全 文 ：长松萝多糖清除氧自由基和抗脂质过氧化反应的研究
西安交通大学药学院 ( 西安 71以万l )边晓丽 靳菊情 丁东宁 张红梅 `
摘要 目的 :对长松萝多糖 ( 1〕t 1s )清除氧自由基 、抗脂质过氧化作用进行研究 。 方法 :采用黄嗦吟一黄嗦吟氧化
酶体系测定 P U S对超氧阴离子 自由基的清除作用 , 采用 eF not n 反应体系测定 PU S对经自由基的清除作用及其对轻
自由基诱发的小鼠肝匀浆脂质过氧化反应的影响 。 结果 : 长松萝多糖对超氧阴离子自由基及经 自由基均有清除作
用 , 其百分之五十抑制浓度 Iha 分别为 0 . 45 m岁而 和 1 . 57 n l岁mI , 但对经 自由基诱发的小鼠肝匀浆脂质过氧化反应
的抑制作用较弱 。 结论 : PU S对氧自由基有明显的清除作用 ,但在 eF not n 反应体系中抗脂质过氧化作用较弱 。
关键词 长松萝多糖 超氧阴离子自由基 羚 自由基 脂质过氧化反应
多糖是一类具有高活性的大分子物质 , 具有抗
肿瘤 、抗凝血 、 刺激免疫和降血糖等活性〔’ 〕。 长松萝
多糖 ( oP ly s ac hc 丽d e of us en a 勿飞娜 s~ Ahc
. ,
uP )S 是
从松萝科松萝属植物 ( us ne a 肠飞娜3~ cA h
.
)中提取
分离出的活性多搪图 。 为进一步探讨长松萝多糖的
药用价值 ,本文就长松萝多糖体外对超氧阴离子 自
由基 ( su pe oxr ide an ion fer e adr ic al , s A皿 ) 、 轻 自由基
( h y d o xy l fer
e 耐ic al , H FR )的清除作用 以及对 HF’R
诱发的脂质过氧化的影响进行研究 。
1 实验材料
长松萝购于陕西省眉县槐芽药材公司 ,经鉴定
确认为长松萝 us ane 肠刀g 砧 5~ A ch
. 。 棚皮素由西安
交通大学药学院天然药化室提供 。 甘露醇为山东 日
照洁晶集团公司产品 。 黄嗓吟氧化酶为 is gm a 公司
产品 。 次黄嗓吟为上海试剂二厂产品 。 硝基四氮哇
蓝 ( N群 )为前进化学试剂厂产品 。 其它试剂均为国
产分析纯 。 昆明种小鼠 , 体重 23 士 2 9 , 由西安交通
大学医学实验动物中心提供 , 动物合格证为陕动证
字 08 - (兀瞬号 。 7 52 紫外光栅分光光度计为上海第三
分析仪器厂产品 , PH S一 3 C 型酸度计为上海雷磁仪器
厂产品 。
2 方法
2
.
1 长松萝多糖的制备 取长松萝干粉 , 经三氯
甲烷抽提 , 药渣风干后 , 70 一 80 ℃水提 3 次 ,提取液
减压浓缩 , 经 乙醇沉淀 , 沉淀用无水乙 醇和丙酮洗
涤 , 得粗多糖 。 粗多糖通过微晶纤维素柱 , 用水洗
脱 , 流出液再用乙醇沉淀 ,分出沉淀后用无水乙醇洗
3 次 , 丙酮洗两次 , 真空干燥得精制长松萝多糖 。 经
硫 一酚法测得多糖含量为 89 5% ,实验时用二次蒸馏
水溶解 。
2
.
2 SA FR 的生成与清除 实验 参考文献方法图
略作修改 ,反应体系为 0 . 1 mo F L 磷酸缓冲液 l 耐 ,
p H 7 4
,
3
.
5 x l少mo l/ L 次黄镖吟 0 . 4 司 , 2 . x x 一。一3
mo l/ L N BT 0
.
4 间 , 待测药液 l 血 。 25 ℃水浴恒温 or
1 88
而m ,加人 O . 35 U /血 黄嗓吟氧化酶 0 . 2 耐 ,空 白组
以蒸馏水代替黄嚷吟氧化酶 , 5印 nI 处测吸光度 A
值 ,以 △灯 m in 表示反应速度 v , 按下式计算抑制率
( nI % )
: 玩% = ( v0 一 v ) / V ( , x l o % , v0 为以蒸馏水
代替待测药液时的反应速度 , V 为加人不同浓度药
液时的反应速度 。 由 nI % 一浓度曲线得出抑制 50 %
时的浓度 xC , 。
2
.
3 HF R的生成与清除实验 采用 凡 n t on 反应体
系〔 4〕 , 0 . 7 5
mo
F L 磷 酸缓 冲液 1 . 5 耐 , p H 7 . 4 , 2
~
o F L ED T AN a
一
eF 1 0
.
7 时 , 2印 拜岁而 碱性桃红 T
0
.
2 耐 , 3 %玩仇 0 . 8 而 , 供试药液 0 . s iln ,混匀 , 37 ℃
保温 30 m in 后 ,空 白组 以蒸馏水代替待测药液 , 对
照组以蒸馏水代替 E】y l,AN a 一 eF H , 在 520 nl 处测吸
光度 A 值 。 按下式计算抑制率 ( nI % ) : nI % 二 ( A对
一 A样 ) / A对 x l o %
,
A对 为以蒸馏水代替 E D T AN , eF
fl 时的吸光度 , A样 为加人不同浓度药液时的吸光
度 ,并由 nI % 一浓度曲线得出 I与 。
2
.
4 抗脂质过氧化反应体 系 采用 eF in on 反应体
系产生 H FR , BT A 法川测定供试药液对小 鼠肝匀浆
U 汉〕的抑制作用 。 2 ~ l/
L E l )TAN a
一
eF 1 2
.
0 间 ,
3% 珑仇 , 0 . 01 ~ 心 L p H 7 . 4 磷酸缓 冲液 1 . 0 时 ,
10 % 小鼠肝匀浆 0 . 5 时 ,供试药液 0 . 3 d ,混匀 , 37 ℃
保温 30 而 n 后 ,加人 20 % 醋酸 1 . 2 时 , 0 . 5% 的硫代
巴比妥酸 2 . 0 而 , 95 ℃水浴 中加热 60 m in , 冷却后 ,
用 30 耐 正丁醇抽提振荡 l m in , 3仪幻 rp m 离心 or
m in
,取正丁醇层在 5 30 nl 处测吸光度 , 空 白组以蒸
馏水代替 姚 0 2 ,对照以 蒸馏水代替药液 , 按下式计
算抑制率 ( nI % ) : nI % = ( A对 一 A样 ) / A对 x lo % , 戈寸
为以蒸馏水代替 H Z仇 时的吸光度 , A样 为加人不同
浓度 药液 时 的吸 光度 , 并 由 nI % 一浓 度 曲线 得 出
IC印 。
3 结果
3
.
1 自由基清除作用 UP S 对 SA FR 和 H FR 均有
明显的清除作用 ,且呈量效关系 , 其 I与分别为 0 . 45
中药材第 25 卷第 3期 2X(] 2 年 3 月
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 2002. 03. 018
m岁耐 和 1 .5 7 1 119 / 耐 ,分别小于阳性对照物棚皮素
和甘露醇 ,见表 l 和表 2o
表 1 P U S 对 SA F R 的清除作用
试药
UP S
剂量 ( m留而 ) 抑制率 ( nI % ) I与 ( m留间 )
0
.
2
0
.
4
0
.
6
0
.
7 5
19
.
4 士 1 . 7
4 3
.
2 士 2 . 4
68
.
5 土 1 . 8
8 9
.
6 士 2 . 1
0
.
4 5
懈皮素 2 . 75
表 2 P U S 对 H F R 的清除作用
试药 剂量 ( m『间 ) 抑制率 ( nI % ) I嘶 ( m留间 )
P US 0
.
8 24
.
6 士 1
.
0 1
.
57
1
.
2 38
.
8 士 0 . 8
1
.
6 5 1
.
1士 0 . 8
3
.
2 63
.
7 士 0
.
9
甘露醇 3 . 0’7
3
.
2 杭脂质过氧化作用 UP S 对轻 自由基诱发的
小鼠肝匀浆脂质过氧化反应 , 在较高浓度时只有较
弱的抑制作用 ,见表 3 。
表 3 P U S 对 L P O 的抑制作用
试药 剂量 (m留d ) 抑制率 ( nI % )
1
〕
L S 4
.
0 1 1
.
6 土 1 . 2
8
.
0 18
.
5 士 3 . 1
16
.
0 24
.
4 士 2 . 5
24
.
0 26
.
5 土 2 . 3
甘露醇 4 . 3 士 0 . 8 50 . 0
4 讨论
UP S 在实验体系中表现出明显的清除氧 自由基
的作用 ,但对轻 自由基诱发 的小鼠肝匀浆脂质过氧
化反应的抑制作用较弱 。 轻自由基的化学性质非常
活泼 ,尤其对脂质过氧化的作用最强 ,在抗脂质过氧
化实验中 ,轻 自由基作用于细胞膜脂质的不饱和脂
肪酸诱发脂质过氧化反应 ,而与 UP S 反应则为抗氧
化作用 ,二者为竞争反应 , 可能由于 自由基与膜脂质
不饱和健的反应速度比与多糖大分子中醇轻基的反
应速度更快闻 , 因此 , uP s 对轻自由基有 明显的清除
作用 , 但 对 HFR 诱 发的脂 质过氧化反应作用却很
弱 。 在生物体系 中 , H FR 是 SA F’R 经 Hia 悦卜 we is s 反
应而产生的囚 , uP s 对 s AF’R 有明显清除作用 , 能否
通过阻断 SA皿 而发挥抗 氧化作用 , 有待进一步探
讨 。
` 山东鲁抗制药厂
参 考 文 献
irS
v as vat
“
R
,
et 公 iB二 it ve po ly sac c h面des if n m lP ant . 孙 y -
oct he 而 s卿 , 1卯8 , 28 : 28 7
丁东宁 ,等 . 长松萝多糖的研究 . 天然产物研究与开发 ,
19 2
,
4 (4 )
:
3
oR l刃改 J , et al . 凡va o ino des 毗 鱿va e n g e邝 of s t lpe ~ de an -
io ns
.
Bi oc he m R u
n l u e o l卿 , 19 88 , 37 (5 ) : 837
秦德安 ,等 . 橙皮昔对经自由基的清除作用 . 中国药学
杂志 , l卯 6 , 3 1 (7 ) : 3%
P
a
kr
s
D A
,
et al
. 攻he 而 a in d u e ed v asc d ar e han ges : olr e of
x 朋 th ine 面d之议 朋d 场而 x yl r a id c alS . A川 J hvP iso l , 1% 9 ,
2 4 4 : 以又9
( 2X() 1
一
09
一
21 收稿 )
S ot dy on ht e s 汾 v e叼ng cA it on of OP ly sa c e抽的ds of sU nea 勿雌加动姐
ot o 叮g e n F匕d i回 即d stI A刀廿击 p id pe r o对山廿。 n E巧eC st
Bian 兀ao li , Jin Ju中飞 , D i n g oD l l邵11飞 , Z h an g OH l l gn l e i
( C ol es of p l
l明1 1a e y , 儿 ’ an Jiaot o嗯 u 苗 v esr iyt , 兀 ’ an 7 1(x拓 l )
A加七 aC t Obj ce ivt e : oT st vdu het cs va
e卿gn ac iot n of 州y acs c ll iar de of sU ane 肠刀召钻`~ cA h . (UP )S ot oxy ge n if ℃ e ar id cal adn ist
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ht 此 : hT e cs va e硒嗯 ac it on ot s u详~ d e 画 o n 旋 e m d ic al ( o 三) aws tes det by x aJ l t卜j-ne x al l t拓 n e
而 d ase sy et m . hT e cs vae 峪 gn ac iot n on 11y d or x yl fer e , ic al ( O .H ) a l l d ant i一 inI 记 pe ~ d a t io n e fe c st we er et s tde 场 eF ont n er ac it on . eR -
刘 st : 仆 e 、 vae igr gn ac iot n ~ , p~ nt de 场 het coent in cs
a ve ign gn 50 % of al het fer
e l习 d ic al( I嘶 ) . hT e l与 ofr o 三adn O .H ~ 0
.
45
m留司 an d 1 . 57 111酬耐 似详 C t ive ly . hT el in dpe ~ dat in in dn cu de 场 O .H ~ we akl y i而 ib det 场 UP S . oC cn lus io n : UP S c an a p l笼 rL℃ ivln
cs a v e n罗 o x y罗 n f论 e r a rlle al . But i t e an o司 y w e ak y i雨 bi t ht e lip id 详 or 石dat i on Of h e p a toc yt e h o m o g e ant e of 而 e e w卜ie h er sul det of mr h y -
dor x y l fer
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iadr cal
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K e y ow n】5 olP y acs e ll面 de of sU aen 肠刀却` `~ cA h
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中药材第 25 卷第 3期 2印 2年 3月