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金盏菊不同提取液体外抑菌作用初步研究



全 文 :中药与临床 Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica 2016;7(3) ·45·
金盏菊为菊科金盏花属植物金盏菊Calendula
officinalis L.的干燥全草。具有清热解毒、活血调经
的功效,主治中耳炎、月经不调等症[1]。金盏菊不仅
作为民间药收载于《云南中草药》、《中华本草》
等著作中,更作为一种国际传统药广泛应用于欧
洲。据文献记载,早在欧洲12世纪的《简单药物》
(欧洲草药第一部准药典)以及《关于不同植物和
草药的特性的书》著作中就有关于金盏菊药用价值
的记载[2]。国外学者对其做了大量研究,表明金盏菊
的花、叶均具有抗菌、消炎等药理作用[3~4],金盏菊
花在国外更是被制成各种药膏用于皮肤病如外伤、
感染等的治疗[2]。课题组前期已对金盏菊抗炎、止血
药理作用方面做了基础研究[5],其全草是否具有和花
相同的抗菌作用目前并未见文献报道。为了考察这
一点,本实验对金盏菊水提物和醇提物进行了体外
抑菌实验研究,为其资源开发利用提供科学依据。
1 材料
1.1 药材
实验用金盏菊于2013年3月21日采自四川省彭
州市丽春镇合江村,经成都中医药大学卢先明教授
鉴定为菊科金盏花属植物金盏菊Calendula officinalis
L.的干燥全草。
1.2 菌种
金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、绿
脓杆菌、沙门氏菌5种菌均由成都中医药大学病原微
生物与免疫学实验室提供。
2 实验原理与方法
2.1 实验原理
分别将一定浓度的金色葡萄球菌、表皮葡萄球
菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌5种菌接种到不
同浓度的含药平板上,于37℃温箱中培养24 h,观察
郑佳1,卢先明2,邓晶晶2
[摘要] 目的:考察金盏菊水提物和醇提物的体外抑菌作用。方法:采用2倍递增稀释浓度法检测金盏菊对金色葡萄球
菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌5种菌最低抑菌浓度(MIC)。结果:金盏菊醇提物在10倍稀释浓度
时对大肠杆菌、金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌有抑菌作用,最低抑菌浓度(MIC)为0.1 g.mL-1;金盏菊水提物在10倍稀
释浓度时对大肠杆菌有抑菌作用,最低抑菌浓度(MIC)为0.1 g.mL-1,其余稀释倍数均无抑菌作用。结论:金盏菊提取
液对这5种细菌的抑制效果较差,可能与金盏菊药用部位、提取溶剂及生长环境有关。
[关键词] 金盏菊;体外抑菌作用;醇提取液;水提取液
[中图分类号] R 285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-926X(2016)03-015-02
Study on the bacteriostatic effects of Jinzhanju extract in vitro /ZHENG Jia1, LU Xian-ming2, DENG Jing-jing2//(1.Leshan
Vocational and Technical College, Leshan 614000, Sichuan;2.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu
611137, Sichuan)
[Abstract] Objective: To study the bacteriostatic effects of water extract and alcohol extract of Jinzhanju in vitro. Method:
Minimal inhibitory concentrations of Jinzhanju extract were determined by double-fold dilution method on staphylococcus aureus,
staphylococcus epidermidis, escherichia coli, pseudomonas aeruginosa and salmonella typhimurium. Result: The MIC of alcohol
extract were 0.1 g.mL-1 for E. coli, S. Aureus and S.epidermidis at 10 times diluted concentration. The MIC of water extract was 0.1
g.mL-1 for E. coli at 10 times diluted concentration.Conclusion: Jinzhanju extract shows poor bacteriostatic effects on the tested
bacterium which may be related to the medicinal part, extraction solvent and growth environment.
[Key words] Jinzhanju; bacteriostatic effects in vitro; alcohol extract;water extract
金盏菊不同提取液体外抑菌作用初步研究
·药理毒理·
[作者单位] 1.乐山职业技术学院,四川 乐山 614000
2.成都中医药大学,四川 成都 611137
[作者简介] 郑佳 (1987-),女,硕士研究生,主要从事中药品
种、品质与资源开发研究
Tel:13980270251 Email:623432246@qq.com
[通讯作者] 邓晶晶(1982-),女,实验师,主要从事中药品
种、品质与资源开发研究
Tel:13880652682 Email:16640545@qq.com
[收稿日期] 2015-08-08
中药与临床 Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica 2016;7(3)·46·
各种细菌的生长情况,从而判断供试药的体外抑菌
效果。
2.2 实验方法与步骤
2.2.1 实验方法 首先用纸片扩散法进行粗筛,取直
径6 mm滤纸在各供试原液中浸泡后,分别接种在涂
布有各种供试菌的平板中,于37℃温箱中培养24 h,
培养后抑菌圈无或较小(d≤10 mm),说明抑菌作
用较弱;进一步采用2倍递增稀释浓度法检测金盏菊
最低抑菌浓度。
2.2.2 实验步骤
(1) 供试液的制备
称取金盏菊药材适量,平均分为2份,分别用
水、60%乙醇回流提取,浓缩制成含生药1 g.mL-1的
原药液,备用。
(2) 菌种的活化
各供试菌种需要在营养肉汤中转种、活化2~3代
备用。
(3) 供试菌液的制备
取活化后的5种菌种营养肉汤培养物,用灭菌生
理盐水稀释到104~105b CFU.mL-1菌液备用。
(4) 含药平板的制备
设定含药平板含药浓度分别为0 . 1、0 . 0 5、
0.025、0.0125、0.00625 g.mL-1,即取2 mL、1 mL、
0.5 mL、0.25 mL、0.125 mL供试原药液分别与0、
1、1.5、1.75、1.875 mL营养肉汤混合置于灭菌空
白平皿中,将已灭菌营养琼脂冷却至50℃左右,注
入18 mL/皿,充分混匀,分别得到10倍、20倍、40
倍、80倍、160倍稀释含药平板。
(5) 接种方法
用移液枪量取20 μL菌液点种在普通营养琼脂平
板及含药平板上,做三个重复。
(6) 培养与观察
于37℃温箱中培养24 h,观察并记录各类细菌的
生长情况。
3 实验结果
金盏菊体外抑菌结果见表1、表2。
表1 金盏菊水提液体外抑菌效果
菌落
含药平板稀释倍数 营养琼
脂平板10× 20× 40× 80× 160×
绿脓杆菌 + + + + + +
大肠杆菌 - + + + + +
沙门氏菌 + + + + + +
金色葡萄球菌 + + + + + +
表皮葡萄球菌 + + + + + +
注:“+”、“-”分别代表细菌“有”、“无”生长
表2 金盏菊醇提液体外抑菌效果
菌落
含药平板稀释倍数 营养琼
脂平板10× 20× 40× 80× 160×
绿脓杆菌 + + + + + +
大肠杆菌 - + + + + +
沙门氏菌 + + + + + +
金色葡萄球菌 - + + + + +
表皮葡萄球菌 - + + + + +
注:“+”、“-”分别代表细菌“有”、“无”生长
上述结果显示金盏菊提取液对这5种细菌的抑
制效果较差。金盏菊醇提物在10倍稀释时对大肠杆
菌、金色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有抑菌作用,最
低抑菌浓度(MIC)为0.1 g.mL-1;金盏菊水提物在
10倍稀释时对大肠杆菌有抑菌作用,最低抑菌浓度
(MIC)为0.1 g.mL-1,其余稀释倍数均无抑菌作
用。
4 讨论
从结果可知,金盏菊提取液对这5种细菌的抑制
效果较差。金盏菊醇提物仅对大肠杆菌、金色葡萄球
菌和表皮葡萄球菌有较弱抑菌作用;金盏菊水提物仅
对大肠杆菌有较弱抑菌作用。国外文献报道金盏菊
花、叶有较强的抑菌作用,并被制成各种软膏用于抗
菌、消炎。本次试验所用药材为金盏菊全草,并非单
一的花和叶,且批次单一,其抑菌效果差,可能与药
用部位选择、提取所用溶剂以及金盏菊所处生长环境
等有关,具体原因有待进一步研究。
[参考文献]
[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上
海:上海科学技术出版社,1998:751.
[2] 江首彦.欧洲德语区草药文献整理及奥地利中药处方分析
[D].北京:北京中医药大学,2008:39.
[3] Efstratiou E,Hussain AI,Nigam PS,et al.Antimicrobial activity
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Complement Ther Clin Pract,2012(18):173.
[4] 洪文旭.止血消炎金盏菊[N].中国中医药报,2009-7-16(010).
[5] 郑佳,卢先明,徐利,等.金盏菊的安全性评价及药效学研究
[J].成都中医药大学学报,2013,36(1):63.
(责任编辑:陈思敏)