全 文 ： 药理药化
收稿日期:2008-04-12修订日期:2008-09-19
基金项目:国家自然科学基金(No.30572368)
作者简介:赵　艳(1975-),女(汉族),黑龙江大庆人, 现为黑龙江中医药
大学中药学博士研究生 ,硕士学位 ,主要从事中药毒性方面的研究工作.
＊通讯作者简介:刘树民(1963-), 男(汉族),黑龙江佳木斯人 ,现任黑龙
江中医药大学中医药研究院教授 ,博士研究生导师 ,博士后 ,主要从事中
药药性理论及中药药效物质基础相关基础问题研究工作.
黄药子配伍当归快速测定色谱指纹图谱
赵　艳 1 , 刘树民2＊
(1.黑龙江大庆油田总医院 ,黑龙江 大庆　163001;
2.黑龙江中医药大学中医药研究院 ,黑龙江 哈尔滨　150040)
摘要:目的 建立黄药子配伍当归快速测定(HPLC/PDA/MS)色谱指纹图谱。方法 应用 KromasilC18柱 , 0.1 %乙酸水与
纯色谱甲醇进行梯度洗脱 ,流速为 0.8ml/min, 检测波长 200 ～ 400 nm, 柱温为 30℃。结果 得到分离度 、重现性均较好
的黄药子配伍当归 HPLC/PDA指纹图谱 ,标示了 10个共有峰。应用 HPLC/MS技术对其 6个主要色谱峰进行了初步归
属。结论 黄药子配伍当归指纹图谱的建立 , 为其吸收 /代谢前后的活性 /毒性变化情况提供了依据。
关键词:黄药子配伍当归;　指纹图谱;　快速测定
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)10-2339-02
TheFingerprintsofDioscoreabulbiferaL.andAngelicasinensisDielsbyHPLC/
PDA/MS
ZHAOYan1 , LIUShu-min2＊
(1.TheHospitalofDaqingOilField, Daqing, Heilongjiang, China163001 , China;2.InstituteofTraditional
ChineseMedicine, Harbin, Heilongjiang, China150040, China)
Abstract:ObjectiveToestablishthechromatographicfingerprintsofDioscoreabulbiferaL.andAngelicasinensisDielsby
HPLC/PDA.MethodsSeparationwascarriedoutonaKromasilC18 column.Gradientelutewasperformedbythemobilephase
consistingof0.1%aceticacidandcolourspectrummethanolwiththeflowrateof0.8ml/min.Thecolumntemperaturewassetat
30℃ anddetectingwavelengthat200 ～ 400 nm.ResultsPerfectfingerprintswereobtainedwhichcanbeusedfortheDioscorea
bulbiferaL.andAngelicasinensisDiels, tencommonpeakswereconfirmedinfingerprints.Sixcompoundswereelucidatedby
HPLC/MS.ConclusionThemethodcanbeappliedforinternalabsorptionandinternalmetabolismofDioscoreabulbiferaL.and
AngelicasinensisDiels.
Keywords:DioscoreabulbiferaL.andAngelicasinensisDiels;　Fingerprints;　HPLC/PDA/MS
　　黄药子为薯蓣科植物黄独 DioscoreabulbiferaL.的块茎 ,是可
引起药源性肝损害的常用中草药之一 ,近年来有关黄药子的临床
毒性屡见报道 , 本实验室在黄药子配伍当归可起到减毒作用实验
研究的基础上 [ 1] , 进一步研究其指纹图谱 , 为其活性 /毒性成分
在吸收 /代谢前后的变化的探索打下基础。
1　仪器与试药
1.1　仪器 Waters2695 LC/PDA/MS系统含在线真空脱气机 、高
压二元梯度泵 、恒温自动进样器 、柱温箱 、二级管阵列检测器
(PDA)、电喷雾离子化(ESI)接口 , MICROMASSQuattro色谱工
作站。
1.2　试剂 甲醇:色谱纯 , 德国 Merck公司;乙酸:分析纯;纯
净水。
1.3　药品 黄药子购于黑龙江省药材公司 , 产地河北 , 经黑龙江
省药检所鉴定 , 为薯蓣科植物黄独 DioscoreabulbiferaL.的块茎。
当归购于黑龙江省药材公司 , 产地安徽 , 经黑龙江省药检所鉴定
为伞形科(Umbelliferae)当归 AngelicasinensisDiels的根。
2　方法
2.1　供试品溶液的制备 黄药子配伍当归(1∶2)饮片头煎 10
倍量水 ,浸泡 2 h后 , 煎煮 1 h, 二煎 8倍量水 , 煎煮 1 h, 合并煎
液 , 浓缩 , 超速离心机 8 000r· min-1离心 3h,继续浓缩至每毫升
含生药材 0.5 g, 冷冻干燥制成颗粒。给药时用蒸馏水溶解稀释
至所需浓度 , 0.45 μm微孔滤膜滤过 , 即得。
2.2　参照物溶液的制备 取阿魏酸对照品适量 , 用 70%甲醇溶
解 , 制成浓度为 100 μg/ml的溶液 , 取黄独乙素对照品适量 , 用
甲醇溶解 , 制成浓度为 312μg/ml的溶液 ,取(+)表儿茶素对照
品适量 ,用甲醇溶解 , 制成浓度为 100 μg/ml的溶液 , 取金丝桃
苷对照品适量 ,用甲醇溶解 , 制成浓度为 200 μg/ml的溶液。
2.3　色谱条件及测定方法 色谱柱:KromasilC18柱(250 mm×
4.6mm, 5μm);流动相 0.1 %乙酸水(A)与甲醇溶液(B);梯度
洗脱:0 ～ 50 min(0 ～ 17% A), 50 ～ 90min(17% A～ 40% A), 90
～ 115 min(40% ～ 80% A);115 ～ 135 min(80% ～ 100% A);135
～ 145 min(100% A);流速:0.8ml/min;检测波长:280 nm;PDA
同时纪录 200 ～ 400 nm紫外光谱 , 柱温:30℃;柱后分流 0.2 ml/
min进质谱仪 , 同时记录总离子流(TIC)图。离子极性::ESI
(+)ESI(-);扫描范围:100 ～ 800;干燥气流速:10 L/min;干燥
气温度:350℃;雾化室压:40 pis;毛细管电压:4000V;传输电压:
70eV;进样量 10 μl。
2.4　方法学考察
2.4.1　空白实验 吸取 50 %甲醇 10 μl, 注入高效液相色谱仪 ,
记录色谱图 ,结果表明空白溶剂无干扰。
2.4.2　参照物实验 吸取参照物溶液 10 μl, 注入高效液相色谱
仪 , 记录色谱图 , 其主峰的保留时间用于确定黄药子配伍当归中
各对照品的峰位。
2.4.3　稳定性实验 取同一供试品溶液 , 分别于 0, 1, 2, 4, 12 , 24
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.10 时珍国医国药 2008年第 19卷第 10期
h进样检测。各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值
的 RSD均小于 3% , 表明样品至少在 24 h内稳定。
2.4.4　进样精密度实验 取同一供试品溶液 , 连续进样 6次。各
主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的 RSD均小于
3%,表明精密度良好。
2.4.5　重复性实验 取同一批药材 , 按 “ 2.1”项下方法分别制备
供试品溶液 6份 , 进样检测。各主要色谱峰的相对保留时间和相
对峰面积比值的 RSD均小于 3% , 表明方法的重复性好。
3　结果
黄药子配伍当归高效液相色谱可以分离出 20个左右的峰 ,
经比较所有测定的色谱图 ,从中选择了稳定性和重现性均较好的
10个共有峰构成了指纹图谱的特征峰群(见图 1)。为进一步研
究指纹图谱中各谱峰归属 , 利用 HPLC/MS技术 , 对黄药子配伍
当归供试品进行了质谱正负离子检测(见图 2)。
图 1　黄药子配伍当归 10个 HPLC/PDA指纹特征峰
图 2　黄药子配伍当归正离子和负离子 TIC图
4　讨论
4.1　HPLC/PDA/MS分析 HPLC/PDA对照品实验表明 , 5号峰
是(+)儿茶素 , 与对照品保留时间和光谱图最大吸收波长一致 ,
根据 TIC图提取质谱图(图 3)中表现为 m/z289[ M-H] -;6号
峰是阿魏酸 , 与对照品保留时间和光谱图最大吸收波长一致 ,根
据 TIC图提取质谱图(图 3)表现为 m/z193[ M-H] -, m/z178
[ M-CH3] -, m/z165 [ M-CO] -, m/z149[ M-CHO] -等峰;8
号峰是金丝桃苷 , 与对照品保留时间和时间光谱图最大吸收波长
一致 , 根据 TIC图提取质谱图(图 3)表现为 m/z463[ M-H] -;
10号峰是黄独乙素 , 与对照品保留和时间光谱图最大吸收波长
一致 , 根据 TIC图提取质谱图(图 3)中 10号峰表现 m/z344[ M
-H] -;根据 TIC图 ,提取质谱图(图 3)及相关文献 [ 2 ～ 4] , 对其它
主要色谱峰进行初步归属 , 1号峰推测为腺嘌呤.表现为 m/z134
[ M-H] -, m/z115[ M-H] -, m/z108, m/z66等峰;2号峰推测
为尿嘧啶 , 表现为 m/z112[ M-H] -;3号峰推测为腺苷 , 表现为
m/z268[ M+H] +, m/z237, m/z178, m/z164, m/z136[ M–吡
喃糖 ] ;4号峰推测为 L-色氨酸 , 表现为 m/z205 [ M+H] +, m/z
188[ M-OH] +峰 , 并伴有 m/z161[ M+28] +峰;7号峰推测为
3, 5-二甲氧基山萘酚 ,表现为 m/z317[ M+H] +;9号峰推测为
山核桃素 , 表现为 m/z329 [ M-H] -, m/z314 [ M-CH3 ] -, m/z
125 。
图 3　黄药子配伍当归 10个峰质谱图
4.2　小结 本文首次采用 HPLC/PDA/MS对黄药子配伍当归的
指纹图谱进行了研究 ,得到分离度 、重现性均较好的药材指纹图
谱 , 并利用 HPLC/MS技术对 10个主要色谱峰进行了初步归属 ,
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 10期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.10　
为今后与黄药子的指纹图谱进行拟合比较 , 确定活性成分 、毒性
成分变化规律 , 确定减毒作用物质基础打下扎实基础 ,也为研究
其吸收 /代谢前后的活性 /毒性变化情况提供了依据。
参考文献:
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D, -E, -F, -G, and-H[ J] .JustusLiebigsAnnalenderChemie,
1978, 5:818.
收稿日期:2008-02-25;　修订日期:2008-09-25
基金项目:国家自然科学基金重点项目(No.20235020);
青岛 “ 2004将才计划 ”(No.04-3-JJ-11);
青岛市崂山区科技计划项目(No.LS-05-KJZX-76)
作者简介:王磊磊(1983-),女(汉族),山东烟台人 ,现为上海海洋大学生命学
院在读硕士研究生,学士学位,主要从事中药标准化和质量控制研究工作.
＊通讯作者简介:王小如(1949-),女(汉族),辽宁大连人 ,现为青岛市现代分
析技术及中药标准化重点实验室教授 ,主要从事中药现代化相关研究工作.
赤芍与白芍药材高效毛细管电泳指纹图谱方法学研究
王磊磊 1 ,陈军辉2 ,王　虹 1 ,殷月芬 2 ,王小如2, 3＊ ,杨东方 1
(1.上海海洋大学生命学院 ,上海　200090;
2.国家海洋局第一海洋研究所·青岛市现代分析技术及中药标准化重点实验室 ,山东 青岛　266061;
3.厦门大学化学化工学院 ·现代分析科学教育部重点实验室 ,福建 厦门　361005)
摘要:目的 确定赤芍和白芍的高效毛细管电泳分析方法 , 建立赤芍和白芍的高效毛细管电泳法(HPCE)指纹图谱。方
法 HPCE工作条件:采用未涂层熔融石英毛细管(内径 75 μm,有效长度 50 cm), 分离电压为 25 kV, 柱温 25 ℃,二极管
阵列检测器(DAD)检测波长为 220 nm,缓冲液为 30mmol/L硼砂(pH =9.0)溶液。按此条件对来自不同产地的 7种赤
芍样品和 8种白芍样品进行了分析。结果 建立了赤芍和白芍 HPCE指纹图谱 , 采用中药指纹图谱相似度计算软件 , 以系
统生成的对照指纹图谱为对照模板对不同样品的图谱进行相似度计算 。结论 该方法简捷 、有效 , 可以用于赤芍和白芍
药材的质量控制。
关键词:赤芍;　白芍;　高效毛细管电泳法;　指纹图谱
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)10-2341-04
MethodologicStudy ofHPCE FingerprintsofRadix paeoniaeAlba and Radix
paeoniaeRubra
WANGLei-lei1 , CHENJun-hui2 , WANGHong1 , YINYue-fen2 , WANGXiao-ru2, 3 , YANGDong-fang1
(1.ColegeofAqua-lifeScienceandTechnology, ShanghaiFisheriesUniversity, Shanghai200090;2.Qingd-
aoKeyLabonAnalyticalTechnologyDevelopmentandStandardizationofChineseMedicines, FirstInstituteOce-
anographyofSOA, Qingdao, 266061;3.DepartmentofChemistryandtheKeyLaboratoryofAnalyticalScienceoftheMOE, ColegeofChemistryandChemicalEngineering, XiamenUniversity, Xiamen361005, China)
Abstract:ObjectiveTosetupamodernHighPerformanceCapilaryElectrophoresisanalysismethodforseparatinganddetec-
tingRadixpaeoniaeAlbaandRadixpaeoniaeRubraandestablishtheirfingerprints.MethodsSevensamplesofRadixpaeoniae
AlbaandeightsamplesofRadixpaeoniaeRubrawerecarriedoutbyHPCEunderthefolowingconditions:baredfusedsilicacap-
ilary(50cm ×75 μmi.d.), 30mmol/Lborate(pH =9.0)asbuffer, therunvoltageis+25kV, detectionwavelengthof
UVat220 nm, andcolumntemperatureof25℃.ResultsThefingerprintswereconfirmedandcomparedbythesoftwareofthe
similarityevaluationsystemforchromatographicfingerprint.ConclusionTheresultsshowedthatthemethodofHPCEfingerprint
isreliableandaccuratetocontrolthequalityoftwoChinesetraditionalmedicines.
Keywords:RadixpaeoniaeAlba;　RadixpaeoniaeRubra;　HighPerformanceCapilaryElectrophoresis;　Fingerprint
　　赤芍为毛茛科芍药 PaeonialactifloraPall.或川赤芍 Paeonia
veitchiLynch.直接使用的干燥根 ,其味苦 , 微寒 ,归肝经 , 具有清
热凉血 、散瘀止痛之功能。白芍为毛莨科芍药 Paeonialactiflora
Pal1.水煮去皮后使用的干燥根 , 其味苦 、酸 , 微寒 ,归肝 、脾经 ,具
有平肝止痛 、养血调经 、敛阴止汗之功能 [ 1] 。两种药材中均含有
芍药苷 、芍药内酯苷 、苯甲酰芍药苷等单萜苷类和苯甲酸 、没食子
酸等酸类成分 [ 2, 3] ,其中总苷类物质为药材的主要活性成分 [ 4] ,
因此 2005版《中国药典》规定芍药苷的含量作为赤芍和白芍的
质控指标。但是赤芍和白芍的疗效和在临床使用上有很大不同 ,
仅使用单一成分作为指标进行质量控制 ,不能全面反映药材的有
效成分 ,难以真正全面地控制药材的内在质量。中药指纹图谱是
指中药材经适当处理后 ,采用一定的分析手段 , 得到的能够标示
该中药材及其制剂的各组分群体特性的共有峰的图谱 [ 5] 。色谱
指纹图谱是通过把复杂的化学成分进行分离 , 形成高低不同的
峰 , 组成一张色谱图 , 整个色谱图表达了该样品所含化学成分的
多少和量的大小 ,不仅可用于已知成分的分析 , 还可以用于未知
成分的分析 [ 6] 。因此指纹图谱目前被国际上公认为是植物药和
中草药质量控制最有效的工具之一 [ 7] , 如《美国草药典》(AHP)
为五味子 、甘草等热点植物药确定了比较稳定可靠的 TLC、HPLC
分析结果和指纹图谱 ,为该类药材的生产和应用提供依据 [ 8] 。
近年来 ,将色谱指纹图谱的方法用于赤芍和白芍研究的相关
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