全 文 ：西北林学院学报 2006, 21( 5): 154～ 155
Journal of No r thw est Fo r estry Univ e rsity
西藏长松萝浸提物抑菌作用研究
⒇
苏印泉 1 ,　王海宏1, 2 ,　马养民 1 ,　李荣钦 1, 3 ,　玉泉幸一郎 4 ,　牟田信次 5
( 1.西北农林科技大学林学院 ,陕西 杨陵 712100; 2.西藏米林县团委 ,西藏米林 860500; 3.西藏大学 ,西藏 林芝 860000;
4.九州大学 ,日本九州 ; 5九州电力 ,日本 九州 )
摘　要: 用苯、乙酸乙酯、乙醇、水等 4种溶剂对长松萝进行浸提。浸提物抑菌试验表明 ,苯、乙酸乙
酯、乙醇的浸提物对霉菌、细菌、酵母菌、植物病原菌有抑制作用 ,而水提物对所示菌种无抑制作用。
关键词: 长松萝 ;浸提物 ;抑菌作用
中图分类号: S759. 82　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1001-7461( 2006) 05-0154-02
Bacteriostas is of Usnea longissima Ex tracts o f Tibet
SU Yin-quan1 ,　WANGHai-hong1, 2 ,　MA Yang-min1 ,　 LI rong-qin1, 3 ,
KOICHIRO Gyokusen
4
,　 SHINJI Muta5
( 1.Col lege of Forestry , Northwest A & F University , Yang lin g , Shaan xi 712100,China; 2. League Cononission ,Mil in , Tibet 860500,China ;
3. Tibet Universi ty ,Linzhi , Tibet 860000, Ch ina; 4 Kyushu University, J apan; 5 Kyush u Electric Power Co. , I NC , Japan)
Abstract: Dried samples o f Usnea longissima col lected f rom Tibet w ere ex t racted by benzene, ethyl acetate,
ethanol and w ater. Bacteia-inhibi ting ef fects of the ex t racts w ere studied. The resul ts show ed that so lv ents
all exhibi ted inhibiting effects on molds, bacteria , yeast and phytopa thogenic fungi.
Key words: Usnea longissima; ex tracts; bacteriostasis
　　长松萝 (Usnea longissima )是松萝科松萝属地
衣类植物。全株为藻类和菌类共生结合成的大型地
衣丝状体。其味苦、性凉、无毒 ,具有清肝、化痰、止血
解毒等功效。 长松萝含巴尔巴地衣酸 ( Ba rbatic
acid)、松萝酸 ( Usnic acid)、地弗地衣酸 ( Dif f ractaic
acid ) ,拉马酸 ( Rama lic acid)、地衣聚糖 ( Lichenin) ,
原冰岛苔酸 ( pro tocet ric acid )等 ,此外还含碳水化
合物 [1- 3 ]。长松萝在西藏产量很大 ,现在除松萝酸用
于中药外 ,其他内含成分还未得到开发利用而丢弃
浪费 ,对其进行综合开发利用还有很大潜力和空间。
本文主要报道了长松萝浸提物对细菌、霉菌、酵母菌
和植物病原菌的抑菌作用 ,为长松萝成分的提取和
利用提供依据。
1　材料与方法
1. 1　长松萝样品采集
长松萝采集于西藏色季拉山 ,阴干 ,备用。
1. 2　供试菌种
所用菌种由西北农林科技大学微生物实验室提
供。 供试菌种有:金黄色葡萄球菌 ( Staphylococcus
arueus ) ; 大肠杆菌 ( Escherichia coli ) ;假丝酵母
( Candida sp. ) ;青霉 ( Penicil lium sp. )和西瓜枯萎
病原菌 ( Fusarium oxysporum f. sp niveum Snyder
et Hansen)。
1. 3　培养基的制备
1. 3. 1　细菌培养基　牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 [4 ]:
牛肉膏 1. 5 g ,蛋白胨 5 g , NaCl 2. 5 g,琼脂 10 g ,水
500 mL,灭菌 ,备用。
1. 3. 2　霉菌、酵母菌与病原菌培养基 [4 ]　马铃薯琼
脂培养基:将削皮马铃薯 100 g切成薄片 ,加 500 mL
水煮沸 20 min,取汁加入葡萄糖 10 g、琼脂 10 g ,溶
解 ,用水定容至 500 mL, pH自然 ,灭菌备用。
1. 4　实验仪器
SENCO, R系列 ,旋转蒸发仪 ; SEN CO. W201
恒温水浴锅 ; SHB-Ⅲ ( A)型循环水多用真空泵 ;电
热恒温水浴锅 ; LS-B50L型立式压力蒸汽灭菌器 ;
电热恒温培养箱 ; 101-1型干燥箱 ; SW-CJ-ZB型单
人单面净化工作台。
1. 5　长松萝浸提物的制备
分别将 1 g干长松萝剪碎 ;浸于 10 mL苯、乙酸
⒇ 收稿日期: 2006-03-10　修回日期: 2006-03-31基金项目:中日合作课题“以固定 CO2为目的的绿化研究” ( 160101)
作者简介:苏印泉 ( 1954-) ,男 ,陕西白水人 ,教授 ,主要从事植物资源利用研究。
乙酯、乙醇、水等 4种溶剂中 ,于 60℃恒温浸提 12 h,
重复 3次 ,收集滤液 ;将浸提液于旋转蒸发仪上浓缩
至 15 mL,待用。
1. 6　供试菌液制备
1. 6. 1　细菌菌液、酵母菌菌液与病原菌菌液制备 [ 5]
取活化好的菌种斜面 ,用无菌水制成菌浓度约
107～ 108cfu /mL的菌悬液 ,备用。
1. 6. 2　霉菌孢子悬液制备　将霉菌斜面用无菌水
制成孢子悬液 ,孢子浓度约 107个 /mL,备用。
1. 7　实验方法
浸提物的抑菌作用实验方法 [6, 7 ]
将新华 1号滤纸用打孔器打成直径 6 mm的纸
碟 ,高压湿热灭菌后 ,烘干。
将纸碟若干分别浸于 4种浸提浓缩液和苯、乙
酸乙酯、乙醇、水等 4种溶剂中 ,浸泡 4 h,用无菌镊
子夹出 ,备用。
取上述制备好的菌悬液或孢子悬液 1 m L,与相
应的融化好冷至 55℃左右的培养基在培养皿中混
菌 ,冷凝待用。
在每种菌的培养皿中每隔 2 cm距离放置浸于
苯、乙酸乙酯、乙醇及其长松萝浸提浓缩液的纸碟 ,
作两个重复皿。
细菌置于 36℃培养 24 h,培养皿内长菌后 ,观察
并记录结果。
酵母菌置于 27℃培养 24 h,培养皿内长菌后 ,观
察并记录结果。
霉菌置于 26℃培养 24 h,培养皿内长菌后 ,观察
并记录结果。
病原菌置于 28℃培养 24 h,培养皿内长菌后 ,观
察并记录结果。
2　结果与分析
在实验中发现 ,水浸提物对 5种测试菌 (图 1)均
没有抑制作用。苯、乙酸乙酯和乙醇浸提物对 5种菌
的抑制效果 (表 1) ,不同浸提物对各种菌的抑制效果
方差分析 (表 2)。
图 1　水的浸提物对大肠杆菌的抑制作用
Fig. 1　 Th e inhibi ting ef fect of w ater ex t ract w ater on
Escherichia col i
表 1　浸提物对各种菌的抑制效果方差分析
Tab le 1　 Th e d ouble factors v ariance analysi s of inhibi ting
ef feds of ext racts on dif ferent fungi
变异来源 平方和 自由度 均方 F值 显著水平
菌种 473. 56 4118. 39 53. 81 0. 00
浸提物 60. 98 2 30. 49 13. 86 0. 00
菌种×浸提物 33. 24 8 4. 16 1. 89 0. 05
误差 66. 00 30 2. 20
总变异 633. 78 44
表 2　浸提物对各种菌的抑制效果多重比较结果
Table 2　 Mul tiple com paris on of inhibi ting ef fect s
of ex t racts on dif ferent fungi
菌种×浸提物 抑菌圈 /cm 1%极显著水平
金黄色葡萄球菌×乙醇 20. 67 A
金黄色葡萄球菌×苯 19. 33 AB
大肠杆菌×乙醇 16. 00 B
金黄色葡萄球菌×乙酸乙酯 15. 67 B
大肠杆菌×苯 14. 00 BC
假丝酵母×乙醇 13. 00 BCD
大肠杆菌×乙酸乙酯 12. 00 CDE
西瓜枯萎病原菌×乙醇 12. 00 CDE
假丝酵母×乙酸乙酯 11. 00 CDE
西瓜枯萎病原菌×乙酸乙酯 10. 00 DE
青霉×乙醇 10. 00 DE
青霉×苯 10. 00 DE
假丝酵母×苯 10. 00 DE
西瓜枯萎病原菌×苯 9. 00 E
青霉×乙酸乙酯 9. 00 E
　　注:表中不同大写字母代表 0. 01水平差异显著。
从表 1中可以看出 ,不同菌种对浸提物的抑制
反映差异极显著 ,浸提物对菌种的抑制效果差异极
显著 ,不同菌种×浸提物组合效果差异显著。
从表 2中多重比较结果表明 ,用苯、乙酸乙酯和
乙醇对长松萝进行浸提后的浸提浓缩液对西瓜枯萎
病原菌、青霉、假丝酵母、金黄色葡萄球菌和大肠杆
菌均有抑制作用 ,其中对金黄色葡萄球菌表现出较
强的抑制作用 ,对西瓜枯萎病原菌、青霉、假丝酵母
和大肠杆菌的抑制效果一般。 其中金黄色葡萄球菌
×乙醇组合值 ( 20. 67 cm )最大 ,说明在所有组合中
乙醇浸提物对金黄色葡萄球菌抑制效果最好。同时
从表 2中可以得出乙醇浸提物对其余几种菌的抑制
效果好于苯和乙酸乙酯浸提物。
综上所述 ,乙醇浸提物对 5种菌的抑制作用 (图
2)是最好的 ,而在 5种菌中对金黄色葡萄球菌的抑
制效果最佳。
(下转第 159页 )
155第 5期 苏印泉等　西藏长松萝浸提物抑菌作用研究
表 3　提取次数与相对总酚含量的关系
Table 3　 Relation of ex t ract times
and comparative ex t ract ratio n= 3
提取次数 总酚含量 总酚相对含量% 总酚累计含量%
1
2
3
0. 996 0
0. 296 3
0. 022 0
75. 78
22. 54
1. 67
75. 78
98. 33
100
3　结论与讨论
用水作为提取溶剂对普那菊苣中的酚类化合物
的含量各因素的影响程度是: 料液比> 提取温度> 提
取时间。提取总酚的理想温度为 80℃ ;在单因素试验
的基础上 ,通过正交试验优选了以水作为提取溶剂提
取普那菊苣样品中总酚的最佳工艺条件 ,即提取次数
2次 ,提取料液比 1∶ 15,提取温度 80℃ ,提取时间 2
h。总酚含量达 1. 403 6% 。在最佳提取条件下提取 2
次 ,酚类化合物提取得率可达 98. 33%以上。
福林法测定普那菊苣样品中的总酚是一种既快
速又精确的方法 ,测 1个样品只需 120 min。 该提取
液不经任何处理 ,直接使其中酚类与福林试剂作用
进行测定 ,避免测定过程酚类少受损失。并且 ,该法
测定简单 ,适合大批样品处理测定。样品粉碎粒度要
细 ,否则 ,叶脉叶片混合不均 ,会造成测定误差。
加热回流提取法不仅可使酚类化合物得到有效
的提取和分离 ,为其工业化生产提供参考 ,而且对普
那菊苣中的其他成分无破坏作用 ,还可以用于提取、
检测、分离其他有效成分 ,因而更有利于资源的综合
利用。
参考文献:
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(上接第 155页 )
图 2　乙醇的浸提物对金黄色葡萄球菌的抑制作用
Fig. 2　 The inhibiti ng eff ec ts o f ex tract ethanolon Staphy lococcus . arueus
3　结论
试验结果显示 ,长松萝浸提物对金黄色葡萄球
菌显示了较强的抑制效应 ,对大肠杆菌、霉菌、酵母
菌及病原菌有抑制作用 ,但抑菌效果一般。 因此 ,长
松萝提取物可以开发为抑菌药物 ,也可以用于粮食
制品和饲料的防腐剂 ,甚至可以用作医药上某些活
菌制剂的防霉变添加剂 ,也可作为生物农药开发。
从 4种溶剂对长松萝浸提物的抑菌效果来看 ,
其抑菌圈直径相差比较大 ,比较来说乙醇浸提物抑
菌效果最好 ,且乙醇价格较便宜 ,又能回收 ,应用于
生产既可降低成本又不产生污染 ,利于应用推广。
参考文献:
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