全 文 ：中西医结合肝病杂志 ZQ旦卫赛赛坦堂笙立塑 15 7
飞天娱蛤七对肝纤维化大鼠醛固酮的影响 ’
崔大江 王志勇 聂丹丽 邓 敏
西安交通大学第二医院中医科 (陕西 西安 , 71 0 04
摘 要 目的 : 探讨飞天娱蛤七对肝纤维化大鼠醛固酮 (八 L l〕) 的影响 。 方法 : 实验分为正常对照组 、 肝纤维化
组 、 飞 天娱蛤七组 。 用复合因素制备肝纤维化模型 , 飞天娱蛤七 组每 日按 10 m g’ k g 一 ’ 制成 1耐 溶液灌 胃 , 观察其治
疗肝纤维化的作用 。 结果 : ① V G 染色 , 网状纤维染色可见飞天娱蛤七组肝纤维化程度明显降低 (尸 < 0 . 0 1 ) 。 ②肝纤
维化组血清 , 肝组织 A L】〕水平较正常对照组明显升高 (尸 < 0 . 0 5) ; 飞天娱蛤七组与正常对照组相比 , 血清、 肝组织
A】」) 均升高 (尸 < 0 . 0 5) 。 结论 : 飞天娱蛤七对肝纤维化有改善作用 , A l工〕在血清和肝组织均升高 , 可能是由于其拮
杭 A L I〕受体 , 导致 A L I〕代偿性增加所致 。
关键词 中医学 ; 肝硬化 ; 飞天娱蛤七 / 药效学 ; 醛固酮 ; 大鼠
E f fe e t o f A r a l i a C h i n e n s i s L
.
o n A l d o s t e r o n e o f R a t s W i t h H e P a t i e F i b or s i s
C lU l又砂敌 gn , V区A从了 hZ Z , m g , N I E 公 z耐 i , et al . 及于户Z rt m 。 比 of 了) 飞汉 l i t如故Z以 in es 八轰叉才ic ne , 5改u dn 从巧两似 Z of
iX ,a
n 了姗 ot gn lrU i~ i yt (撇 a o iX ,a n , 71 0 04 ) o ina
A加 tar e t o bj ec t ive : OT in v es t i , t e t h e fe feC t o f A ar lia 以 i n en s打 L . o n al d , t e onr e ( A L D ) o f ar t s 俪 th h e p a t i。 fi bor -
5 15
.
M e t h仪七: R a t s w e er d ivi d司 i n t o n o n l l a l con t or l g r o u p
,
h e P a t ie fib心 is m ( x」el 9 1飞又甲 a n c】A ar l故以 i n ensz s L
.
g r o u p
.
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u n d a脚 t s . A ar z放 凸 i n o s i、 L . o f 1 00哩 · k g 一 丁 ( m a k e in t o l m l ) was g i v en ea e h da y
b y i nj ec t ion i
n t o t h
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om
a e h o f ar st
.
T hen t
o a玩 e o e it s th ear 伴 u t ie ef feC t on h e p a t i e f i bosr is ar t s
.
R es u lst : ① T he 『ad e o f
h e哪 t i。 f ib o is wa s 5 1卯i fica n t ly dec l钱江肥」i n t h e S t u d y g r O I Jp b y V G s t a in (尸 < 0 . 0一) . ②块 r Ll l l l a n (」t is u e AI J D le v e ls ~
, 基金项 目 : 陕 西省科委自然科学基金资助课题 ( Zo 0 S M 44 )
抗作用是否经 I G F I 环节调节 , 抑或 IG -F 1表达降低
只是 I L OI 作用后肝纤维化程度降低的伴随现象 , 目
前仍不清楚 , 其相互关系仍需进一步研究 。
参考文献
1 F
r
i。山1` I n S L . C y r o k i n e s an d if b n 〕 g e n es i s . s 知 i l iv er D i s , 19 9 9 ,
1 9
:
12 9 一 14 0
2 李丹 , 张莉娟 , 陈治新 , 等 . 实验性大 鼠肝纤维进程 T N F . a 、 -I 一6
与 IL 一 10 的作用 . 世界华人消化杂志 , 20() 1 , 9 ( l ) : 12 4 2一 1 24 5
3 八路 y N , H洲 : h b e艰 Z , A m i t T , 以 a l . G二州h ho ~ n o s r im u la t e d
in s u }i n
一
lik e g r 。 叭 rt h f a e t o r ( IG F ) 1 an d I G F
~
b ind i昭 p ro t e i n 一 3 in live r
e i r r h o s is
.
J H e p a t o l
,
1 9 9 7
,
27 : 7 9 6 一 8 0 2
4 M u即 e哪 B , C提巧 t i lla 一肠 rt ~ I
,
G a r e i a M
,
et a l
.
nA
t i f ib l飞〕g e n i e e f -
fcet i
n 训vo o f low d撇 5 o f i ns u li n 一 like g r o w t h f ac ot r 一 1 in e ir ho t i e ar t s .
B i
《x 妇im B io Pl l y s A e t a , 2 0 1 , 15 3 6 : 18 5一 19 5
5 ( )
s t illa
一肠 rt azr l , Gacr i a M , M ug u e陇 B , et a l . H e p a to P ro t ec t iv e
d fec t s o f ins ul i n
一
lik e g ro wt h f
a e t o r 1 i n ra ts w i th e 月 r lx〕 n t e t rac h lon d
e
-
ind
u e司 e ir h o s is . (3是巧 t roe n t e ro lo gy , 19 9 7 , 16 : 16 8 2一 16 9 1
6 1糊 R , W i ll iams E
,
rT im N
,
et a l
.
A l ) 〕p to s i s o f h e p a t i e s t e lla t e
ce ll
s : ivn
o lv ern ent i
n
~
lu t ion
o f b il ia 以 fib ros is an d r e g j la t i o n by 刻 -
u b le g r o w t h f ac to 仆 . G u t , 2 0() 1 , 4 8 : 5 4 8一 5 5 7
7 vS 馆 1ia t i ~】玉u l 〕n i G , R ido lf i F , n aS r io A , e t a l Insu li n a n d insu l压n
-
1ik e g n 〕wt h fa
e to r 1 s t im ul a t e p ro li位rat io n a n ` 1 t y l关 I 伪11限 en ac e um ul a
-
t io n b y h
uman
h e aP t i e s t e lla t e e e ll s : d i ffe r e nt 讨 J feC t s o n s ig nal t r ans
-
d u e t ion P
a t h w a y s
,
eH P
a ot 1O g y
,
19 9 9
,
2 9
:
17 4 3一 17 5 1
8 (〕n l l月 r ds o t t i r s , lj u l lg g r e n o , M习Im i n LI , et a l . C i rc u la t i叱 lve e ls
o f i愁u li n 一 lik e g n 〕州 h fa e to rs an d the ir b in d i眼 p rot e i n s i n p a t i e n t s w i t h
e卜n 〕 n i e l ive r d i
sea
:
lac k o f co re l
a t i o n w i t h 比n e m i n e喇 d e愁i r y .
L i v e r
,
2 0 0 1
,
2 1 : 1 2 3一 1 28
9 1 )〕 n 日g h y A , Ros R
,
G i n 眨汇” I A , et a l . G o wt h 比orm n c
,
ins u ]in
-
lik e 9 1飞〕 w t h faC t
o r
一
1
,
an d ins u lin like g 代筋沈h fac t o r b ind i飞 p ro t e ins l
an d 3 i n e l
l r o n i e li v e r d i
~
.
eH aP to 」。 gy , 1 99 5 , 2 1 : 6 80 一 6 8 8
10 陈治新 , 张莉娟 , 陈运新 , 等 . 胰岛素样生长因子 一 1 受体在实验
性肝纤维化中的表达及 IL 一 10 的干预作用 . 福建医科大学学报 ,
2 0 0 2
,
3 6 ( 2 )
:
13 4一 1 3 6
1 张莉娟 , 王小众 , 黄月红 , 等 . 白介素一 10 对实验性肝纤维化的
影响 . 中华消化病杂志 , 20 2 , 2 : 17 9一 18 0
12 陈治新 , 张莉娟 , 陈运新 , 等 . I L 一 10 对实验性肝纤维化大鼠转化
生长因子 日; 表达的影响 . 中西医结合肝病杂志 , 2 0 02 , 12 ( 2) :
9 2一 9 4 (收稿 日期 : 2 003 一 0 1 一 09 编辑 : 姚昌经 )
1 5 8史酉医笙宣丑应全查卫QQ 3 年第1 3 卷第3 期
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n价 , s打 L . 1笼` e e r t a in t hear 详分 t i e e f f ec t on t h e h e洋 t i e if b n治 15 in ar st .
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o n如 T 〔!M 丘 ien ce ; A ar 阮 以 i~ 五: L . 用h a n l l a以 l yn ~ cs ; H e p a t ic iF b二 15 ; 月 d , t~ e ( ADL ) ; aR t
近年研究表明 , 肝组织含有醛固酮 ( al do et ~ e ,
A l
一
D ) 受 体 , 肝 星 状 细 胞 ( h e p a t i c S t e l l a t e c e ll ,
H sc ) 可 合成 ADL lj[ , 故研究 ADL 在肝纤维化发
生 、 发展过程中的变化具有重要意义 。 本实验拟观察
飞天娱蛤七对肝纤维化大鼠醛固酮的影响 , 探讨了解
飞天娱蚁七对大鼠肝纤维化的影响。
1 材料和方法
1
.
1 实验分组及模型制备 雄性 S D 大鼠 81 只 , 购
自上海 B 一K 公司 , 平均体重 ( 2 41 士 27) 9 , 清洁级
动物 。 大鼠随机分为 3 组 : ①正常对照组 ( 10 只 ) :
正常饮食 , 皮下注射花生油 , 量同肝纤维化模型组 ;
②肝纤维化模型组 ( 45 只 ) , 按 《中药药理实验方法
学》 用复合因素造成肝硬化 。 实验第 1 天皮下注射
4〔) ( )m l · z 一 ’ e C I; 花生油溶液 s m l · k g 一 ` , 以后 每隔 3
天皮下注射 40 m l · I少 ’ C 玩花生油溶液 3m l
·
k g
一 ` ,
以 7 9 5 9 · k g 一 ` ( 7 9 . 5% ) 单纯玉 米粉 、 2 0 0 9 · k g 一 `
( 2 0
`川 猪油及 5 9 · k红 ’ (0 . 5 % ) 胆固醇配成混合饲
料 , 白来水作饮料饲养动物 。 ③ 飞天娱蚁七 治疗组
( 2 6 只 ) , 造模 B[] _ L , 飞 天娱蛤 七 ( A r a l ia e h in e n s i s
1
. 西安神龙制药厂 提供 ) , 每 日按 1 o o g’ k g 一 ’ 制成
! ,司 溶液灌胃。 每周 2 、 3 组各随机处死 2 一 3 只大鼠
作病理检查以确定造模成功及了解肝纤维化分期 。 按
病理检查达肝纤维化期时 (第 5 周末 ) , 正常组 (存
活 9 只 ) , 肝纤维化组 (存活 10 只 ) 及飞天娱蛤七组
(存活 8 只 ) 全部处死取肝 , 断头处死前眼球采 血 ,
检测 一卜列指标 。
1
.
2 检测项 目和方法
l
.
2
.
I AI 一测定 肝尾叶 0 . 5 9 + 生理盐水 s nlr 制作
肝匀浆 , 4 ( )0 0 : · m l n 一 `离心 3 0 分钟 , 取 上清液 。 血
清 、 肝组织 A l 、 )I 含量采用放射免疫法测定 (放射免
疫试齐」盒购象!匕京北方免疫试剂研究所 ) , 严格按试
刹盒说明操作 。 肝组织 A L D 含量以每克组织 lA 力 含
气全表示 、
!
.
2
.
2 病理学检查 取肝右叶小块组织用 4 0 g’ L 一 ’
甲醛固定 , 石蜡包埋 , 5川n 切片做 EH 染色
、
V G 染
色和网状纤维 〔为m or i 染色 。 ① V G 染色 : 观察 工型
胶原增生程度 。 根据汇管区血管周围红染 区厚 度分
级 : ( ) 级 : < 5 : ; n 飞 ; l 级 : 5 一 10拼m : 1 级 : > 10 一
15 ,
, ;二 ; 日I级 : > 15 2, m 。 ② 网状纤维 oG rn o r i 染 色 :
观察 nI 型胶原增生程度 。 O级 : 无网状纤维增生 ; I
级 : 少数小叶的汇管网状纤维呈细纤状向肝小叶内延
伸 ; fl 级 : 较多小叶的汇管区网状纤维呈细网状向肝
小叶内延伸 ; 班级 : 多数小叶的汇管区网状纤维呈细
网状向肝小叶内延伸形成假小叶 。
每张切片随机选取 3 个视野 , 记录其病理分级 ,
取其平均值作为该动物肝脏的病理分级 。
1
.
3 统计 学方法 所有数据输人计算机 , 用 5 1〕5 5
软件包进行统计分析 。 计量资料结果以 至士 、 表示 ,
两组间均数比较采用 t 检验 , 多组间均数两两比较采
用单因素方差分析组间 q 检验 。 进行方差分析前 首
先进行方差齐性检验 。 计数资料采用秩和检验 。
2 结果
2
.
1 一般情况观察 实验期间 , 对照组 大鼠死亡 1
例 , 系意外死亡 。 纤维化组大鼠精神差 , 活动少 , 发
育迟缓 , 体重 ( 18 5 . 0 士 26 . 0) 9 减轻明显 , 与对照
组大鼠体重 ( 3 71 . 6 士5() . 7) 9 比较 , 尸 < 0 . ()l , 一匕天
娱蛤七组大鼠精神 、 活动 、 发育均好于肝纤维化组 ,
7 周末时体重为 ( 19 1 . 3 士 9 . 6) 9 , 较肝纤维化组有
所好转 , 但统计学无差别 (尸 > 0 . 0 5 ) 。
2
.
2 飞 天娱蛤七对肝纤维化大 鼠肝脏病理学的 影响
2
.
2
.
1 大体标本 肝纤维化组与正常对照组 比 , 月「
组织表面光亮度下降 , 颜色暗红且边缘不规 , 质脆 、
体积缩小 , 肝表面可见针尖大小的结节 。 一 坛天蚁蚁七
组大鼠肝脏在色泽 、 质地 、 大小及表面光滑度方而较
肝纤维化组均有明显改善 。
2
.
2
.
2 光镜检查 V G 染色 、 网状纤维染色 可 见纤
维化组肝脏 工 、 m 型胶原广泛存在于纤维间隔 , 包绕
肝细胞形成假小叶 , 而飞天蚁蚁七组 工、 1 型胶原明
显减少 , 纤维间隔形成不完全 , 未见假小叶 分另1通
过相应两种分级方法对肝纤维化组与 飞天蚁蛤 七红l进
行 比较 , 结果 (表 l) 显示 飞天娱蛤七可使 孟、 川型
胶原增 生程度明显降低 , 肝纤 维化分级降低 (I , (
0
. 〔川 。
H E 染色可见肝纤维化组纤维组织明显增 生 , 除
汇管区 、 纤维间隔以外肝细胞间梭形细胞数 {_ I增多 ,
汇管区及中央静脉周围可见大量炎性细胞浸润 , }衍 健
天娱蛤七组纤维组织增生不明 显 , 梭形细胞数 日少 ,
炎性细胞仅少量存在 。
159
表 1 飞天娘蚁七对大眼肝脏纤维组织增生程度的影响
肝纤维化分级
习巳 万U n
0 1 1 1
正常对照组
肝纤维化组
飞天娱蛤七组△△ 8 0
与肝纤维化组比 , △△ P < 0 . 01
2
.
3 各组大鼠 A L D 含量变化 肝纤维化组血清及肝
组织 A L D 较正常对照组显著增高 ( 尸 < 0 . 05 , 见表
2)
, 说明肝纤维化时 A L D 增高 , 对肝纤维化形成有
一定的致病意义 ; 飞天娱蛤七组与正常组比 , 血清 、
肝组织 A L D 亦升高 (尸 < 0 . 0 5 ) , 可能是由于飞天娱
蛤七拮抗 A l刀受体 , A L D 代偿性增多 。 与肝纤维化
组比 , 飞天娱蛤七组肝组织 A L D 显著增多 ( 尸 <
0
.
01 )
, 说明飞天娱蛤七可能主要是通过拮抗肝组织
A L D 受体发挥其抗纤维化作用 的 , 对血清 A L D 水平
影响不大 ( 尸 > 0 . 0 5 ) 。
表 2 飞天垠蛤七对肝纤维化大限血清及肝
组织 A l。 含 t 的影响 《王士 : )
组别 n 血清
A L D
( gn
·
L
一 ’
)
肝组织 A L D
(飞 · g 一 ’ )
正常对照组
肝纤维化组
飞天娱蛤七组
9 3 9 7
.
5 8士 10 3 2 5 8 2 4 士 1 . 3 3
9 4 9
.
7 9士 4 3 9 . 4 4 份
l 0 9 8
.
3() 士 5 9 4
.
8 8
.
2 0
.
0 1士 7 . 1 1 怪
9 6
.
8 8 士 3 2 . 5 8 备 △。
与正常对照组比 , , P < 0 . 0 ;5 与肝纤维化组 比 , △△尸 <
0
.
0 1
3 讨论
肝纤维化是由多种病因 (如病毒 、 乙醇 、 寄生虫
等) 引起的慢性肝损伤的不良后果 , 其实质是纤维结
缔组织 , 包 括 细 胞 外 基 质 ( e x t r a e e llul ar m at ir x ,
E CM ) 和细胞成分在肝脏过多沉积 。 这一过程有多
种神经体液因素的参与 。 近年来研究发现 , A L D 可
促进心脏 z[] 、 肺脏 〔3〕、 肾脏 [’] 等器官的纤维化 , 可
能是组织纤维化的一个重要发病因素 。 肝组织含有高
亲和性的 A L D 受体 [ 5 ]和 A L D 发挥作用所必须的 1 1件
经类固醇脱氢酶困 , 因此推测 ADL 有可能参与肝纤
维化的形成过程 。
研究表 明 , H SC 有 AL D 合 成 酶基 因 C Y P n
残m R N A 的表达川 , 说明 H咒 可产生 A l。 。 H sc 是
肝纤维化发生的细胞学基础 , 对肝纤维化的形成起主
要作用 , 是 E C] M 的主要产生细胞图 。 肝受损时 H咒
大量增殖 , 并且在致病因子的刺激下活化过渡为肌成
纤维细胞 , 表达多种受体 、 细胞因子 、 非肤类介质 ,
通过旁分泌形成介导细胞一细胞的相互作用 , 或通过
自分泌形式作用于自身 , 合成大量 E O M 。 H义合成
的 A L D 可能在肝纤维化的形成过程中发挥作用 。
飞天娱蛤七为五加科植物穗木的根皮 、 亦称穗木
白皮 , 中药大辞典以 穗木白皮收载 。 味微甘 、 一苦 、
辛 , 归肝 、 脾 、 肾经 , 一有健脾除湿利水之功 8[] 。 众
所周知 , 古今医家早已将健脾祛湿列为治疗肝病的重
要治法之一 。 以飞天娱蛤七为君药组成的方剂是我们
长期应用于临床治疗慢性肝病的有效方剂 , 既往通过
实验研究发现该方剂有较好 的防治肝纤维化的作
用 9[] , 为了进一步了解单味飞天娱蛤七防治肝纤维
化的作用机制 , 我们进行了本实验 。 从本实验结果可
以看出 , 飞天娱蛤七对实验性肝纤维化大鼠的一般情
况及病理学变化有一定的改善作用 。
本研究结果中 , 肝纤维化组大 鼠血清及肝组织
A L D 较正常对照组明显升高 ( P < 0 . 0 5 ) , 提示肝纤
维化时 , H S C大量增殖 , 生成 A L D数量增多 , 促进
肝纤维化形成 。 飞天娱蛤七组与正常对照组相比 , 血
清及肝组织 A L D 亦增高 ( P < 0 . 0 5 ) , 可能是由于飞
天娱蛤七拮抗 A L D 受体 , 导致了 A L D 代偿性增加所
致 。
参考文献
1 吴平生 , 梁欣伟 , 戴云 , 等 . 肝脏和肺脏醛固酮合成酶基因 C Y P : :
几 n识 N A 的表达 . 中华医学杂志 , 1 99 8 , 78 ( 8 ) : 620 一 6 2 1
2 uF nd
e r JW
. 月山招 t e功 n e , 翻 t a 』l d car d iac if b姗 5 . a in E x p H y l犯 r -
t e n ` , 19 9 7 , 19 ( 5 一 6 ) : 8 8 5一 8 9 9
3 赵力 , 赵鸣武 , 方秋红 , 等 . 安体舒通减轻博莱霉素 5A 引起的大
鼠肺纤维化 . 中华结核呼吸杂志 , 1998 , 21 ( 5 ) : 30 一 302
4 E stP ie
n M
.
A ld 飞 t e m n e 日n d t he h抓冲 rt ens ive K idn
e y : ist 曰刀 e gr ing
rD le as
a n货刁i a ot r of p找狠 r巴粥 Ive
~
l d邓 f u nc it on : a 卿adr i , ihs ft . J
H丸沁 rt
esn
,
20() l
,
19 ( 5 )
:
8 2 9 一 84 2
5 〔柏v a】D , F u n d e r 」W . 丁七e ib dn ign of t 6 t ia tde 目违粥 t e or 伙 in the art
liver
。 y ot os
.
E dn 比6卿城萝 , 19 7 4 , 94 ( 2 ) : 57 5~ 5 7 6
6 N肠 n d e r C . 浅忱明e耐 yt of l 民hy血卿 st ~ d 血hy dr 呛~ in artit s s u e s . J tS eor ;d B k℃hem M OI B沁1, 19 1 , 40 ( 4 一 6 ) : 5 3 3一 53 6
装新明 , 张盈涛 . 细胞因子在肝纤维化形成中的作用 . 医学综述 ,
19 9 9
,
5 ( 2 )
: 7 3 一 7 5
李 世全 . 秦岭 巴 山天 然药物志 . 西安 : 陕 西科技 出版 社 ,
19 8 7
.
3 4 3
聂丹丽 , 那敏 , 崔大江 . 清热祛湿 、 扶正活血对实验性大鼠肝纤
维化影响的实验研究 . 陕西中医 , 2X() 2 , 23 ( 6) : 567 一 569
(收稿 日期 : 2 0 3 一 03 一 07 编拜 : 牟 萌)