ｃｕｌｔｉｖａｒｓ　ｈａｄ　ｂｉｇ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｄｕｒｉｎｇ　ｌｏｗ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｓｔｏｒａｇｅ，ｔｈｅ　ｐｅｒｉｃａｒｐ　ｃｏｌｏｒ　ｏｆ　ｔｈｅ‘Ｇａｌａｘｙ’
ｂｅｃａｍｅ　ｄａｒｋｅｒ．Ｔｈｅ　ｆｒｕｉｔ　ｆｉｒｍｎｅｓｓ　ｏｆ　２ｃｕｌｔｉｖａｒｓ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｔｈｅ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ｓｕｇａｒ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｖａｒｉｅｄ　ｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄｌｙ
ａｍｏｎｇ　ｔｈｅｍ，ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ｓｕｇａｒ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｌｉｔｔｌｅ　ｃｈａｎｇｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｕｃｒｏｓｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｔｈｅ
ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｏｒｇａｎｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｏｆ‘Ｍｅｉｘｉａｎｇ’ａｎｄ‘Ｇａｌａｘｙ’ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ｓｔａｇｅ　ｔｈｅｎ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ
ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｌａｔｅ　ｓｔａｇｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｅａｃｈ；ｆｌａｔ　ｐｅａｃｈ；ｆｒｕｉｔ　ｑｕａｌｉｔｙ；ｌｏｗ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｓｔｏｒａｇｅ
４３１
北方园艺２０１６（０２）：１３４～１３８ ·食用菌·
　　表１ 蜜环菌参试菌株
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｔｈｅ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　７　Ａｒｍｉｌｌａｒｉａｓｔｒｉａｎｓ
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
种名
Ｓｐｅｃｉｅｓ　ｎａｍｅ
ＧｅｎＢａｎｋ编号
ＧｅｎＢａｎｋ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ＮＯ．
采集点
Ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ　ｓｉｔｅ
分离来源
Ｓｏｕｒｃｅ
ＨＺ２　 Ａｒｍｉｌｌａｒｉａ　ｃｅｐｉｓｔｉｐｅｓ　 ＪＮ６５７４４９ 赫章县Ｈｅｚｈａｎｇ 菌索Ｒｈｉｚｏｍｏｒｐｈ
ＳＢ４　 Ａｒｍｉｌｌａｒｉａ　ｃｅｐｉｓｔｉｐｅｓ　 ＪＮ６５７４４９ 施秉县Ｓｈｉｂｉｎｇ 菌索Ｒｈｉｚｏｍｏｒｐｈ
ＤＪ１　 Ａｒｍｉｌｌａｒｉａ　ｇａｌｌｉｃａ　 ＡＪ２５００５４ 德江县Ｄｅｊｉａｎｇ 菌索Ｒｈｉｚｏｍｏｒｐｈ
ＬＳ３　 Ａｒｍｉｌｌａｒｉａ　ｇａｌｌｉｃａ　 ＡＪ２５００５４ 雷山县Ｌｅｉｓｈａｎ 子实体Ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ
ＫＹ４　 Ａｒｍｉｌｌａｒｉａ　ｍｅｌｌｅａ　 ＡＢ５１０８８０ 开阳县Ｋａｉｙａｎｇ 子实体Ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ
ＫＹ５　 Ａｒｍｉｌｌａｒｉａ　ｍｅｌｌｅａ　 ＡＢ５１０８８０ 开阳县Ｋａｉｙａｎｇ 子实体Ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ
ＳＹ１　 Ａｒｍｉｌｌａｒｉａ　ｍｅｌｌｅａ　 ＡＢ５１０８８０ 绥阳县Ｓｕｉｙａｎｇ 菌索Ｒｈｉｚｏｍｏｒｐｈ
氮（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）；羧甲基纤维素钠（科龙化工）；木糖
（北京鼎国）；ＤＮＳ试剂；培养箱（天津泰斯特）；无菌匀质
器（ＳＣＩＥＮＴＺ）；恒温摇床（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ　Ｍａｘ　４８４Ｐ）；恒温
水浴锅ＸＭＴＤ－２０４（上海梅香仪器有限公司）；超声波细胞
粉碎仪（ＳＣＩＥＮＴＺ?ⅡＤ）；离心机（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ　Ｆｒｅｓｃｏ２１）；
紫外分光光度计（尤尼科４８０２）。该试验使用的试剂均
为分析纯。
１．１．３　培养基　固体培养基成分为蛋白胨２ｇ，硫酸镁
０．５ｇ，葡萄糖２０ｇ，琼脂７ｇ，ＫＨ２ＰＯ４０．４６ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４１ｇ，
水１　０００ｍＬ；液体培养基成分为葡萄糖４６ｇ，无水乙醇
２４ｇ，酵母膏５ｇ，蛋白胨１３ｇ，硫酸镁２ｇ，磷酸二氢钾１ｇ，
维生素Ｂ１０．０１ｇ，维生素Ｂ２０．０３ｇ，水１　０００ｍＬ［８］。其
中维生素是在培养基灭菌后（１２１℃、３０ｍｉｎ）冷却至４０～
５０℃时加入。
１．２　试验方法
１．２．１　标准曲线的制备　以不同浓度的葡萄糖溶液与
苯酚－硫酸反应，在４９０ｎｍ处测ＯＤ值、制作葡萄糖标准
曲线［９］。以不同浓度的木糖溶液、葡萄糖溶液与ＤＮＳ试
剂反应，在５３０ｎｍ处测ＯＤ值、制作木糖、葡萄糖标准曲
线［１０－１１］。
１．２．２　液体菌种的制备　将各蜜环菌母种接入含固体
培养基的平皿中，２２℃暗培养１５ｄ后，切取０．５ｃｍ长的
菌索尖端３块转接入含有１５０ｍＬ液体培养基的容积为
２５０ｍＬ的三角瓶。然后１８０ｒ／ｍｉｎ、２２℃暗培养至菌丝
球长满三角瓶（约１５ｄ）即为一级液体菌种［１２］。取一级
液体菌种一瓶于无菌匀质器中，每秒９次拍击，匀浆８ｍｉｎ
后吸取３ｍＬ转接入含有１５０ｍＬ液体培养基的容积为
２５０ｍＬ的三角瓶。然后１８０ｒ／ｍｉｎ、２２℃暗培养至菌丝
球长满三角瓶（约７ｄ）即为二级液体菌种。
１．２．３　菌丝体胞内多糖的提取与测定　抽滤一级液体
菌种，并５０℃烘干至恒重，称取各蜜环菌菌丝干粉１ｇ放
入５０ｍＬ离心管中，加３０ｍＬ蒸馏水混匀，超声破碎
（３００Ｈｚ，３５ｍｉｎ），３　０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，取上清液。
用８０％乙醇沉淀，去上清液，沉淀即为粗多糖［１３］。在每
支试管中加蒸馏水至２ｍＬ，然后加入１．０ｍＬ　５％苯酚
溶液，５．０ｍＬ浓硫酸，摇匀，置沸水中煮沸３０ｍｉｎ，冷却。
在４９０ｎｍ波长下用测其ＯＤ值，每组设置３次重复。
１．２．４　粗酶液的制备　在二级液体菌种摇瓶培养过程
中，每天吸取２ｍＬ发酵液作为粗酶液。
１．２．５　木聚糖酶活性测定　往具塞刻度试管中加入
１％的木聚糖溶液（用ｐＨ　４．８，０．０５ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸盐缓冲
液配制）１．５ｍＬ，加稀释５倍的粗酶液１ｍＬ混匀，５０℃
超级水浴准确保温３０ｍｉｎ，取出后立即加入ＤＮＳ试剂
１．５ｍＬ，具塞摇匀立即煮沸１０ｍｉｎ，取出，冷却后加入蒸
馏水补足２５ｍＬ，轻轻上下摇匀，用４８０２型分光光度计
测５３０ｎｍ处的ＯＤ值。以煮沸灭活的酶液为对照，每组
３次重复［１４］。
１．２．６　ＣＭＣ酶活性测定　往具塞刻度试管中加入
０．５％的羧甲基纤维素钠溶液（用ｐＨ　４．６，０．１ｍｏｌ／Ｌ醋
酸盐缓冲液配制）１．５ｍＬ，加稀释５倍的粗酶液０．５ｍＬ
混匀，５０℃超级水浴准确保温３０ｍｉｎ，取出后立即加入
ＤＮＳ试剂１．５ｍＬ，具塞摇匀立即煮沸１０ｍｉｎ，取出，冷
却后加入蒸馏水补足２０ｍＬ，轻轻上下摇匀，用４８０２型
分光光度计测５３０ｎｍ处的ＯＤ值。以煮沸灭活的酶液
为对照，每组３次重复［１５－１６］。
１．２．７　漆酶活性测定　取０．５ｍｍｏｌ／Ｌ丁香醛连氮
１００μＬ放入２ｍＬ离心管，加入酶液５０μＬ和１．５ｍＬ
ｐＨ　６．０磷酸盐缓冲液混匀，２５℃恒温水浴５ｍｉｎ后立即
冰浴终止反应，用４８０２型分光光度计测５２５ｎｍ处的
ＯＤ值。以煮沸灭活的酶液为对照，每组３次重复［１７］。
１．２．８　酶活性计算　在特定条件下，１ｍｉｎ内转化１μｍｏｌ
底物，或是转化底物中１μｍｏｌ相关基团所需的酶量，称
为一个国际单位（Ｕ）。酶活性以ｘ表示，单位为Ｕ／Ｌ。
木聚糖酶、ＣＭＣ酶活性按式（１）计算，漆酶活性按式（２）
计算［１８］：
ｘ＝ ｍＭ×Ｖ酶 ×ｔ×
ｎ （１），
ｘ＝１０
６
ε ×
Ｖ总
Ｖ酶 ×
ＯＤ
ｔ
（２）。
式（１）、（２）中：ｍ是根据标准曲线方程计算测得ＯＤ值对
应的葡糖糖或木糖的质量，单位为μｇ；Ｍ是葡萄糖或木
糖的摩尔质量；Ｖ酶 是反映添加的酶液体积，单位是Ｌ；
Ｖ总为反应总体积，单位是Ｌ；ｔ是酶反应时间，单位为
ｍｉｎ；ｎ为酶液稀释倍数；ε是丁香醛连氮的摩尔消光系
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·食用菌· 北方园艺２０１６（０２）：１３４～１３８
数，６５　０００Ｌ·ｍｏｌ－１·ｃｍ－１；ＯＤ为漆酶吸光度。
１．３　数据分析
试验数据采用Ｅｘｃｅｌ　２００７进行整理和计算，用软件
ＳＰＳＳ　１７．０进行显著性差异分析。
２　结果与分析
２．１　标准曲线
苯酚 －硫酸法测定的葡萄糖标准曲线为ｙ＝
０．０１５　１ｘ＋０．００２　８，Ｒ２＝０．９９９　７（葡萄糖浓度μｇ／ｍＬ）。
ＤＮＳ法测定的葡萄糖标准曲线为ｙ＝０．００４　７ｘ＋０．００９　３，
Ｒ２＝０．９９９　７（葡萄糖浓度μｇ／ｍＬ）。ＤＮＳ法测定的木糖
标准曲线为ｙ＝０．００１　２ｘ＋０．００３　４，Ｒ２＝０．９９９　６（木糖
浓度μｇ／ｍＬ）。
２．２　多糖得率
由表２可知，各菌株的多糖提取中，菌株ＫＹ５的多
糖提取率明显高于其它菌株，ＫＹ４次之。由于试验设置
重复３组，所得数据满足正态分布及方差齐性，可进行
方差分析。除ＤＪ１与ＳＹ１，ＳＹ１与ＨＺ２、ＬＳ３的多糖提取
率之间没有显著差异，其它菌株两两之间均有显著
差异。
表２ 菌株的多糖提取
　　Ｔａｂｌｅ　２ Ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｒｍｉｌｌａｒｉｌｌａ
菌株名
Ｓｔｒａｉｎ
含量
Ｃｏｎｔｅｎｔ／ｇ
提取率
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
显著性差异（５％）
Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ（５％）
ＳＢ４　 ０．０５８　７　 ５．８７ ａ
ＤＪ１　 ０．０６３　１　 ６．３１ ｂ
ＳＹ１　 ０．０６６　３　 ６．６３ ｂｃ
ＨＺ２　 ０．０６７　３　 ６．７３ ｃ
ＬＳ３　 ０．０６７　７　 ６．７７ ｃ
ＫＹ４　 ０．０８３　２　 ８．３２ ｄ
ＫＹ５　 ０．０９１　５　 ９．１５ ｅ
　　注：Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ是菌株ＨＺ２、ＬＳ３、ＫＹ４、ＫＹ５、ＳＹ１第７天的发酵情况；Ｂ是菌株ＳＢ４第８天的发酵情况；Ｃ、Ｈ是菌株ＤＪ１第６天、第４天的发酵情况。
Ｎｏｔｅ：Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ　ｗｅｒｅ　ｓｔｒａｉｎ　ＨＺ２，ＬＳ３，ＫＹ４，ＫＹ５，ＳＹ１ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｅｖｅｎｔｈ　ｄａｙ　ｏｆ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｂ　ｗａｓ　ｓｔｒａｉｎ　ＳＢ４ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｉｇｈｔｈ　ｄａｙ　ｏｆ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｃ，Ｈ　ｗｅｒｅ
ｓｔｒａｉｎ　ＤＪ１ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｉｘｔｈ　ｄａｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒｔｈ　ｄａｙ　ｏｆ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．
图１　各菌株的发酵终点
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｅｎｄ　ｐｏｉｎｔ　ｏｆ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ａｂｏｕｔ　Ａｒｍｉｌｌａｒｉｌｌａ
２．３　木聚糖酶活性
由图２可知，依据各菌株的发酵情况确定的发酵终
点中，除菌株ＳＢ４、ＤＪ１在第８天、第６天结束发酵，其余
均为第７天。发酵过程中，各菌株的木聚糖酶活性均是
先升高再下降，且发酵终点的酶活性远大于发酵第１天
的酶活性。各菌株的木聚糖酶活性除菌株ＳＢ４是在第５
天达到最大值外，其余菌株均是第４天。各菌株的木聚
糖酶活性最大值满足正态分布，可进行菌株间两两比
较。其中菌株ＳＹ１的木聚糖酶活性最高，其次ＨＺ２，二
者间没有显著性差异。紧随其后的依次是菌株ＬＳ３、
ＫＹ４、ＳＢ４、ＫＹ５、ＤＪ１，其中ＬＳ３与ＫＹ４、ＳＢ４与ＫＹ５没有
显著性差异，其余菌株间均有显著性差异。
２．４　ＣＭＣ酶活性
由图３可知，发酵过程中，各菌株的ＣＭＣ酶活性均
是先升后降，发酵终点的酶活性除菌株ＤＪ１、ＳＹ１外，其
余均远低于发酵第１天的酶活性。各菌株中ＳＢ４、ＤＪ１、
ＨＺ２的木聚糖酶活性是在第３天达到最大值外，其余菌
株均是第４天。各菌株的ＣＭＣ酶活性最大值满足正态
分布，可进行菌株间两两比较。其中菌株ＬＳ３的ＣＭＣ
酶活性最高，其次是ＳＢ４，二者间没有显著性差异。紧随
其后的依次是菌株ＤＪ１、ＳＹ１、ＫＹ５、ＨＺ２、ＫＹ４，其中ＤＪ１、
ＳＹ１、ＫＹ５、ＨＺ２两两之间没有显著性差异，其余菌株间
均有显著性差异。
２．５　漆酶活性
由图４可知，发酵过程中各菌株的漆酶活性也是先
升高再下降，且发酵终点的酶活性大于发酵第１天的酶
活。各菌株中ＤＪ１的漆酶活性在第３天达到最大，ＬＳ３
是第５天，其余均是第４天。各菌株的漆酶活性最大值
６３１
北方园艺２０１６（０２）：１３４～１３８ ·食用菌·
满足正态分布，可进行菌株间两两比较。其中菌株ＫＹ４
的漆酶活性最高。紧随其后的依次是菌株ＳＹ１、ＫＹ５、
ＤＪ１、ＬＳ３、ＳＢ４、ＨＺ２，其中ＳＹ１、ＫＹ５、ＤＪ１；ＫＹ５、ＤＪ１、ＬＳ３；
ＬＳ３、ＳＢ４、ＨＺ２两两之间没有显著性差异，其余菌株间均
有显著性差异。
　　注：不同小写字母表示０．０５水平的显著性，数值表示最大酶活。下图同。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｌｏｗｅｒｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｍｅａｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　０．０５ｌｅｖｅｌ．Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ　ｖａｌｕｅ　ｓａｉｄ　ｔｈｅ　ｂｉｇｇｅｓｔ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｉｎｇ　Ｆｉｇ－
ｕｒｅｓ．
图２　各菌株发酵过程中木聚糖酶活性均值变化曲线
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｃｕｒｖｅ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｒｕｌｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅａｎ　ｏｆ　ｘｙｌａｎａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　Ａｒｍｉｌｌａｒｉｌｌａｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
图３　各菌株发酵过程中ＣＭＣ酶活性均值变化曲线
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｃｕｒｖｅ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｒｕｌｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅａｎ　ｏｆ　ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ　ｃｅｌｕｌｏｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　Ａｒｍｉｌｌａｒｉｌｌａｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
图４　各菌株发酵过程中漆酶活性均值变化曲线
Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｃｕｒｖｅ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｒｕｌｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅａｎ　ｏｆ
ｌａｃｃａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　Ａｒｍｉｌｌａｒｉｌｌａｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
３　讨论
多糖提取中，各菌株的多糖得率基本都有显著性差
异。但依据ＩＴＳ的分子鉴定种属来看，Ａｒｍｉｌａｒｉａ　ｍｅｌｅａ
的多糖得率普遍较高，Ａｒｍｉｌｌａｒｉａ　ｇａｌｌｉｃａ的多糖得率
较低。天麻种植采用的高产蜜环菌多为Ａｒｍｉｌｌａｒｉａ
ｇａｌｌｉｃａ［１９－２０］，可知在贵州天麻主产区筛选多糖产量较高
的蜜环菌基本不可行。但是关于蜜环菌多糖的医疗保
健有效成分尚不清楚，至于多糖产量较高的蜜环菌是否
药理作用强还需进行下一步研究。
该研究发酵过程中，不同蜜环菌的木聚糖酶、ＣＭＣ
酶、漆酶的酶活大小在同一时期存在明显差异，木聚糖
酶是万位级、ＣＭＣ酶是千位级、漆酶是十位级。蜜环菌
液体发酵时起主要作用是木聚糖酶，作用最小的是漆
酶。漆酶活性小可能与发酵液的成分有关，发酵液中基
本不含木质素，只有葡萄糖和蛋白类物质，不能有效的
促进漆酶的分泌。从３种酶的变化规律来看，蜜环菌液
体发酵时最早分泌的是ＣＭＣ酶、漆酶，然后是木聚糖
酶，但是木聚糖酶后来居上能短时超过前面２种酶。这
估计与蜜环菌的自身属性有关，作为一种木腐菌，它的
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·食用菌· 北方园艺２０１６（０２）：１３４～１３８
第一营养物质可能是木质素或是纤维素，其次是半纤维
素。液体发酵中，蜜环菌首先分泌的可能是与木质素、
纤维素相关的胞外酶，当发酵环境中不存在木质素、纤
维素时，它再分泌降解半纤维素的相关酶，并迅速适应
环境提高酶分泌量。
液体发酵时，不同蜜环菌的木聚糖酶、ＣＭＣ酶、漆
酶的酶活最大值基本出现在第４天，但最大酶活值与蜜
环菌的生长速度基本没有相关性。菌株ＤＪ１生长速度
最快，４ｄ就能结束发酵。但在不同蜜环菌的木聚糖酶
活最大值中，菌株ＤＪ１的最低；ＣＭＣ酶活最大值中，菌株
ＤＪ１排第３，并与ＳＹ１、ＫＹ５、ＨＺ２均没有显著差异。菌
株ＳＢ４生长速度最慢，需要８ｄ多才能结束发酵，但是其
各酶活的最大值在不同菌株中并不是最低的，有些值甚
至和最高菌株没有显著差异。蜜环菌的生长速度与最
大酶活的持续时间相关，持续时间长的菌株生长快，如
菌株ＤＪ１。其次，蜜环菌的生长速度可能与其自身细胞
膜通透性、主动运输能量供应相关。
参考文献
［１］　孙立夫，张艳华，杨国亭，等．蜜环菌生物种和地理分布概况综述［Ｊ］．
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Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　Ｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　Ｙｉｅｌｄ　ａｎｄ　Ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　Ｅｎｚｙｍｅ
Ａｃｔｉｖｉｔｙ　Ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ＡｒｍｉｌａｒｉｌａＳｔｒａｉｎｓ　Ｉｓｏｌａｔｅｄ　Ｆｒｏｍ　Ｇｕｉｚｈｏｕ
ＨＵＡＮＧ　Ｗａｎｂｉｎｇ１，２，ＧＵＩ　Ｙａｎｇ１，２，ＧＯＮＧ　Ｇｕａｎｇｌｕ１，２，ＹＡＮＧ　Ｔｏｎｇｊｉｎｇ１，２，ＬＩＵ　Ｃｈａｏｇｕｉ　３，ＺＨＵ　Ｇｕｏｓｈｅｎｇ１，２
（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍｏｒｄｅｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｏｆ　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　５５０００６；２．Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　５５０００６；３．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｌａｎｄｓｃａｐｅ　Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４００７１６）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　Ａｒｍｉｌａｒｉｌａ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｇｕｉｚｈｏｕ　ａｓ　ｔｅｓｔ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ｕｓｉｎｇ　ｐｈｅｎｏｌ－ｓｕｌｆｕｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ｔｈｅ　ＤＮＳ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｓｙｒｉｎｇａｌｄａｚｉｎｅ　ｗｅｒｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｍｅａｓｕｒｅ　ｔｈｅ　ｅｎｚｙｍｅ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｘｙｌａｎａｓｅ，ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ　ｃｅｌｕｌｏｓｅ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｎｄ　ｌａｃｃａｓｅ，ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｒｕｌｅ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ
ｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　Ａｒｍｉｌａｒｉｌａｈｙｐｈａｅ　ｃａｍｅ　ｆｒｏｍ　ｌｉｑｕｉｄ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ，ｔｈｅｒｅ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｔｒａｉｎｓ．Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｒｕｌｅ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗｅｒｅ　ｓａｍｅ．Ｔｈｅｙ　ａｌ　ｒｏｓｅ　ａｔ　ｆｉｒｓｔ　ａｎｄ　ｌｏｗｅｒｅｄ　ｌａｔｅｒ．Ｔｈｅ　ｍａｘｉｍｕｍ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｉｍｅ　ｗｈｅｎ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｒｅａｃｈ　ｍａｘｉｍｕｍ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ．Ｔｈｅ　ｆｉｎｅ　ｓｔｒａｉｎ
ＤＪ１ｃｏｕｌｄ　ｅｎｄ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒｔｈ　ｄａｙ．Ｉｔｓ　ｍａｘｉｍｕｍ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　ａｌｗａｙｓ　ｔｈｅ　ｅａｒｌｉｅｓｔ　ｔｏ　ａｐｐｅａｒ　ａｎｄ　ａｔ　ｔｈｅ
ｌａｔｅｓｔ　ｔｏ　ｄｉｓａｐｐｅａｒ．Ｗｈｅｎ　ｌｉｑｕｉｄ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，Ａｒｍｉｌａｒｉａｐｒｉｏｒ　ｓｅｃｒｅｔｅｄ　ＣＭＣ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｎｄ　ｌａｃｃａｓｅ，ｔｈｅｎ　ｓｅｃｒｅｔｅｄ　ｘｙｌａｎａｓｅ．
Ｂｕｔ　ｘｙｌａｎａｓｅ　ｐｌａｙｅｄ　ａ　ｍａｉｎ　ｒｏｌｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｒｍｉｌａｒｉｌａ；ｘｙｌａｎａｓｅ；ＣＭＣａｓｅ；ｌａｃｃａｓｅ；ｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
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