全 文 ：书第 41 卷 第 9 期 东 北 林 业 大 学 学 报 Vol． 41 No． 9
2013 年 9 月 JOUＲNAL OF NOＲTHEAST FOＲESTＲY UNIVEＲSITY Sep． 2013
1)哈尔滨市优秀学科带头人项目(2013ＲFXXJ027) ;黑龙江中
医药大学“科技创新人才支持计划”项目(2012ＲCQ15)。
第一作者简介:马微微，女，1980 年 12 月生，黑龙江中医药大学
药学院，讲师。
通信作者:穆立蔷，东北林业大学林学院，教授。E － mail:
mlq0417@ 163． com。
收稿日期:2012 年 12 月 24 日。
责任编辑:程 红。
紫椴花提取物体外抗菌活性1)
马微微 王 军 穆立蔷
(黑龙江中医药大学，哈尔滨，150040) (中国农业大学) (东北林业大学)
摘 要 选用常见的 3 种革兰氏阴性菌、2 种革兰氏阳性菌及 1 种真菌对紫椴花提取物的抑菌效果进行了研
究，并采用肉汤稀释法对每种提取物的最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)进行测定。结果表明:紫椴花
乙酸乙酯萃取物对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、白色念珠菌 6 种菌种均
具有明显的抑菌活性，抑菌效果强于链霉素，其对革兰氏阳性菌及真菌的的抑菌效果好于革兰氏阴性菌。
关键词 紫椴;提取物;抗菌;MIC;MBC
分类号 Ｒ285． 5
Antibacterial Activity in vitro of Tilia amurensis Ｒupr． Inflorescence Extracts /Ma Weiwei(Heilongjiang University of
Chinese Medicine，Harbin 150040，P． Ｒ． China) ;Wang Jun(China Agricultural University) ;Mu Liqiang(Northeast
Forestry University)/ / Journal of Northeast Forestry University． －2013，41(9)． －127 ～ 128，132
We studied antibacterial effects of Tilia amurensis Ｒupr． inflorescence extracts on three Gram-negatives，two Gram-
positives and one Fungus to provide theoretical basis for comprehensive exploitation and utilization of T． amurensis Ｒupr．
resources． We measured MIC (minimum inhibitory concentration)and MBC (minimum bactericidal concentration)of
each extract by using broth dilution method． The ethyl acetate extracts of T． amurensis Ｒupr． have significant antibacterial
activity on Staphylococcus epidermidis，S． aureus，Staphylococcus citreus，Escherichia coli，Proteus vulgaris and Candida
albicans and its antibacterial effect is better than that of streptomycin．
Keywords Tilia amurensis Ｒupr．;Extracts;Anti-bacteria;Minimum inhibitory concentration (MIC) ;Minimum
bactericidal concentration (MBC)
紫椴(Tilia amurensis Ｒupr．)为椴树科(Tiliace-
ae)椴树属落叶阔叶乔木［1］，其花具有清热解表之
功效，对感冒、发热，肾盂肾炎，口腔炎和喉炎等具有
良好的治疗作用［2］，在我国民间被广泛使用。椴树
属植物花中主要含有挥发油、黄酮、甾醇、脂肪酸、萜
烯、香豆素等化合物，并有多种黄酮类单体化合物已
被成功分离［3］。另有文献报道，欧洲产椴树具有治
疗神经紊乱、失眠、头痛、感冒、发烧、支气管炎、流
感、风湿等症的功效［4－9］。本研究对紫椴花及其分
离各组分的抗菌活性进行了研究，以期为紫椴花抗
菌药物的开发提供科学依据。
1 材料与方法
材料与仪器:紫椴花于 2008 年 6 月至 7 月采于
东北林业大学校园内和黑龙江省农科院园艺分院，
经东北林业大学穆立蔷教授鉴定为椴树科椴树属植
物紫椴的花。革兰氏阳性菌有表皮葡萄球菌(Se，
Staphylococcus epidermidis)、金黄色葡萄球菌(Sa，
Staphylococcus aureus)、柠檬色葡萄球菌(Sc，Staphy-
lococcus citreus) ;革兰氏阴性菌有大肠杆菌(Ec，
Escherichia coli)、变形杆菌(Pv，Proteus vulgaris) ;真
菌有白色念珠菌(Ca，Candida albicans)。供试菌种
均由黑龙江中医药大学微生物实验室提供。牛肉
膏、蛋白胨、琼脂均购自北京奥博星生物技术有限责
任公司;化学试剂均为分析纯。
提取物的制备:取干燥的紫椴花 500 g，加 8 倍
量的 70%乙醇，浸泡 12 h，回流提取 3 次，每次 2 h，
得到 70%乙醇提取物;将乙醇提取物用蒸馏水溶解
后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得到石油醚
部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水溶物。
菌悬液的制备:将供试菌种用适宜的斜面活
化后，以无菌水制成含菌数约为 108cfu·mL－1的菌
悬液。
抑菌直径的测定:采用琼脂扩散法测定。用无
菌棉签蘸取 108cfu·mL－1的试验菌悬液，在营养琼
脂平板表面均匀涂抹 3 次，然后绕平板边缘涂抹一
周，盖好平皿，室温干燥 5 min，滤纸片(直径 6． 0
mm)平放于无菌平皿内 160 ℃干热灭菌 2 h。在滤
纸片上分别滴加阳性对照品链霉素(1 g·L－1)、供
试样品乙醇提取物(500 g·L－1)、石油醚部位(100 g·
L－1)、乙酸乙酯部位(100 g·L－1)、正丁醇部位(100
g·L－1)、或水溶物(100 g·L－1)溶液 20 μL，开盖室
温自然晾干，用无菌镊子将样片轻轻贴放于平板表
面，每个平板贴 3 片相同药液的试验样片，1 片无菌
生理盐水对照片。各试验菌株在相应的培养条件下
培养。测量抑菌直径，试验重复 3 次。
MIC及 MBC 的测定:采用微量肉汤稀释法测
定。MIC为最低抑菌质量浓度，即药物与一定质量
浓度的菌液作用后能够抑制可见菌生长的最低质量
浓度;MBC为最低杀菌质量浓度，即在 MIC 基础上，
从每管吸取 10 μL混合液，点于固体培养基上，继续
按 MIC培养条件培养，以杀灭 99． 9%细菌数量的最
低质量浓度。采用二倍稀释法将供试样品用无菌生
理盐水稀释系列浓度，在 96 孔板上每孔加 100 μL
不同质量浓度的药液和 100 μL菌液，使最终菌液浓
度为(1 ～ 5)×105cfu·mL－1，以无菌生理盐水加菌液
作为对照，重复 3 次。
2 结果与分析
2． 1 抑菌效果分析
从表 1 可看出，全部样品对 Se、Sa、Sc、Ec、Pv、
Ca 6 种菌种均具有不同程度的抑制作用。其中
70%乙醇提取物(500 g·L－1)和乙酸乙酯萃取物
(100 g·L－1)的抑菌效果明显高于其他提取物;而
乙酸乙酯萃取物(100 g·L－1)对 6 种菌种的抑菌效
果明显高于阳性对照组链霉素，其对 6 种菌种的抑
制程度由大到小为 Sc、Se、Ca、Sa、Pv、Ec。可见，紫
椴花对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及真菌均具有
显著的抑制作用，但对革兰氏阳性菌及真菌的抑制
效果好于革兰氏阴性菌。
乙酸乙酯萃取物是从 70%乙醇提取物中分离
出的一个组份。从表 1 可见，70%乙醇提取物的抑
菌效果稍低于乙酸乙酯萃取物，但明显高于石油醚
萃取物、正丁醇萃取物以及水溶物，表明 70%乙醇
提取物中抑菌活性物质主要集中在乙酸乙酯组份
中，这为下一步紫椴花抑菌活性成分的研究提供了
方向。
表 1 紫椴花提取物对供试菌种的抑菌直径 mm
供试菌种
抑菌直径
70%
乙醇
石油
醚
乙酸
乙酯
正丁
醇
生理
盐水
1 g·L－1的
链霉素
表皮葡萄球菌(Se) 20 11 29 10 6 16
金黄色葡萄球菌(Sa) 17 9 25 9 6 22
柠檬色葡萄球菌(Sc) 25 12 33 12 6 14
大肠杆菌(Ec) 17 6 20 7 6 14
变形杆菌(Pv) 20 9 22 11 6 21
白色念珠菌(Ca) 18 11 27 12 6 16
2． 2 MIC及 MBC结果
对紫椴花各组分 MIC 及 MBC 的测定结果见表
2。由结果可看出:石油醚萃取物和水溶物在 20 g·
L－1范围内无抑菌活性。正丁醇萃取物对 Sa 和 Ec
在 20 g·L－1内无抑菌活性，而对 Se、Sc、Pv、Ca 有一
定的抑菌活性。乙酸乙酯萃取物对 Se、Sa、Sc、Ec、
Pv、Ca 6 种菌种均具有明显的抑菌活性，MIC 分别
为 0． 625、1． 250、0． 313、2． 500、1． 250、0． 313 g·L－1，
MBC分别为 1． 250 L、2． 500、0． 313、10． 000、2． 500、
0． 625 g·L－1，其对革兰氏阳性菌及真菌的作用效果
明显高于革兰氏阴性菌。而 70%乙醇提取物在 20
g·L－1质量浓度内无显著抑菌活性，但在 25 ～50 g·
L－1内显示出抑菌活性，说明 70%乙醇提取物中具有
抑菌成分，从中分离出的乙酸乙酯萃取物，是其抑菌
作用的有效化学组份。乙酸乙酯组份的 MIC 及
MBC均小于 70%乙醇提取物，这也符合中药有效成
分药效比中药提取物效果明显的规律，进一步说明
了乙酸乙酯组份为紫椴花抑菌活性的有效部位。
表 2 紫椴花各提取物的 MIC及 MBC g·L－1
供试
菌种
70%乙醇
MIC MBC
石油醚
MIC MBC
乙酸乙酯
MIC MBC
正丁醇
MIC MBC
水
MIC MBC
Se 25 50 ＞20 ＞20 0． 625 1． 250 10 10 ＞20 ＞20
Sa 50 100 ＞20 ＞20 1． 250 2． 500 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20
Sc 25 50 20 ＞20 0． 313 0． 313 10 20 ＞20 ＞20
Ec 200 400 ＞20 ＞20 2． 500 10． 000 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20
Pv 50 50 ＞20 ＞20 1． 250 2． 500 10 20 ＞20 ＞20
Ca 25 100 ＞20 ＞20 0． 313 0． 625 5 20 ＞20 ＞20
3 结束语
紫椴花 70%乙醇提取物对革兰氏阳性菌、革兰
氏阴性菌及真菌均具有明显的抑菌活性，其中乙酸
乙酯部位的抑菌效果最好，其对革兰氏阳性菌及真
菌的抑菌效果好于革兰氏阴性菌。说明紫椴花具有
广谱杀菌的作用，其作用的有效部位为乙酸乙酯部
位。本研究为紫椴花抗菌药物的开发提供了科学依
据，为紫椴资源的综合利用提供了方向。
参 考 文 献
［1］ 周以良．黑龙江树木志［M］．哈尔滨:黑龙江科学技术出版社，
1986．
［2］ 国家中医管理局《中华本草》编委会． 中华本草［M］． 上海:上
海科学技术出版社，1999．
［3］ Martínez A L，González-Trujano M E，Aguirre-Hernández E，et
al． Antinociceptive activity of Tilia americana var． mexicana inflo-
rescences and quercetin in the formalin test and in an arthritic pain
model in rats［J］． Neuropharmacology，2009，56:564－571．
(下转 132 页)
821 东 北 林 业 大 学 学 报 第 41 卷
［4］ 徐志宏，黄建．中国介壳虫寄生蜂志［M］．上海:上海科学技术
出版社，2004．
［5］ Viggiani G． New species and host records of African aphelinids
(Ｒeserches of Hymenoptera:Chalcidoidea 70) ［J］． Journal of the
Entomological Society of Southern Africa，1982，45(1) :27－32．
［6］ Ｒivnay T，Gerling D． Aphelinidae parasitoids (Hymenoptera:
Chalcidoidea)of Whiteflies (Hemiptera:Aleyrodidae)in Israel，
with description of three new species［J］． Entomophaga，1987，32
(5) :463－475．
［7］ Polaszek A，Evans G A，Bennett F D． Encarsia parasitoids of Be-
misia tabaci (Hymenoptera:Aphelinidae;Homoptera:Aleyrodi-
dae) :a preliminary guide to identification［J］． Bulletin of Ento-
mological Ｒesearch，1992，82(3) :375－392．
［8］ Polaszek A，Abd-Ｒabou S ＆ Huang J． The Egyptian species of
Encarsia (Hymenoptera:Aphelinidae) :a preliminary review［J］．
Zoologische Mededeelingen，Leiden，1999，73(6) :131－163．
［9］ Schmidt S，Naumann I D，De Barro P J． Encarsia species (Hy-
menoptera:Aphelinidae)of Australia and the Pacific islands at-
tacking Bemisia tabaci and Trialeurodes vaporariorum (Hemiptera:
Aleyrodidae)-a pictorial key and descriptions of four new species
［J］． Bulletin of Entomological Ｒesearch，2001，91(5) :369－387．
［10］ Abd-Ｒabou S，Ghahari H． A revision of Encarsia (Hymenopter-
a:Aphelinidae)species from Iran［J］． Egyptian Journal of Agri-
cultural Ｒesearch，2004，82(2) :647－684．
［11］ Schmidt S，Polaszek A． The Australian species of Encarsia Frster
(Hymenoptera， Chalcidoidea: Aphelinidae) ，parasitoids of
whiteflies (Hemiptera，Sternorrhyncha，Aleyrodidae) and ar-
moured scale insects (Hemiptera，Coccoidea:Diaspididae) ［J］．
Journal of Natural History，2007，41(33 /36) :2099－2265．
［12］ Ghahari H，Huang Jian，Abd-Ｒabou S． A contribution to the En-
carsia and Eretmocerus (Hymenoptera:Aphelinidae) species
from the Arasbaran biosphere reserve and vicinity，northwestern
Iran［J］． Archives of Biological Science，Belgrade，2011，63
(3) :867－878．
［13］ Walker F． Monographia chalciditum［M］． London:Bread-Street-
Hill，1839．
［14］ De Ⅴ Graham M W Ｒ． The British species of Aphelinus with
notes and descriptions of other European aphelinidae (Hymenop-
tera) ［J］． Systematic Entomology，1976，1:123－146．
［15］ Masi L． Contribuzioni alla conoscenza dei Calcididi Italiani (par-
te 3a) ［J］． Bollettino del Laboratorio di Zoologia Generale e
Agraria della Ｒ Scuola Superiore d’Agricoltura，Portici，1909，4:
3－37．
［16］ Viggiani G． Le specie italiane del genere Encarsia Foerster (Hy-
menoptera:Aphelinidae) ［J］． Bollettino del Laboratorio di Ento-
mologia Agraria‘Filippo Silvestri’，Portici，1987，44:121－179．
［17］ Mercet Ｒ G． Afelinidos palearticos (Hym． Chalc．)． 3a nota
［J］． EOS，Madrid，1929，5:215－222．
［18］ Mercet Ｒ G． Afelinidos palearticos (Hym． Chalc．)． 4a nota
［J］． EOS，Madrid，1930，6:191－199．
［19］ Hayat M． Aphelinidae of India (Hymenoptera:Chalcidoidea) :a
taxonomic revision［M］． Florida:Associated Publishers，1998．
［20］ Abd-Ｒabou S． Parasitoids of Bemisia tabaci (Genn．) (Hom．
Aleyrodidae)in Egypt［J］． Bollettino del Laboratorio di Entomo-
logia Agraria‘Filippo Silvestri’，Portici，1998，54:11－16．
［21］ Manzari S，Polaszek A，Belshaw Ｒ，et al． Morphometric and
molecular analysis of the Encarsia inaron species－group (Hyme-
noptera:Aphelinidae) ，parasitoids of whiteflies(Hemiptera:Al-
eyrodidae) ［J］． Bulletin of Entomological Ｒesearch，2002，92
(2) :165－175．
［22］ Myartseva S N，Evans G A． Genus Encarsia Frster of Mexico
(Hymenoptera:Chalcidoidea:Aphelinidae)． A revision，key
and description of new species［M］． Victoria:Universidad
Autónoma de Tamaulipas，Ciudad Victoria，2008．
［23］ Shafee S A，Bela D． A new species of Encarsia (Hymenoptera)
from Budapest，Hungary［J］． Indian Journal of Systematic Ento-
mology，1984，1(2) :29－30．
［24］ Huldén L． The whiteflies (Homoptera，Aleyrododea)and their
parasites in Finland［J］． Notulae Entomologicae，1986，66(1) :1－
40．
(上接 128 页)
［4］ Toker G，Küpeli E，Memisogˇlu M，et al． Flavonoids with antino-
ciceptive and anti-inflammatory activities from the leaves of Tilia
argentea (silver linden) ［J］． Journal of Ethnopharmacology，
2004，95:393－397．
［5］ Martínez A L，González-Trujano M E，Aguirre-Hernández E，et
al． Antinociceptive activity of Tilia americana var． mexicana inflo-
rescences and quercetin in the formalin test and in an arthritic pain
model in rats［J］． Neuropharmacology，2009，56:564－571．
［6］ Viola H，Wolfman，C，de Stein L M，et al． Isolation of pharma-
cologically active benzodiazepine receptor ligands from Tilia tomen-
tosa (Tiliaceae) ［J］． Journal of Ethnopharmacology，1994，44:47－
53．
［7］ Coleta M，Campos M G，Cotrim M D，et al． Comparative evalua-
tion of Melissa officinalis L．，Tilia europea L．，Passiflora edulis
Sims and Hypericum perforatum L． in the elevated plus maze anxie-
ty test［J］． Pharmacopsychiatry，2001，34(Suppl 1) :20－21．
［8］ Griebel G，Perrault G，Sanger D J． Behavioural profiles of the re-
versible monoamine-oxidase-A inhibitors befloxatone and moclobe-
mide in experimental model for screening anxiolytic and anti-panic
drugs［J］． Psychopharmacology (Berlin) ，1997，131:180－186．
［9］ Yesilada E，Ustün O，Sezik E，et al． Inhibitory effects of Turkish
folk remedies on inflammatory cytokines:interleukin-1α，interleu-
kin-1β and tumor necrosis factor-α［J］． Journal of Ethnopharma-
cology，1997，58:59－73．
231 东 北 林 业 大 学 学 报 第 41 卷